Extraction Protocol1. Weight out 0.

Extraction Protocol
1. Weight out 0.3 g of plant tissue
2. Place tissue on a clean glass slide. Chop the tissue into a paste using a clean
single edge razor blade. (we have also modified a Dremel Roto-tool for use as a
simple tissue homogenizer with good success)
3. Immediately transfer tissue to a 1.5 mL microcentrifuge tube (use Kontes
#749520-0090) and (optional) further grind tissue with a tube pestle (Kontes
#749521-1590)
4. Once the sample is prepared add 300 µL EBA, 900µl EBB, and 100 µl SDS.
5. Vortex and incubate at 65o
C for 10 min.
6. Place tube on ice and add 410 µL cold potassium acetate. Mix by inversion and
place tube back on ice for 3 min.
7. Centrifuge at 13,200 rpm for 15 min. (If possible, use a refrigerated microcentrifuge
set to 4o
C)
8. Transfer 1 mL of the supernatant to a new 1.5 mL microcentrifuge tube, add 540
µL of ice cold absolute isopropanol, and incubate in ice for 20 min.
9. Centrifuge at 10,200 rpm for 10 min. discard the supernatant. Wash the pellet
once in 500 µL 70% ethanol and let dry
10. Resuspend the dry pellet in 600 µL of TE. Add 60 µL 3M sodium acetate (pH 5.2)
and 360 µL ice cold absolute isopropanol. Incubate on ice for 20 min.
11. Repeat Steps 9−11 twice.
12. Resuspend the pellet in 50 µL TE and carry out agarose gel QC.
Agarose Gel QC
1. Cast a 1.0% (w/v) regular agarose gel in 1X TBE
2. Place 5 µL of extracted DNA and 5 µL sterile water
in a 0.2 mL microcentrifuge tube along with 2 µL of
gel tracking dye.
3. Run the gel for 20 min. at 100v.
4. Stain gel and view result.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แยกโพรโทคอล1. น้ำหนักออก 0.3 กรัมของเนื้อเยื่อพืช2. วางเนื้อเยื่อบนสไลด์แก้วที่สะอาด สับเนื้อเยื่อไปใช้สะอาดใบมีดโกนขอบเดียว (นอกจากนี้เรายังได้ปรับเปลี่ยนเป็น Dremel Roto-เครื่องมือสำหรับใช้เป็นเนื้อเยื่อง่าย homogenizer กับความสำเร็จที่ดี)3. โอนเนื้อเยื่อที่หลอดไมโคร 1.5 mL (ใช้ Kontes#749520-0090) และเนื้อเยื่อบดเพิ่มเติม (อุปกรณ์เสริม) พร้อมสากเป็นหลอด (Kontes#749521-1590)4. เมื่อมีความพร้อมตัวอย่าง เพิ่ม 300 µL EBA, 900µl ลดลง และ 100 µl SDS5. vortex และฟักที่ 65oC 10 นาที6. หลอดวางบนน้ำแข็ง และเพิ่ม 410 µL เย็นโพแทสเซียมอะซิเตท ผสม โดยการกลับ และวางท่อกลับบนน้ำแข็งเป็นเวลา 3 นาที7. เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 13,200 rpm สำหรับ 15 นาที (ถ้าเป็นไปได้ ใช้เป็นตู้เย็นไมโครตั้ง 4oC)8. 1 มล.ของ supernatant ถ่ายโอนไปใหม่ 1.5 mL หลอดไมโคร เพิ่ม 540µL ของ isopropanol แน่นอนเย็นน้ำแข็ง และฟักในน้ำแข็ง 20 นาที9. เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 10,200 rpm 10 นาทีละทิ้ง supernatant ล้างเม็ดใน 500 µL 70% เอทานอลและปล่อยให้แห้ง10. resuspend เม็ดแห้งใน µL 600 ของ TE เพิ่ม 60 µL 3M โซเดียมอะซิเตท (pH 5.2)และ 360 µL น้ำแข็งเย็นสัมบูรณ์ isopropanol ฟักในน้ำแข็ง 20 นาที11. ทำซ้ำขั้นตอน 9−11 สองครั้ง12. resuspend เม็ดใน 50 µL TE และดำเนินการเจ agarose QCเจ Agarose QC1. โยนเจล agarose ปกติ 1.0% (w/v) ใน 1 X TBE2. สถานที่ 5 µL สกัดดีเอ็นเอและน้ำหมัน 5 µL ในหลอดไมโคร 0.2 มล.พร้อมกับ 2 µL ของ เจติดตามย้อม3. เรียกใช้เจล 20 นาทีที่ 100v4. สีย้อมเจล และดูผลลัพธ์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สกัดพิธีสาร
1 น้ำหนักออก 0.3 กรัมของเนื้อเยื่อพืช
2 วางเนื้อเยื่อบนกระจกสไลด์สะอาด สับเนื้อเยื่อเป็นวางใช้ทำความสะอาด
ขอบใบมีดโกนเดียว (เราได้แก้ไขยังมี Dremel Roto เครื่องมือสำหรับใช้เป็น
โฮโมจีไนเนื้อเยื่อที่เรียบง่ายกับความสำเร็จที่ดี)
3 ทันทีโอนเนื้อเยื่อไปยังหลอดไมโคร 1.5 มิลลิลิตร (ใช้ Kontes
# 749520-0090) และ (อุปกรณ์เสริม) เนื้อเยื่อบดต่อกับสาก Tube (Kontes
# 749521-1590)
4 เมื่อกลุ่มตัวอย่างจะถูกจัดเตรียมเพิ่ม 300 ไมโครลิตร EBA, EBB 900μlและ 100 ไมโครลิตร SDS.
5 Vortex และบ่มเพาะที่ 65 °
C เป็นเวลา 10 นาที.
6 วางบนน้ำแข็งหลอดและเพิ่ม 410 ไมโครลิตรโพแทสเซียมอะซิเตทเย็น ผสมโดยผกผันและ
สถานที่ท่อกลับบนน้ำแข็งเป็นเวลา 3 นาที.
7 หมุนเหวี่ยงที่ 13,200 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 นาที (ถ้าเป็นไปได้ใช้ไมโครตู้เย็น
ชุด 4o
C)
8 การถ่ายโอน 1 มิลลิลิตรของสารละลายเพื่อใหม่ 1.5 หลอดไมโครมลเพิ่ม 540
ไมโครลิตรของน้ำแข็ง isopropanol แน่นอนเย็นและฟักไข่อยู่ในน้ำแข็งเป็นเวลา 20 นาที.
9 หมุนเหวี่ยงที่ 10,200 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาที ทิ้งใส ล้างเม็ด
ครั้งใน 500 ไมโครลิตรเอทานอล 70% และปล่อยให้แห้ง
10 Resuspend เม็ดแห้งใน 600 ไมโครลิตรของ TE เพิ่ม 60 ไมโครลิตร 3M โซเดียมอะซิเตท (pH 5.2)
และ 360 ไมโครลิตรเย็น isopropanol แน่นอน ฟักบนน้ำแข็งเป็นเวลา 20 นาที.
11 ทำซ้ำขั้นตอนที่ 9-11 ครั้งที่สอง.
12 Resuspend เม็ดใน 50 ไมโครลิตร TE และดำเนินการ QC agarose เจล.
Agarose Gel QC
1 โยน 1.0% (w / v) เจล agarose ปกติใน 1X TBE
2 วาง 5 ไมโครลิตรของ DNA ที่สกัดและ 5 ไมโครลิตรน้ำหมัน
ในหลอด 0.2 มลไมโครพร้อมกับ 2 ไมโครลิตรของ
การติดตามเจลสีย้อม.
3 เรียกใช้เจลเป็นเวลา 20 นาที ที่ 100V.
4 เจลสีย้อมและผลที่มุมมอง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ขั้นตอนการสกัด1 . น้ำหนักออก 0.3 กรัมเนื้อเยื่อพืช2 . สถานที่สะอาดเนื้อเยื่อบนกระจกสไลด์ . ตัดเนื้อเยื่อลงในวางการใช้ทำความสะอาดขอบเดียวมีดโกนใบมีด ( เรายังแก้ไข dremel Roto เครื่องมือสำหรับใช้เป็นHomogenizer เนื้อเยื่อง่ายกับความสำเร็จที่ดี )3 . ย้ายเนื้อเยื่อ 1.5 ml ( ใช้ kontes หลอดไมโครเซนตริฟิวจ์# 749520-0090 ) และ ( ถ้ามี ) ต่อไปบดด้วยสาก ( kontes หลอดทิชชู่# 749521-1590 )4 . เมื่อตัวอย่างเตรียมเพิ่ม 300 µแอลอี , 900 µผมลดลง , และ 100 µ L SDS .5 . 65o vortex และบ่มเพาะที่องศาเซลเซียส เป็นเวลา 10 นาที6 . สถานที่ท่อแข็งและเพิ่ม 410 µฉันหนาวโพแทสเซียมอะซิเทต โดยการผสมและท่อวางกลับบนน้ำแข็งนาน 3 นาที7 . เครื่อง 200 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 นาที ( ถ้าเป็นไปได้ ใช้ตู้เย็นไมโครเซนตริฟิวจ์ชุด 4oc )8 . โอน 1 มิลลิลิตรของน่านเพื่อใหม่ 1.5 ml หลอดไมโครเซนตริฟิวจ์ เติม 540µผมเย็นสัมบูรณ์ไอโซโพรพานอล และบ่มน้ำแข็งใน 20 นาที9 . เครื่อง 10200 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีทิ้งน่าน . ซักเม็ดเมื่อ 500 µผม 70% เอทานอลและปล่อยให้แห้ง10 . resuspend เม็ดแห้ง ใน 600 µ L ของเต้ เพิ่ม 60 µผม 3M โซเดียมอะซิเตต ( pH 5.2 )และ 360 µผมเย็นสัมบูรณ์ไอโซโพรพานอล . ฟักไข่บนน้ำแข็ง 20 นาที11 . ทำซ้ำขั้นตอนที่ 9 − 11 ครั้ง12 . resuspend เม็ด 50 µ l te และดำเนินการเจล QCเจล .1 . โยน 1.0 % ( w / v ) เจล ( ปกติใน 1X ทีบี2 . สถานที่ 5 µล. สกัดดีเอ็นเอและ 5 ลิตรน้ำµเป็นหมันใน 0.2 ml 2 หลอดไมโครเซนตริฟิวจ์ พร้อมกับ µล.ติดตาม เจลสี3 . ใช้เจลสำหรับ 20 นาทีที่ 100V .4 . เจลคราบ และดูผล