To understand how the MVB pathway,

To understand how the MVB pathway, autophagy and proteasomal degradation cooperate during nutrient limitation, we first analyzed the starvation-induced degradation of model proteins in yeast.

To assess selective membrane protein degradation via the MVB pathway, we followed the ubiquitin-dependent endocytosis of the plasma membrane methionine permease, Mup1-GFP and its transport into the vacuole in response to starvation (for amino acids and nitrogen sources) (Beck et al., 1999; Menant et al., 2006; Jones et al., 2012). Under rich growth conditions Mup1-GFP is mainly found at the plasma membrane and very little is degraded (Figure 1A,B). Yet, within 3 hr after the onset of starvation the majority of Mup1-GFP was removed from the cell surface, delivered into vacuoles and degraded (Figure 1A,B). The proteolytic degradation of Mup1-GFP inside vacuoles released free GFP, which remained stable and was monitored by western blotting (Figure 1A). The starvation-induced delivery of Mup1-GFP into the vacuole was dependent on the ESCRT machinery but was not affected in an autophagy (atg8∆) mutant (Figure 1B). In an ESCRT (vps4∆) mutant, the MVB pathway was blocked and Mup1-GFP was not delivered into the vacuole but instead accumulated on the class E compartment and at the plasma membrane (Figure 1B).

- See more at: http://elifesciences.org/content/4/e07736.full#sthash.o8PsAY1C.dpuf

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เข้าใจวิธีการสลายตัวทางเดิน autophagy และ proteasomal MVB ความร่วมมือระหว่างธาตุอาหารจำกัด เราต้องวิเคราะห์ย่อยสลายทำให้เกิดความอดอยากของรูปแบบโปรตีนในยีสต์การประเมินย่อยสลายโปรตีนเยื่อเลือกผ่านทางเดิน MVB เราตาม endocytosis ขึ้นอยู่กับการ ubiquitin permease methionine พลาสมาเมมเบรน Mup1 GFP และขนส่งของเข้าไปในแวคิวโอลในการตอบสนองต่อความอดอยาก (สำหรับกรดอะมิโนและแหล่งไนโตรเจน) (เบ็ค et al., 1999 Menant และ al., 2006 โจนส์และ al., 2012) ภายใต้เงื่อนไขเติบโตรวย Mup1 GFP ส่วนใหญ่พบที่เยื่อพลาสมา และน้อยมากจะเสื่อมโทรม (รูปที่ 1A, B) ยัง ภายใน 3 ชั่วโมงหลังจากเริ่มมีอาการของความอดอยาก ของ Mup1 GFP ถูกเอาออกจากเซลล์ผิว ส่งเข้า vacuoles กเสื่อมโทรม (รูปที่ 1A, B) Mup1-GFP สร้าง proteolytic ภายใน vacuoles ออก GFP ฟรี ที่ยังคงมั่นคง และถูกตรวจสอบ โดยตะวันตก blotting วิธี (รูปที่ 1A) การทำให้เกิดความอดอยากส่ง Mup1 GFP เป็นแวคิวโอลถูกขึ้นอยู่กับเครื่องจักร ESCRT แต่ไม่ได้รับผลในการ mutant autophagy (atg8∆) (รูปที่ 1B) ในการ mutant ESCRT (vps4∆) ทางเดิน MVB ถูกบล็อก และ Mup1 GFP ไม่ส่งเข้าไปในแวคิวโอล แต่สะสม ในช่องชั้น E และเยื่อพลาสมา (รูปที่ 1B) แทน-ดูเพิ่มเติมได้ที่: http://elifesciences.org/content/4/e07736.full#sthash.o8PsAY1C.dpuf

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพื่อให้เข้าใจถึงวิธีการที่ทางเดิน MVB autophagy และการย่อยสลาย proteasomal ความร่วมมือระหว่างข้อ จำกัด สารอาหารที่เราวิเคราะห์การย่อยสลายความอดอยากที่เกิดขึ้นของโปรตีนในรูปแบบยีสต์. เพื่อประเมินการย่อยสลายโปรตีนเยื่อเลือกผ่านทางเดิน MVB เราตาม endocytosis ubiquitin ขึ้นอยู่กับของ เยื่อหุ้ม permease methionine, Mup1-GFP และการขนส่งไปสู่ ​​vacuole ในการตอบสนองต่อความอดอยาก (สำหรับกรดอะมิโนและแหล่งไนโตรเจน) (เบ็ค et al, 1999;.. Menant et al, 2006;. โจนส์ et al, 2012) ภายใต้สภาวะการเจริญเติบโตที่อุดมไปด้วย Mup1-GFP ส่วนใหญ่พบในเยื่อหุ้มและน้อยมากที่จะสลายตัว (รูปที่ 1A, B) แต่ภายใน 3 ชั่วโมงหลังจากที่เริ่มมีอาการของความอดอยากส่วนใหญ่ของ Mup1-GFP ถูกลบออกจากเซลล์ผิวที่มอบไว้ในแวคิวโอลและเสื่อมโทรม (รูปที่ 1A, B) การย่อยสลายโปรตีนของ Mup1-GFP ภายใน vacuoles การปล่อยตัวฟรี GFP ซึ่งยังคงมีเสถียรภาพและได้รับการตรวจสอบโดยตะวันตก blotting (รูปที่ 1A) ส่งความอดอยากที่เกิดขึ้นของ Mup1-GFP เข้า vacuole ก็ขึ้นอยู่กับเครื่องจักร ESCRT แต่ก็ไม่ได้รับผลกระทบใน autophagy (atg8Δ) กลายพันธุ์ (รูปที่ 1B) . ใน ESCRT (vps4Δ) กลายพันธุ์ทางเดิน MVB ถูกบล็อกและ Mup1-GFP ไม่ได้มอบไว้ในแวคิวโอล แต่สะสมแทนในช่องอีคลาสและในเมมเบรนพลาสม่า (รูปที่ 1B) - ดูเพิ่มเติมได้ที่: http: / /elifesciences.org/content/4/e07736.full#sthash.o8PsAY1C.dpuf

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เข้าใจว่า MVB ลูกรัก และการร่วมมือระหว่าง proteasomal อ ต้ฟาจีจำกัดสารอาหารที่เราแรกวิเคราะห์ความอดอยากที่เกิดการย่อยสลายของรูปแบบโปรตีนในยีสต์

เพื่อประเมินการใช้เมมเบรนโปรตีนผ่าน MVB ทางเดิน เราตามข้างนอกขึ้นอยู่กับเอนโดไซโทซิสของเยื่อหุ้มเซลล์ permease เมทไธโอนีน ,mup1 GFP และการขนส่งในแวคิวโอลในการตอบสนองต่อการอดอาหาร ( กรดอะมิโนและแหล่งไนโตรเจน ) ( Beck et al . , 1999 ; menant et al . , 2006 ; Jones et al . , 2012 ) ภายใต้เงื่อนไขการรวย mup1 GFP เป็นส่วนใหญ่พบในเยื่อหุ้มเซลล์และน้อยมากคือการสลายตัว ( รูปที่ 1A , B ) ยัง ภายใน 3 ชั่วโมง หลังจากเริ่มการอดอาหารส่วนใหญ่ของ mup1 GFP ถูกลบออกจากผิวเซลล์มอบไว้ในแวคิวโอลและเสื่อมโทรม ( รูปที่ 1A , B ) การย่อยสลายระ mup1 GFP ภายในแวคิวโอลปล่อยตัว GFP ฟรี ซึ่งยังคงมีเสถียรภาพและถูกตรวจสอบโดย Western blotting ( รูปที่ 1A ) ความหิวโหยจากการ mup1 GFP ในแวคิวโอลขึ้นอยู่กับ escrt เครื่องจักรแต่ไม่ได้รับผลกระทบในอ ต้ฟาจี ( atg8 ∆ ) กลายพันธุ์ ( รูปที่ 1A ) ใน escrt ( vps4 ∆ ) กลายพันธุ์ทางเดินที่ถูกบล็อก และ mup1 MVB GFP ได้มอบไว้ในแวคิวโอล แต่สะสมในชั้น E ช่องและที่เยื่อหุ้มเซลล์ ( รูปที่ 1A )

ดูเพิ่มเติมได้ที่ : http : / / elifesciences . org / เนื้อหา / 4 / e07736 เต็ม# sthash o8psay1c dpuf

. .