Expression profiles of genes coding

Expression profiles of genes coding for the antimicrobial peptides
(AMPs) Litsty PEN3 and lysozyme (GenBank accession numbers
AY351655 and CV699332, respectively) were analyzed by qPCR to examine
the general pattern of expression during the course of probiotic
candidate administration. During the third in vivo experiment 20 animals
were sampled from each tank at day 9 (around metamorphosis)
and 10 animals at day 19 (at the end of the larval rearing). Total RNA
was extracted using RNeasy columns (Qiagen) according to the
manufacturer's instructions. RNA quantity, purity and integrity were
verified spectrophotometrically (A260/A280) and by electrophoresis on
1% agarose gels. Quantitative PCRwas performed on an ABI 7300 system
as previously described (Labreuche et al., 2009). Amplification efficiencies
for all qPCR primers were determined according to Pfaffl (2001)
and the specificity of the PCR amplification verified from the melting
curve. Each run included the cDNA control, negative controls (total
RNA treated with DNase I), and blank controls (water). The relative
mRNA expression levels were determined using the two standard

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ส่วนกำหนดค่านิพจน์ของรหัสสำหรับเปปไทด์ต้านจุลชีพ(แอมป์) Litsty PEN3 และ lysozyme (GenBank ทะเบียนเลขAY351655 และ CV699332 ตามลำดับ) ได้วิเคราะห์ โดย qPCR การตรวจสอบรูปแบบทั่วไปของนิพจน์ในระหว่างหลักสูตรของโปรไบโอติกส์ผู้บริหาร ในสัตว์ทดลองที่สามในสัตว์ทดลอง 20มีตัวอย่างจากแต่ละถังวันที่ 9 (รอบการเปลี่ยนสัณฐาน)และสัตว์ 10 วัน 19 (ที่สุดของแม่ larval) อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดโดยใช้คอลัมน์ RNeasy (Qiagen) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต อาร์เอ็นเอปริมาณ ความบริสุทธิ์ และความมีตรวจสอบ spectrophotometrically (A260/A280) และ electrophoresis ใน1% agarose เจ ดำเนินการระบบ ABI 7300 PCRwas เชิงปริมาณเป็นอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Labreuche et al., 2009) ขยายประสิทธิภาพสำหรับไพรเมอร์ qPCR ทั้งหมดถูกกำหนดตาม Pfaffl (2001)และ specificity ขยาย PCR ตรวจสอบจากการละลายของเส้นโค้ง รันแต่ละรวม cDNA ควบคุม ควบคุม (รวมค่าลบอาร์เอ็นเอรับ DNase ฉัน), และว่างเปล่าควบคุม (น้ำ) ญาติระดับ mRNA นิพจน์ได้กำหนดใช้มาตรฐานสอง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การแสดงออกของยีนที่เข้ารหัสสำหรับเปปไทด์ต้านจุลชีพ
(แอมป์) Litsty PEN3 และไลโซไซม์ (GenBank หมายเลขภาคยานุวัติ
AY351655 และ CV699332 ตามลำดับ) ถูกนำมาวิเคราะห์โดย qPCR การตรวจสอบ
รูปแบบทั่วไปของการแสดงออกในช่วงของโปรไบโอติก
บริหารผู้สมัคร ในช่วงที่สามในการทดสอบร่างกาย 20 สัตว์
ที่ได้รับตัวอย่างจากแต่ละถังในวันที่ 9 (รอบการเปลี่ยนแปลง)
และ 10 สัตว์ในวันที่ 19 (ในตอนท้ายของการเลี้ยงตัวอ่อน) รวม RNA
ถูกสกัดโดยใช้คอลัมน์ RNeasy (Qiagen) ตาม
คำแนะนำของผู้ผลิต ปริมาณ RNA ความบริสุทธิ์และความสมบูรณ์ถูก
ตรวจสอบ spectrophotometrically (A260 / A280) และกระแสไฟฟ้า
1% agarose เจล PCRwas ปริมาณดำเนินการในระบบ ABI 7300
ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Labreuche et al., 2009) ประสิทธิภาพในการขยาย
สำหรับไพร qPCR ทั้งหมดถูกกำหนดตาม Pfaffl (2001)
และความจำเพาะของขยาย PCR ตรวจสอบจากการละลาย
เส้นโค้ง การทำงานในแต่ละรวมการควบคุมยีนควบคุมเชิงลบ (รวม
RNA รับการรักษาด้วย DNase I) และการควบคุมว่างเปล่า (น้ำ) ญาติ
ระดับการแสดงออกของ mRNA ได้รับการพิจารณาโดยใช้สองมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การแสดงออกของยีนรูปแบบรหัสสำหรับเปปไทด์ต้านจุลชีพ
( แอมป์ ) และ pen3 litsty ไลโซไซม์ ( ขนาดหนังสือและตัวเลข
ay351655 cv699332 ตามลำดับวิเคราะห์ข้อมูลโดย qpcr ตรวจสอบ
รูปแบบทั่วไปของการแสดงออกในระหว่างหลักสูตรของผู้สมัครใช้งาน

ในระหว่างที่สามในร่างกายสัตว์ทดลอง จำนวน 20
จากแต่ละถังที่ 9 ( รอบการเปลี่ยนแปลง )
10 สัตว์ที่ 19 วัน ( ในตอนท้ายของการเลี้ยงตัวอ่อน )
อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดโดยใช้คอลัมน์ rneasy ( เพิ่ม )
ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ปริมาณอาร์เอ็นเอ ความบริสุทธิ์ และความสมบูรณ์ของการตรวจสอบนี้ )
( a260 / a280 ) และโดยวิธีอิเล็กโทรโฟรีซีสบน
1 % เจลโรส . pcrwas เชิงปริมาณแสดงบนระบบ ABI 7300
ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( labreuche et al . , 2009 )การเพิ่มประสิทธิภาพสำหรับไพรเมอร์
qpcr ทั้งหมดถูกกำหนดตาม pfaffl ( 2001 )
และความจำเพาะของวิธี PCR ( ตรวจสอบได้จากการหลอม
โค้ง แต่ละคนวิ่งรวมการควบคุมยีนควบคุมเชิงลบ ( อาร์เอ็นเอทั้งหมด
การตรวจหา ADNase ฉัน ) , และการควบคุมเปล่า ( น้ำ ) ระดับการแสดงออกของญาติ
เป็นใช้ 2 มาตรฐาน