Protein Extraction and Preparation

Protein Extraction and Preparation of Protein Hydrolysates from Rice with Low Phenylalanine Content
Aiming the introduction of rice in the phenylketonurics diet, the protein extraction and phenylalanine (Phe) removal processes were studied. For protein extraction, an enzymatic method was used and for Phe removal, a papain and an Activated Carbon (AC) were used. The influence of protein:AC ratio, type and way of using AC was tested. The efficiency of Phe removal was evaluated by second derivative spectrophotometry. The results showed that the condition which gave the highest protein extraction yield (63.4%) was that using a sample concentration of 1:10 (w/v) at a temperature of 50°C, as well as an enzyme:substrate ratio of 10:100 at a reaction time of 5 h. Activated carbon was efficient for removing Phe, leading to values above 70% for most of the samples and the best result (94.1% of Phe removal) was found for a protein:AC ratio of 1:88, using simultaneously three types of AC (20x50, 12x25, 6x12 mesh), which led to a final Phe content of 82.5 mg kg-1 of hydrolysate.
MATERIALS AND METHODS

A commercial rice flour was kindly furnished by Ferla-L. Ferenczi (São Paulo, SP, Brasil). A protease from B. licheniformis (EC 3.4.21.14) was kindly furnished by Prozyn (São Paulo, SP, Brazil). A papain (EC 3.4.22.2) was kindly furnished by AB Enzymes of Brazil (Barueri, SP, Brazil). L-pheylalanine, L-tyrosine and L-tryptophan were purchased from Sigma (St. Louis, MO, USA). Activated carbon (granulated, n. 119, 20x50, 12x25, 6x12 mesh) was purchased from Carbomafra S.A (Curitiba, PR, Brazil).

This research project was conducted from January to December, 2008, in the Laboratório de Bromatologia/Pesquisa da Faculdade de Farmácia-Universidade Federal de Minas Gerais.

Determination of the Chemical Composition of Rice Flour
The contents of moisture, protein, lipid, minerals and dietary fiber were determined according to the Association of Official Agricultural Chemists methods (AOAC, 1995). The carbohydrates were calculated by difference. The conversion factor of nitrogen to protein was 5.95 (Nielsen, 1998).

Enzymatic Extraction of Proteins
Initially, the sample was mixed with water in three different concentrations (1:3, 1:5 and 1:10, w/v) and a quantity of sodium benzoate was added to obtain a final concentration of 0.1 g 100 mL-1. After the adjustment of pH to 10.5 with a 3 mol L-1 sodium hydroxide solution, the mixture was set on an oil bath at 50°C, under stirring. The protease from Bacillus licheniformis was added at two E:S ratios (5:100 and 10:100) and the protein extraction was performed for 5 h. Then, the mixture was centrifuged at 1,700 x g for 15 min, at 25°C and between each centrifugation, the residue was washed with water (Capobiango et al., 2007). Finally, the residue was separated from the supernatant, freeze-dried (Freezone freeze-dryer, 77500 model, Labconco, Kansas City, USA) and its protein content was determined (AOAC, 1995).
Preparation of Protein Hydrolysate
The enzymatic hydrolysates were prepared from Rice Protein Extract (RPE) solution using papain. The pH was measured (7.4), the solution was set on an oil bath at 60°C, under stirring and the enzyme was added in such a concentration to attain an enzyme:substrate ratio (E:S) of 4:100. After 5 h of hydrolysis, the reaction was stopped by heating in a water-bath at 80°C for 20 min (Soares et al., 2006). Finally, the hydrolysate was freeze-dried.

Removal of Phenylalanine from Protein Hydrolysate
The removal of Phe from protein hydrolysates using activated carbon was described before by our group (Soares et al., 2006). Briefly, the activated carbon was previously hydrated for 10 min and placed inside a disposable syringe of 20 mL containing a filter of nylon and wool glass, manufactured in our laboratory. Then, the hydrolysate was passed through the syringe under pression (compressor Diapump, Fanem, 089-A model, number BE11778, São Paulo, SP, Brazil).

Evaluation of the Efficiency of Phe Removal
For evaluating the efficiency of Phe removal, its content in rice flour and in its hydrolysate was estimated by Second Derivative Spectrophotometry (SDS), as described before by our group (Lopes et al., 2005). Briefly, the samples were hydrolysed (5.7 mol L-1 HCl, 110°C, 24 h) and their absorbance measured from 250 to 280 nm. Second derivative spectra were drawn (Cecil spectrophotometer, CE2041 model, Buck Scientific, England) and the area of a negative peak was used to calculate the amount of Phe in the samples, employing a standard curve. In case of protein hydrolysate, this same procedure was employed after the treatment with activated carbon. A software GRAMS-UV (Galactic Industries Corporation, Salem, NH, USA) was used to draw the second derivative spectra. For the standard curve, stock solutions of Phe (6.05x10-4 mol L-1), Tyr (5.52x10-4 mol L-1) and Trp (4.90x10-4 mol L-1) were prepared in the same buffer solutions cited above. Then, 10 mL of each solution were mixed and successive dilutions of this mixture were made to have Phe concentrations in a range from 0.13 to 1.01x10-4 mol L-1. Spectra of these diluted solutions were recorded from 250 to 280 nm the area of third negative peak of Phe spectra were plotted in function of its concentration.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

โปรตีนสกัดและการเตรียมการของ Hydrolysates โปรตีนจากข้าวมี Phenylalanine ต่ำเนื้อหาเล็งนำข้าวสารอาหาร phenylketonurics สกัดโปรตีนและกระบวนการกำจัด phenylalanine (เพ) ได้ศึกษาการ สำหรับโปรตีนสกัด วิธีเอนไซม์ในระบบการใช้ และสำหรับเพ มีเอนไซม์ปาเปนและคาร์บอน (AC) ใช้ อิทธิพลของอัตราส่วนโปรตีน: AC ชนิด และลักษณะของการใช้ AC ได้รับการทดสอบ ประสิทธิภาพการกำจัดเพถูกประเมิน โดย spectrophotometry สองแบบ ผลพบว่า เงื่อนไขที่ให้จะสูงโปรตีนสกัดผลผลิต (ร้อยละ 63.4%) มีที่ใช้อย่างเข้มข้น 1:10 (w/v) ที่อุณหภูมิ 50 องศาเซลเซียส ตลอดจนการอัตราส่วนเอนไซม์: พื้นผิวของ 10:100 ที่ปฏิกิริยาของ h. 5 คาร์บอนมากสำหรับเอาเพ นำค่าข้างต้น 70% สำหรับส่วนมากของตัวอย่าง และผลสุด (94.1% ลบเพ) พบในโปรตีน: อัตราส่วน AC 1:88, AC (20 x 50, 12 x 25, 6 x 12 ตาข่าย), ซึ่งนำไปสู่เนื้อหาเพเป็นขั้นสุดท้ายของ 1 กิโลกรัม 82.5 มิลลิกรัมของด้วย กันสามชนิดโดยใช้วัสดุและวิธีการแป้งข้าวเพื่อการค้าได้กรุณาโดย Ferla L. Ferenczi (เซาเปาลู SP, Brasil) รติเอสจากเกิด licheniformis (EC 3.4.21.14) กรุณาตกแต่ง โดย Prozyn (เซาเปาลู SP บราซิล) พาเพอิน (EC 3.4.22.2) ได้กรุณาโดย AB เอนไซม์ของบราซิล (Barueri, SP บราซิล) L pheylalanine, L tyrosine และทริปโตเฟน L ซื้อจากซิก (St. Louis, MO สหรัฐอเมริกา) คาร์บอน (119 ตอนเหนือ ทราย 20 x 50, 12 x 25, 6 x 12 ตาข่าย) ถูกซื้อจากเอสเอ Carbomafra (Curitiba, PR บราซิล)โครงการวิจัยนี้ได้ดำเนินการจากเดือนมกราคมถึงธันวาคม 2551 ในเดอกลางดา Faculdade de Farmácia Universidade de Laboratório Bromatologia/Pesquisa Minas Geraisกำหนดองค์ประกอบทางเคมีของแป้งข้าวเจ้าเนื้อหาของความชื้น โปรตีน ไขมัน เกลือแร่ และใยอาหารถูกกำหนดตามวิธีการสมาคมของทางเกษตรนักเคมี (AOAC, 1995) คาร์โบไฮเดรตถูกคำนวณ โดยความแตกต่าง ตัวแปลงหน่วยนับของไนโตรเจนกับโปรตีนถูก 5.95 (นีล 1998)โปรตีนสกัดเอนไซม์ในระบบเริ่มแรก ตัวอย่างถูกผสมน้ำสามแตกต่างความเข้มข้น (1:3, 1:5 และ 1:10, w/v) และมีเพิ่มปริมาณของโซเดียม benzoate เพื่อให้ได้ความเข้มข้นสุดท้ายของ 0.1 g 100 mL-1 หลังจากการปรับปรุง pH 10.5 กับโมล 3 โซลูชันโซเดียมไฮดรอกไซด์ L 1 ส่วนผสมถูกตั้งค่าบนการน้ำน้ำมันที่ 50 องศาเซลเซียส ภายใต้กวน รติเอสจาก licheniformis คัดเข้ามาที่สองอัตรา E:S (5:100 และ 10:100) และทำการสกัดโปรตีนสำหรับ 5 h แล้ว ส่วนผสมถูก centrifuged ที่ 1700 x g สำหรับ 15 นาที ที่ 25° C และระหว่างแต่ละ centrifugation สารตกค้างถูกล้าง ด้วยน้ำ (Capobiango et al., 2007) สุดท้าย สารตกค้างถูกแยกออกจาก supernatant อบแห้ง (หยุดเป่า Freezone, 77500 รุ่น Labconco แคนซัสซิตี้ สหรัฐอเมริกา) และกำหนดเนื้อหาโปรตีน (AOAC, 1995)การเตรียมการของโปรตีนด้วยHydrolysates เอนไซม์ในระบบถูกเตรียมจากข้าวโปรตีนสกัด (RPE) โซลูชันที่ใช้พาเพอิน PH ที่วัด (7.4), โซลูชั่นถูกตั้งค่าบนการน้ำน้ำมันที่° C 60 ภายใต้กวน และเอนไซม์ถูกเพิ่มในเข้มข้นดังกล่าวจะบรรลุการอัตราเอนไซม์: พื้นผิว (E:S) ของ 4:100 หลังจาก h 5 ของไฮโตรไลซ์ ปฏิกิริยาถูกหยุดลง โดยเครื่องทำความร้อนในห้องน้ำที่ 80° C สำหรับ 20 นาที (Soares et al., 2006) สุดท้าย ด้วยการมีกรอบเอาของ Phenylalanine จากโปรตีนด้วยการลบเพ hydrolysates โปรตีนโดยใช้คาร์บอนจากถูกอธิบายก่อนตามกลุ่มของเรา (Soares et al., 2006) สั้น ๆ คาร์บอนก่อนหน้านี้ hydrated สำหรับ 10 นาที และวางภายในเข็มผ้าอ้อมของ 20 mL ประกอบด้วยตัวกรองแก้วไนลอนและผ้าขนสัตว์ ผลิตในห้องปฏิบัติการของเรา แล้ว ด้วยการส่งผ่านเข็มใต้ pression (ปั๊ม Diapump, Fanem, 089-A รุ่น หมายเลข BE11778 เซาเปาลู SP บราซิล)การประเมินประสิทธิภาพของเอาเพการประเมินประสิทธิภาพของเอาเพ เนื้อหา ในแป้งข้าวเจ้า และด้วยความได้ประมาณโดยสองอนุพันธ์ Spectrophotometry (SDS), ตามที่อธิบายไว้ก่อนตามกลุ่มของเรา (Lopes และ al., 2005) สั้น ๆ hydrolysed (5.7 โมล HCl L 1, 110° C, 24 h) เก็บตัวอย่างดี และ absorbance ของวัด 250 280 nm แรมสเป็คตราแบบที่สองถูกวาด (เซซิลเครื่องทดสอบกรดด่าง รุ่น CE2041 วิทยาศาสตร์ อังกฤษบัค) และสูงสุดลบพื้นที่ถูกใช้เพื่อคำนวณจำนวนของเพในตัวอย่าง การใช้เส้นโค้งมาตรฐาน กรณีโปรตีนด้วย กระบวนการเดียวกันนี้ถูกทำงานหลังจากรักษาด้วยคาร์บอน ซอฟต์แวร์กรัม-UV (บริษัทอุตสาหกรรมกาแลกติก Salem, NH สหรัฐอเมริกา) ถูกใช้เพื่อดึงแรมสเป็คตราแบบสอง สำหรับเส้นโค้งมาตรฐาน หุ้นโซลูชั่นเพ (6.05x10-4 โมล L 1), Tyr (5.52x10-4 โมล L 1) และ Trp (4.90x10-4 โมล L 1) ถูกเตรียมไว้ในโซลูชั่นบัฟเฟอร์เดิมที่อ้างข้างต้น แล้ว 10 mL ของแต่ละถูกผสม และ dilutions ต่อ ๆ มาของส่วนผสมนี้ทำให้เพความเข้มข้นในช่วงจาก 0.13 โมล 1.01x10-4 L-1 แรมสเป็คตราโซลูชั่นเหล่านี้แตกออกได้บันทึก 250-280 nm ตั้งของแรมสเป็คตราสูงสุดสามลบเพถูกพล็อตในฟังก์ชันของความเข้มข้นของการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การสกัดโปรตีนและการเตรียมความพร้อมของโปรตีนไฮโดรไลเสทจากข้าวที่มีเนื้อหาฟีนิลอะลาต่ำ
เล็งแนะนำของข้าวในอาหาร phenylketonurics สกัดโปรตีนและฟีนิล (เพ) กระบวนการการกำจัดการศึกษา สำหรับการสกัดโปรตีนวิธีเอนไซม์ถูกนำมาใช้และการกำจัดเพปาเปนและถ่านกัม (AC) ถูกนำมาใช้ อิทธิพลของโปรตีน: AC สัดส่วนและวิธีการของการใช้ AC ถูกทดสอบ ประสิทธิภาพการกำจัดเพได้รับการประเมินโดย spectrophotometry อนุพันธ์อันดับสอง ผลการศึกษาพบว่าสภาพที่ให้ผลผลิตการสกัดโปรตีนสูงที่สุด (63.4%) คือการที่ใช้ความเข้มข้นตัวอย่างของ 1:10 (w / v) ที่อุณหภูมิ 50 ° C เช่นเดียวกับเอนไซม์อัตราส่วนพื้นผิว 10 : 100 ในเวลาปฏิกิริยาจาก 5 ชั่วโมง ถ่านกัมมันเป็นที่มีประสิทธิภาพสำหรับการลบเพนำไปสู่ค่าสูงกว่า 70% สำหรับส่วนมากของตัวอย่างและผลที่ดีที่สุด (94.1% ของการกำจัดเพ) พบโปรตีนอัตราส่วน AC ของ 1:88 ใช้พร้อมกันสามประเภทของ AC ( 20x50, 12x25, 6x12 ตาข่าย) ซึ่งนำไปสู่เนื้อหาเพสุดท้ายของ 82.5 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม 1 จากไฮโดรไล
วัสดุและวิธีการแป้งข้าวเชิงพาณิชย์ได้รับการตกแต่งกรุณาโดยเฟอร์ลา-L Ferenczi (เซาเปาโล, บราซิล) โปรติเอสจาก B. licheniformis (อีซี 3.4.21.14) ได้รับการตกแต่งกรุณาโดย Prozyn (เซาเปาโล, บราซิล) ปาเปน (EC 3.4.22.2 เอกสารข) ได้รับการตกแต่งกรุณาโดย AB เอนไซม์ของบราซิล (บารูเอรี, SP, ประเทศบราซิล) L-pheylalanine, L-ซายน์และ L-โพรไบโอที่ซื้อมาจากซิกม่า (เซนต์หลุยส์, MO, USA) คาร์บอน (ทราย, n. 119, 20x50, 12x25, 6x12 ตาข่าย) ซื้อมาจาก Carbomafra SA (Curitiba, PR, บราซิล) โครงการวิจัยนี้ได้ดำเนินการตั้งแต่เดือนมกราคมถึงเดือนธันวาคม 2008, ในห้องปฏิบัติการเด Bromatologia / Pesquisa ดา Faculdade เดFarmácia-Universidade ชาติเดอ Minas Gerais การกำหนดองค์ประกอบทางเคมีของแป้งข้าวจ้าวเนื้อหาของความชื้นโปรตีนไขมันเกลือแร่และใยอาหารที่ได้รับการกำหนดขึ้นมาตามสมาคมอย่างเป็นทางการเกษตรเคมีวิธีการ (AOAC, 1995) คาร์โบไฮเดรตจะถูกคำนวณจากความแตกต่าง ปัจจัยการแปลงของไนโตรเจนกับโปรตีนเป็น 5.95 (นีลเซ่น, 1998) เอนไซม์สกัดโปรตีนในขั้นต้นกลุ่มตัวอย่างได้รับการผสมกับน้ำในระดับความเข้มข้นที่แตกต่างกันสาม (1: 3, 1: 5 และ 1:10 w / v) และ ปริมาณของโซเดียมเบนโซเอถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อให้ได้ความเข้มข้นสุดท้ายของ 0.1 กรัม 100 มล-1 หลังการเปลี่ยนแปลงของค่าความเป็นกรดเป็น 10.5 กับ 3 โมลโซลูชั่นไฮดรอกไซ L-1 โซเดียมผสมตั้งอยู่บนน้ำมันอาบน้ำที่ 50 ° C ภายใต้การกวน โปรติเอสจาก Bacillus licheniformis ถูกเพิ่มเข้ามาในสอง E: S อัตราส่วน (5 100 และ 10: 100) และการสกัดโปรตีนที่ได้ดำเนินการเป็นเวลา 5 ชั่วโมง จากนั้นส่วนผสมที่ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 1,700 xg เป็นเวลา 15 นาทีที่ 25 ° C และระหว่างแต่ละหมุนเหวี่ยงสารตกค้างถูกล้างด้วยน้ำ (Capobiango et al. 2007) สุดท้ายที่เหลือถูกแยกออกจากสารละลายแห้ง (Freezone แช่แข็งเครื่องเป่า, 77500 รุ่น Labconco แคนซัสซิตี้, USA) และปริมาณโปรตีนที่ถูกกำหนด (AOAC, 1995) การเตรียมความพร้อมของโปรตีนไฮโดรไลเซไฮโดรไลเซเอนไซม์ที่เตรียม จากสารสกัดจากโปรตีนข้าว (RPE) การแก้ปัญหาโดยใช้ปาเปน ค่า pH วัด (7.4), การแก้ปัญหาที่ถูกตั้งอยู่บนอ่างน้ำมันที่ 60 ° C ภายใต้ตื่นเต้นและเอนไซม์ที่ถูกเพิ่มเข้ามาในความเข้มข้นที่จะบรรลุเอนไซม์อัตราส่วนพื้นผิว (E: S) ของ 4: 100 หลังจาก 5 ชั่วโมงของการย่อยสลายปฏิกิริยาก็หยุดด้วยความร้อนในน้ำอาบน้ำที่ 80 ° C เป็นเวลา 20 นาที (Soares et al., 2006) สุดท้ายไฮโดรไลเสตเป็นแห้งกำจัดฟีนิลอะลาจากโปรตีนไฮโดรไลกำจัดของเพจากไฮโดรไลเซโปรตีนโดยใช้ถ่านกัมมันถูกอธิบายไว้ก่อนโดยกลุ่มของเรา (Soares et al., 2006) สั้น ๆ , ถ่านกัมมันถูกไฮเดรทที่ก่อนหน้านี้เป็นเวลา 10 นาทีและวางไว้ภายในเข็มฉีดยาที่ใช้แล้วทิ้งของ 20 มลที่มีตัวกรองจากไนลอนและใยแก้วที่ผลิตในห้องปฏิบัติการของเรา จากนั้นไฮโดรไลเสตที่ได้ผ่านเข็มฉีดยาภายใต้ pression (คอมเพรสเซอร์ Diapump, Fanem, 089-A รุ่นหมายเลข BE11778, เซาเปาโล, บราซิล) การประเมินประสิทธิภาพของการกำจัดเพสำหรับการประเมินประสิทธิภาพการกำจัดเพเนื้อหา ในแป้งข้าวและไฮโดรไลเสทที่ได้รับการประเมินโดย Spectrophotometry อนุพันธ์ที่สอง (SDS) ตามที่อธิบายไว้ก่อนโดยกลุ่มของเรา (เป et al. 2005) สั้น ๆ ตัวอย่างจะถูกย่อยได้ (5.7 mol L-1 HCl, 110 ° C, 24 ชั่วโมง) และการดูดกลืนแสงของพวกเขาวัด 250-280 นาโนเมตร สองสเปกตรัมอนุพันธ์ถูกดึง (เซซิล spectrophotometer แบบ CE2041 บั๊กวิทยาศาสตร์อังกฤษ) และพื้นที่ของยอดเชิงลบที่ถูกใช้ในการคำนวณปริมาณของเพในตัวอย่างจ้างกราฟมาตรฐาน ในกรณีที่มีโปรตีนไฮโดรไล, ขั้นตอนเดียวกันนี้ถูกจ้างมาหลังการรักษาด้วยถ่านกัมมัน กรัมรังสียูวีซอฟแวร์ (กาแล็กซี่อุตสาหกรรมคอร์ปอเรชั่นซาเลม, นิวแฮมป์เชียร์สหรัฐอเมริกา) ถูกใช้ในการวาดสเปกตรัมอนุพันธ์ที่สอง สำหรับกราฟมาตรฐานการแก้ปัญหาสต็อกของเพ (6.05x10-4 mol L-1), เทอร์ (5.52x10-4 mol L-1) และ Trp (4.90x10-4 mol L-1) ได้จัดทำขึ้นสารละลายบัฟเฟอร์เดียวกัน อ้างถึงข้างต้น จากนั้น 10 ml ของแต่ละโซลูชั่นที่ได้รับการผสมและเจือจางต่อเนื่องของผสมนี้ถูกสร้างขึ้นมาให้มีความเข้มข้นของเพอยู่ในช่วงจาก 0.13 เพื่อ 1.01x10-4 mol L-1 สเปกตรัมของโซลูชั่นเจือจางเหล่านี้ถูกบันทึกไว้ 250-280 นาโนเมตรพื้นที่ของยอดเชิงลบในสามของเพเปคตรัมที่ได้รับการวางแผนในการทำงานของความเข้มข้นของ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสกัดโปรตีนและการเตรียมโปรตีนจากข้าวของ phenylalanine ต่ำเนื้อหา
เบื้องต้นของข้าวใน phenylketonurics อาหารเล็ง , การสกัดโปรตีนและ phenylalanine ( เพ ) กระบวนการกำจัดที่แตกต่างกัน สำหรับการสกัดโปรตีน , เอนไซม์ และใช้ในการกำจัดเพ , ปาเปนและคาร์บอน ( AC ) สถิติที่ใช้ อิทธิพลของอัตราส่วนโปรตีน : AC ,ประเภทและวิธีการที่ใช้ AC ถูกทดสอบ ประสิทธิภาพในการกำจัดเพถูกประเมินโดยวิธีอนุวินาที . ผลการศึกษาพบว่าสภาวะที่ให้ผลผลิตสูงสุดในการสกัดโปรตีน ( 63.4 % ) คือ การใช้ตัวอย่างที่ความเข้มข้น 1 : 10 ( w / v ) ที่อุณหภูมิ 50 องศาซี รวมทั้งเอนไซม์ : อัตราส่วนสาร 10:100 ในปฏิกิริยาเวลา 5 ชั่วโมงคาร์บอนมีประสิทธิภาพสำหรับการลบเพ นำไปสู่ค่านิยมสูงกว่า 70% ของกลุ่มตัวอย่างส่วนใหญ่ และได้ผลดีที่สุด ( ร้อยละของการกำจัดเพ ) พบโปรตีนต่อ AC ของ 1:88 ใช้พร้อมกันสามชนิดของ AC ( 20x50 12x25 6x12 , , ตาข่าย ) ซึ่งนำไปสู่เนื้อหาเพ สุดท้ายของ kg-1 82.5 มก. ไฮโดรไลเซท

.
วัสดุและวิธีการโฆษณาข้าวแป้ง ferla-l. กรุณาตกแต่งโดยferenczi ( เซาเปาลู SP , บราซิล ) เป็นโปรตีเอสจาก B . licheniformis ( EC 3.4.21.14 ) คือกรุณาตกแต่งด้วย prozyn ( เซาเปาลู , SP , ประเทศบราซิล ) เป็นเอนไซม์ปาเปน ( EC 3.4.22.2 ) คือกรุณาตกแต่งโดย AB เอนไซม์ของบราซิล Barueri , SP , ประเทศบราซิล ) l-pheylalanine - แอล ไทโรซีน , และซื้อมาจาก Sigma ( St . Louis , MO , USA ) คาร์บอนกัมมันต์ ( ทราย ) 20x50 12x25 119 , , ,6x12 ตาข่าย ) ซื้อมาจาก carbomafra s ( Curitiba , พีอาร์ , บราซิล ) .

โครงการวิจัยนี้ดำเนินการตั้งแต่เดือนมกราคม - ธันวาคม 2551 ใน laborat óริโอ เดอ bromatologia / ันดา faculdade เดอฟาร์ม . kgm ซีไอเอมหาวิทยาลัยรัฐมีนัสเชไรส์

หาองค์ประกอบทางเคมีของแป้งข้าวเจ้า
ปริมาณความชื้น โปรตีน ไขมันแร่ธาตุ และใยอาหาร พบว่าตามที่สมาคมวิธีการอย่างเป็นทางการนักเคมีเกษตร ( โปรตีน , 1995 ) คาร์โบไฮเดรตที่ถูกคำนวณจากผลต่าง ปัจจัยการเปลี่ยนแปลงของไนโตรเจนในโปรตีน 5.95 ( Nielsen , 1998 ) .

เอนไซม์การสกัดโปรตีน
ตอนแรก ตัวอย่างที่ผสมกับน้ำใน 3 ระดับความเข้มข้น ( 1 : 3 , 1 : 5 และ 1 : 10w / v ) และปริมาณของโซเดียมเบนโซเอต ได้เพิ่ม เพื่อให้ได้ความเข้มข้นสุดท้าย 0.1 กรัม 100 แน่นอน . หลังจากปรับ pH 10.5 กับ 3 โมล L-1 สารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ ผสมไว้ในน้ำมัน 50 ° C ในการกวน ส่วนโปรติเอสจาก Bacillus licheniformis เพิ่ม 2 E : s ( และต่อเติม 10:100 ) และการสกัดโปรตีนแสดงเป็นเวลา 5 ชั่วโมงแล้วส่วนผสมคือระดับที่ 1 , 700 x G สำหรับ 15 นาที ที่อุณหภูมิ 25 ° C และระหว่างแต่ละปั่นที่เหลือก็ล้างด้วยน้ำ ( capobiango et al . , 2007 ) สุดท้ายที่เหลือคือแยกออกจากน่าน ( ฟรีโซนแช่แข็งแห้ง , เครื่องเป่า , 77 , 500 รุ่น แล็บคอนโก้ , แคนซัสซิตี , สหรัฐอเมริกา ) และปริมาณโปรตีนของตั้งใจ ( โปรตีน , 1995 ) . การเตรียมการของโปรตีนไฮโดรไลเซท

ของเอนไซม์ที่เตรียมจากสารสกัดจากโปรตีนข้าว ( RPE ) โซลูชั่นการใช้นโยบาย วัด ( pH 7.4 ) , โซลูชั่นตั้งอยู่ในการอาบน้ำที่ 60 ° C ภายใต้กวนและเอนไซม์เพิ่มความเข้มข้นเพื่อให้บรรลุเช่นเอนไซม์ : อัตราส่วนพื้นผิว ( E : s ) ของ 4:100 . หลังจาก 5 ชั่วโมงของปฏิกิริยา , ปฏิกิริยาถูกหยุดโดยความร้อนในอ่างน้ำที่อุณหภูมิ 80 องศา C เป็นเวลา 20 นาที ( Soares et al . ,2006 ) ในที่สุด ผู้ถูกแช่แข็ง

เอาของฟีนิลอะลานีนจากโปรตีนไฮโดรไลเซท
เอาเพจากโปรตีนของการใช้ถ่านกัมมันต์ได้อธิบายไว้ก่อนโดยกลุ่มของเรา ( Soares et al . , 2006 ) สั้น ๆ , ถ่านกัมมันต์ก่อนหน้านี้ hydrated สำหรับ 10 นาทีและอยู่ภายในเข็มผ้าอ้อม 20 มิลลิลิตร ประกอบด้วยตัวกรองไนลอนและแก้วผ้าขนสัตว์ที่ผลิตในห้องปฏิบัติการของเรา งั้น ผ่านคือผ่านเข็มใต้ pression ( คอมเพรสเซอร์ diapump fanem , รุ่น , หมายเลข , be11778 089-a , เซาเปาลู , SP , ประเทศบราซิล ) .

การประเมินประสิทธิภาพของการกำจัดเพ
สำหรับการประเมินประสิทธิภาพของเพลบเนื้อหาในข้าวแป้งและของผู้ถูกประเมินโดยวิธีอนุพันธ์ที่สอง ( SDS )ตามที่อธิบายไว้ก่อนโดยกลุ่มของเรา ( Lopes et al . , 2005 ) สั้น ๆ , จำนวนน้ำตาล ( 5.7 mol L-1 HCl , 110 ° C 24 H ) และค่าของพวกเขาวัดจาก 250 - 280 nm . อนุพันธ์อันดับสองให้วาด ( เซซิล Spectrophotometer ce2041 โมเดล บั๊ก วิทยาศาสตร์ อังกฤษ ) และพื้นที่สูงสุดลบถูกใช้เพื่อคำนวณปริมาณเพในตัวอย่างการใช้เส้นโค้งมาตรฐานในกรณีของโปรตีนไฮโดรไลเซท ขั้นตอนเดียวกันนี้ถูกใช้หลังจากการรักษาด้วยถ่านกัมมันต์ grams-uv ซอฟต์แวร์ ( บริษัท อุตสาหกรรม Galactic ซาเลม , NH , USA ) คือใช้ในการวาดอนุพันธ์อันดับสองแสง . สำหรับเส้นโค้งมาตรฐานหุ้นโซลูชั่นของเพ ( 6.05x10-4 โมลเทียร์ ( L-1 ) 5.52x10-4 mol L-1 ) และ TRP ( 490x10-4 mol L-1 ) ถูกเตรียมไว้ในสารละลายบัฟเฟอร์เดียวกันที่อ้างถึงข้างต้น จากนั้น 10 ml ของแต่ละโซลูชั่นผสมเจือจางต่อเนื่องของส่วนผสมนี้ได้มีเพความเข้มข้นในช่วงจาก 0.13 1.01x10-4 mol L-1 . สเปกตรัมของโซลูชั่นเหล่านี้ซึ่งถูกบันทึกไว้จาก 250 - 280 nm พื้นที่ที่สามยอดลบของสเปกตรัมกำลังวางแผนในการทำงานเพของความเข้มข้นของ