Characterization of Polyclonal Anti

Characterization of Polyclonal Antibodies inhibitor; and lane 4, control sample incubated for 30 min at 308C.
Specific to Doublecortin In lanes 1 and 2, the upper doublet of Doublecortin bands are susceptible
to alkaline phosphatase treatment. Two different polyclonal antibody preparations, one di- (C) Anti-N-term antibodies were used to probe extracts from primary
rected against synthetic peptides (anti-Doublecortin cultures of mouse brain neurons grown for 2, 6, 9, 12, 18, 24, and
pep) and the other against an N-terminal fusion protein 30 days. Doublecortin expression diminishes with increasing time
(anti-N-term), were used to detect Doublecortin. As in culture.
shown in Figure 1A, anti-Doublecortin pep antibodies (D) The same extracts as in (C) were screened with antibody, GT335
reveal in human fetal brain a band of approximately 40 specific for glutamylated tubulin (Anti-glutamyl tubulin).
kDa, which is the predicted molecular weight of Doublecortin.
In mouse extracts from E12.5 to newborn, a
band of the same size and higher molecular weight which revealed an expression in young neurons that
bands were detected (the upper band is a doublet as diminishes with neuronal maturation and is undetectshown
in Figure 1B). These bands were absent at E10.5 able in extracts from24- and 30-day-old cultures (Figure
and in the adult indicating that Doublecortin expression 1C). Phosphorylated forms of Doublecortin were obis
developmentally regulated. The bands detected are served as noted previously with the mouse tissue exlikely
to be specific since preincubation of antisera with tracts. An antibody, GT335, directed at glutamylated
the synthetic peptides completely blocked the detection tubulin was used in parallel against the same extracts:
of all bands, and preimmune sera gave no signal on the a band of 50 kDa (corresponding to ab-tubulin) was
Western blots. The presence of several bands (Figure detected in all samples (Figure 1D),with a slight increase
1B) suggests that Doublecortin may be posttransla- in expression with time in culture, as expected during
tionally modified. Treatment of neonatal mouse brain neuronalmaturation (Audebert et al., 1994). Hence, Douprotein
extracts with alkaline phosphatase led to the blecortin is only detected in young differentiating neudisappearance
of the upper doublet (Figure 1B). Addi- rons in culture. Western blot analysis was also pertion
of sodium pyrophosphate, a phosphatase inhibitor, formed on cultured glial cells obtained from newborn
prior to the phosphatase, resulted in the detection of all mice, and no Doublecortin was detected, confirming
bands. Hence, Doublecortin exists in a phosphorylated that its expression is specific to neurons (data shown
form, and indeed several potential phosphorylation sites in Figure 5).
were previously predicted

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สมบัติของสารยับยั้งแอนตี้ Polyclonal และเลน 4 ตัวอย่างควบคุม incubated สำหรับที่ 308 ราว 30 นาทีเฉพาะ Doublecortin ในถนนหนทาง 1 และ 2 คำซ้อนในภาษาที่ด้านบนของวง Doublecortin มีความไวต่อการรักษาอัลคาไลน์ฟอสฟาเตส สองเตรียม polyclonal แอนติบอดีแตกต่างกัน หนึ่งดิ - แอนตี้ (C) ต่อต้าน-N-ระยะเคยใช้โพรบแยกจากหลักrected กับเปปไทด์สังเคราะห์ (Doublecortin ต่อต้านวัฒนธรรมของเมาส์สมอง neurons โต 2, 6, 9, 12, 18, 24 และpep) และอื่น ๆ กับโปรตีนฟิวชั่นเป็นเทอร์มินัล N 30 วัน Doublecortin นิพจน์ค่อย ๆ หายไป ด้วยการเพิ่มเวลา(anti-N-ระยะ), ใช้ในการตรวจหา Doublecortin เป็นในวัฒนธรรมแสดงในรูปที่ 1A, anti-Doublecortin pep แอนตี้ (D) ตรงแยกใน (C) ได้ฉายกับแอนติบอดี GT335เปิดเผยในครรภ์สมองมนุษย์วงประมาณ 40 เฉพาะสำหรับ glutamylated tubulin (Anti-กลูตามิ tubulin)kDa ซึ่งมีน้ำหนักโมเลกุลการคาดการณ์ของ Doublecortinในสารสกัดเมาส์จาก E12.5 ทารก การวงขนาดเท่ากันและน้ำหนักโมเลกุลสูงซึ่งค่า neurons หนุ่มเปิดเผยที่พบวงดนตรี (วงด้านบนเป็นคำซ้อนในภาษาค่อย ๆ หายไปกับพ่อแม่ neuronal และเป็น undetectshownในรูปที่ 1B) วงเหล่านี้ได้ขาดงานไปที่ E10.5 ได้ในสารสกัดจากวัฒนธรรม from24 - และ 30-เก่า (รูปกในผู้ใหญ่การแสดงนิพจน์ Doublecortin ที่ 1 C) รูปแบบ Doublecortin phosphorylated obisควบคุม developmentally วงที่ตรวจพบให้บริการตามที่ระบุไว้ก่อนหน้านี้กับ exlikely เนื้อเยื่อเมาส์มีเฉพาะตั้งแต่ preincubation antisera กับรามิด มีแอนติบอดี GT335 ที่ glutamylatedเปปไทด์สังเคราะห์ทั้งหมดถูกบล็อคการตรวจพบ tubulin ถูกใช้ควบคู่กับสารสกัดเดียวกัน:ของวงทั้งหมด และ preimmune จะไม่มีสัญญาณในการมีวงดนตรีของ 50 kDa (ตรงกับ ab tubulin)เวสเทิร์น blots ของหลายวง (รูปที่ตรวจพบในตัวอย่างทั้งหมด (รูปที่ 1D), การเพิ่มขึ้นเล็กน้อย1B) แนะนำว่า Doublecortin อาจจะ posttransla-ในนิพจน์ ด้วยเวลาในวัฒนธรรม ตามที่คาดไว้ในช่วงtionally ที่ปรับเปลี่ยน รักษาเมาส์ทารกแรกเกิดสมอง neuronalmaturation (Audebert et al., 1994) ดังนั้น Douproteinสารสกัด ด้วยอัลคาไลน์ฟอสฟาเตสที่นำไปสู่ blecortin ตรวจพบเฉพาะในขึ้นต้น neudisappearance หนุ่มของด้านบนคำซ้อนในภาษา (รูปที่ 1B) Addi - rons ในวัฒนธรรมนั้น วิเคราะห์คืนในตาตะวันตกยังเป็น pertionของโซเดียม pyrophosphate ผลเป็นฟอสฟาเตส ที่เกิดขึ้นในเซลล์ glial อ่างที่ได้รับจากทารกก่อนฟอสฟาเตส ผลในการตรวจจับของหนูทั้งหมด และ Doublecortin ไม่พบ ยืนยันวงการ ดังนั้น Doublecortin มีอยู่ในตัว phosphorylated ว่านิพจน์ของ neurons (แสดงข้อมูลเฉพาะแบบฟอร์ม และแน่นอนหลายเว็บไซต์ phosphorylation เป็นไปในรูปที่ 5)ได้คาดการณ์ไว้ก่อนหน้านี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ลักษณะของการยับยั้งโพลีโคลนอแอนติบอดี; และช่องทางที่ 4 ตัวอย่างการควบคุมบ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่ 308C.
เฉพาะ Doublecortin ในเลนที่ 1 และ 2, คู่บนของวงดนตรีที่มีความอ่อนไหวต่อ Doublecortin
การรักษาด่าง phosphatase ที่แตกต่างกันสองเตรียมแอนติบอดีโพลีหนึ่งดิ (C) แอนติบอดีต่อต้าน-N-ระยะถูกนำมาใช้ในการตรวจสอบสารสกัดจากหลัก
rected กับเปปไทด์สังเคราะห์ (วัฒนธรรมต่อต้าน Doublecortin ของเซลล์ประสาทสมองเมาส์ปลูก 2, 6, 9, 12, 18, 24
และให้กำลังใจ) และอื่น ๆ กับโปรตีนฟิวชั่น N-มินัล 30 วัน การแสดงออก Doublecortin ลดลงตามระยะเวลาที่เพิ่มขึ้น
(anti-N-ยาว) ถูกนำมาใช้ในการตรวจสอบ Doublecortin ในขณะที่วัฒนธรรม.
แสดงในรูปที่ 1A, ต่อต้าน Doublecortin แอนติบอดีห้าวหาญ (D) สารสกัดเดียวกับ (C) ได้รับการคัดเลือกที่มีแอนติบอดี GT335
เปิดเผยในสมองของทารกในครรภ์ของมนุษย์กลุ่มหนึ่งประมาณ 40 ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับ glutamylated tubulin (anti-glutamyl tubulin ).
kDa ซึ่งเป็นที่คาดการณ์น้ำหนักโมเลกุล Doublecortin.
ในสารสกัดจากเมาส์เพื่อ E12.5
แรกเกิดเป็นวงดนตรีที่มีขนาดเดียวกันและน้ำหนักโมเลกุลที่สูงขึ้นซึ่งเผยให้เห็นการแสดงออกในเซลล์ประสาทหนุ่มสาวที่ได้รับการตรวจพบวงดนตรี (วงบนเป็น doublet เป็นลดลงกับการเจริญเติบโตของเซลล์ประสาทและ undetectshown ในรูปที่ 1B) วงดนตรีที่เหล่านี้เป็นที่ขาด E10.5 สามารถในสารสกัดจาก from24- และวัฒนธรรม 30 วันเก่า (รูปและในผู้ใหญ่ที่ระบุว่าการแสดงออกDoublecortin 1C) รูปแบบของ phosphorylated Doublecortin เป็น OBIS ควบคุมการพัฒนา วงดนตรีที่ตรวจพบจะได้รับตามที่ระบุไว้ก่อนหน้านี้กับเนื้อเยื่อเมาส์ exlikely จะเฉพาะเจาะจงตั้งแต่ preincubation ของ antisera กับสถานที่ แอนติบอดี, GT335 กำกับที่ glutamylated เปปไทด์สังเคราะห์สมบูรณ์บล็อก tubulin การตรวจสอบที่ใช้ในแบบคู่ขนานกับสารสกัดเดียวกันของวงทั้งหมดและซีรั่มpreimmune ให้สัญญาณไม่เกี่ยวกับวงดนตรีของ 50 กิโลดาลตัน (ที่สอดคล้องกับ AB-tubulin) ได้เวสเทิร์ blots การปรากฏตัวของวงดนตรีที่หลายคน (รูปที่ตรวจพบในตัวอย่างทั้งหมด (รูปที่ 1D) มีการเพิ่มขึ้นเล็กน้อยที่1B) แสดงให้เห็นว่าอาจจะ Doublecortin posttransla- ในการแสดงออกที่มีเวลาในการเพาะเลี้ยงตามที่คาดไว้ในช่วงการปรับเปลี่ยนทีไม่เท่าเทียม การรักษาเมาส์ทารกแรกเกิดสมอง neuronalmaturation (Audebert et al., 1994) ดังนั้น Douprotein สารสกัดด้วยด่าง phosphatase นำไปสู่การ blecortin มีการตรวจพบเฉพาะใน neudisappearance แตกต่างหนุ่มของคู่บน(รูปที่ 1B) Rons แก้ที่ดีนอกจากในวัฒนธรรม การวิเคราะห์ดวงตะวันก็ยัง pertion ของ pyrophosphate โซเดียมยับยั้ง phosphatase ที่เกิดขึ้นในเซลล์ glial เพาะเลี้ยงที่ได้รับจากแรกเกิดก่อนที่จะphosphatase ส่งผลในการตรวจสอบของหนูทั้งหมดและไม่มี Doublecortin ตรวจพบยืนยันวงดนตรี ดังนั้น Doublecortin อยู่ใน phosphorylated ว่าการแสดงออกของมันคือการที่เฉพาะเจาะจงกับเซลล์ประสาท (ข้อมูลที่แสดงให้เห็นถึงรูปแบบและหลายเว็บไซต์ที่อาจเกิดขึ้นแน่นอนphosphorylation ในรูปที่ 5). ได้รับการคาดการณ์ก่อนหน้านี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การใช้แอนติบอดียับยั้ง และช่องที่ 4 ตัวอย่างควบคุมอุณหภูมิสำหรับ 30 นาทีที่ 308c .เฉพาะ doublecortin ในเลน 1 และ 2 , ดับเลตบนของ doublecortin วงไวการรักษาใบด่าง สองแตกต่างกันการเตรียมแอนติบอดีโพลี , di - ( C ) anti-n-term แอนติบอดีที่ใช้ตรวจสอบสารสกัดจากหลักกำกับต่อเปปไทด์สังเคราะห์ ( ต่อต้านวัฒนธรรมของ doublecortin เมาส์เซลล์ประสาทสมองโต 2 , 6 , 9 , 12 , 18 , 24 , และความห้าวหาญ ) และอื่น ๆ กับของกรดอะมิโนของโปรตีน 30 วัน การแสดงออก doublecortin ลดลงกับเวลาที่เพิ่มขึ้น( anti-n-term ) , ถูกใช้เพื่อตรวจสอบ doublecortin . ในวัฒนธรรมแสดงในรูปที่ 1A , ต่อต้าน doublecortin pep แอนติบอดี ( D ) สารสกัดเดียวกับใน ( C ) มี gt335 กับแอนติบอดี ,เปิดเผยในมนุษย์สมองทารกในครรภ์วงประมาณ 40 ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับ glutamylated ทูบูลิน ( ทูบูลินต่อต้าน glutamyl )ดาลตันซึ่งเป็นการทำนายน้ำหนักโมเลกุล doublecortin .สารสกัดจาก e12.5 เมาส์เพื่อทารกแรกเกิด ,วงดนตรีของขนาดเดียวกัน และสูงกว่าโมเลกุลซึ่งพบการแสดงออกในเซลล์ที่ยังแถบตรวจพบ ( แถบบนเป็นดับเลตเป็นจีบกับลักษณะการเจริญเติบโตและ undetectshownในรูป 1B ) วงนี้ขาดที่ e10.5 สามารถในการสกัดแป้งและวัฒนธรรมอายุ 30 วัน ( รูปและในผู้ใหญ่ที่ระบุว่า doublecortin การแสดงออก 1C ) รูปแบบของ doublecortin เป็น obis ฟอสฟอรีเลเตตได้รับการควบคุม แถบตรวจให้บริการตามที่ระบุไว้ก่อนหน้านี้ด้วยเมาส์ exlikely เนื้อเยื่อเป็นเฉพาะเมื่อพบของแอนติกับสถานที่ . แอนติบอดีที่ glutamylated gt335 , กำกับและเปปไทด์สังเคราะห์บล๊อคตรวจหาทูบูลินใช้ในขนานกับสารสกัดเดียวกัน :ทุกวง และ preimmune เซร่าให้ไม่มีสัญญาณบน วงดนตรีของ 50 กิโลดาลตัน ( สอดคล้องกับ AB ทูบูลิน ) คือblots ตะวันตก การแสดงวงดนตรีหลายแห่ง ( รูปที่ตรวจพบในตัวอย่างทั้งหมด ( คิดดี ) , กับการเพิ่มขึ้นเล็กน้อย1B ) ชี้ให้เห็นว่า doublecortin อาจจะ posttransla - ในการแสดงออกกับเวลาในช่วงวัฒนธรรม ตามคาดtionally แก้ไข การรักษาทารกแรกเกิดเมาส์ สมอง neuronalmaturation ( audebert et al . , 1994 ) ดังนั้น douproteinสารสกัดด้วยอัลคาไลน์ ฟอสฟาเตส นำไปสู่ blecortin เท่านั้นที่ตรวจพบในเด็กทั้ง neudisappearanceของดับเลตด้านบน ( รูปที่ 1A ) addi - รอนในวัฒนธรรม การวิเคราะห์ Western blot ยัง pertionโซเดียมไพโร , phosphatase ซึ่งเกิดขึ้นใน glial ที่ได้จากเพาะเลี้ยงทารกแรกเกิดก่อนที่จะมีการเปลี่ยนแปลง ทำให้ในการตรวจหาของหนู และไม่ doublecortin ตรวจพบ ยืนยันวงดนตรี ดังนั้น doublecortin ที่มีอยู่ในฟอสฟอรีเลเตตที่การแสดงออกเฉพาะเซลล์ประสาท ( ข้อมูลที่แสดงแบบฟอร์ม และแน่นอนหลายศักยภาพกรุงเทพมหานครเว็บไซต์ในรูปที่ 5 )ก่อนหน้านี้คาดการณ์ไว้