To identify a nuclease with the hig

To identify a nuclease with the high relative activity, we tested nine nucleases: TurboNuclease (Accelagen, San Diego, CA, U.S.A.); Mung Bean Nuclease, S1 Nuclease, BAL 31 Nuclease, Exonuclease III, Exonuclease I as well as BamH I and EcoR I restrictive endonucleases (Takara, Dalian, Liaoning, China); and DNase I (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, U.S.A.). The purity and concentration of each enzyme was determined on a sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel (SDS-PAGE). Each commercial nuclease was mixed with the equal volume of 2× sample buffer (containing 0.5 M Tris-HCl pH 6.8, 25%; 0.27 M 2-Mercaptoethanol; SDS, 0.14 M; bromophenol blue, 0.003 M; glycerol, 20%; H2O, 50%), and the mixtures were then boiled for 2 minutes. Each sample (10 μL) was loaded on the gel and electrophoresed for 1.5 hours at 120 V on a Mini Protean Tetra Cell (BIO-RAD, Hercules, CA, U.S.A.). The gel was stained with Coomassie blue and scanned on an odyssey CLx infrared imaging system (LI-COR, Lincoln, NE, U.S.A.) at the 700 nm. The signal intension of each band on SDS-PAGE was quantified by the software of Image Studio Ver. 2.1 (LI-COR, Lincoln, NE, U.S.A.).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ระบุ nuclease เป็นกับกิจกรรมสัมพันธ์สูง เราทดสอบเก้า nucleases: TurboNuclease (Accelagen, San Diego, CA สหรัฐอเมริกา); เมล็ดถั่ว Nuclease, S1 Nuclease ดุล 31 Nuclease, Exonuclease III, Exonuclease ฉันเช่นกันเป็น BamH ฉันและ EcoR ฉัน endonucleases จำกัด (Takara ต้าเหลียน Liaoning จีน); และ DNase ฉัน (Fisher เทอร์โมวิทยาศาสตร์ Waltham, MA สหรัฐอเมริกา) ความบริสุทธิ์และความเข้มข้นของเอนไซม์แต่ละที่ถูกกำหนดในเจ dodecylsulfate polyacrylamide โซเดียม (SDS-หน้า) แต่ละ nuclease พาณิชย์ถูกผสมกับบัฟเฟอร์อย่าง× 2 (0.5 M ทริสเรทติ้ง HCl pH 6.8, 25%; 0.27 M 2-Mercaptoethanol ที่ประกอบด้วยปริมาตรเท่า องค์กร 0.14 M สีฟ้า bromophenol 0.003 M กลีเซอร 20% H2O, 50%), และน้ำยาผสมแล้วถูกต้ม 2 นาที แต่ละตัวอย่าง (10 μL) ถูกโหลดในเจ และ electrophoresed 1.5 ชั่วโมงที่ 120 V บนมินิ Protean Tetra เซลล์ (BIO RAD เฮอร์คิวลิส CA สหรัฐอเมริกา) เจสี ด้วย Coomassie blue และสแกนในโคลงการฟิกอินฟราเรดภาพระบบ (LI ประกอบ ลินคอล์น NE สหรัฐอเมริกา) ที่การ 700 nm ไดสัญญาณของแต่ละวงหน้า-SDS มี quantified โดยซอฟต์แวร์ของภาพสตูดิโอไม่ 2.1 (LI ประกอบ ลินคอล์น NE สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพื่อระบุนิวกับกิจกรรมค่อนข้างสูงเราได้ทดสอบเก้า nucleases: TurboNuclease (Accelagen, San Diego, CA, USA); ถั่วเขียว Nuclease, S1 Nuclease, BAL 31 Nuclease, exonuclease III, exonuclease ฉันเช่นเดียวกับ BamH I และ EcoR ฉัน endonuclease ที่ จำกัด (Takara ต้าเหลียนมณฑลเหลียวหนิง, จีน); และ DNase ผม (เทอร์โมฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์, เคมบริดจ์, สหรัฐอเมริกา) ความบริสุทธิ์และความเข้มข้นของแต่ละเอนไซม์ที่ถูกกำหนดในโซเดียมเจลอะคริเลต dodecylsulfate (SDS-PAGE) แต่ละนิเชิงพาณิชย์ได้รับการผสมกับปริมาณที่เท่ากันของ 2 ×บัฟเฟอร์ตัวอย่าง (ที่มี 0.5 M Tris-HCl พีเอช 6.8, 25%; 0.27 M 2 mercaptoethanol; SDS, 0.14 M; bromophenol สีฟ้า, 0.003 M; กลีเซอรีน 20%; H2O 50%) และได้รับการผสมแล้วต้มเป็นเวลา 2 นาที แต่ละตัวอย่าง (10 ไมโครลิตร) ถูกโหลดในเจลและ electrophoresed 1.5 ชั่​​วโมงที่ 120 V บน Protean เตตร้าเซลล์ขนาดเล็ก (BIO-RAD ดาว, CA, USA) เจลถูกย้อมด้วยสีฟ้าและ Coomassie สแกนในระบบการถ่ายภาพการผจญภัย CLX อินฟราเรด (LI-COR ลิงคอล์น, NE, สหรัฐอเมริกา) ที่ 700 นาโนเมตร สัญญาณความตั้งใจของแต่ละวง SDS-PAGE ถูกวัดโดยซอฟต์แวร์ภาพสตูดิโอ Ver 2.1 (LI-COR ลิงคอล์น, NE, สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อระบุนิวเคลียสกับกิจกรรมสัมพันธ์สูง เราทดสอบเก้า nucleases : turbonuclease ( accelagen , San Diego , CA , USA ) ; ถั่วเขียวนิวเคลียสนิวเคลียสนิวเคลียสบัล , S1 , 31 , เอกโซนิวคลีเอสเอกโซนิวคลีเอส III , ฉันเป็น bamh ฉันและ ecor ฉันเข้มงวด สงบเงียบ ( Takara , Dalian , Liaoning , จีน ) ; และ ตรวจหา ADNase ( เทอร์โมฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ , วอลแทม , MA , USA )ความบริสุทธิ์และความเข้มข้นของเอนไซม์แต่ละถูกกำหนดในโซเดียม dodecylsulfate polyacrylamide gel ( SDS-PAGE ) พาณิชย์แต่ละนิวเคลียสผสมกับปริมาณที่เท่ากันของ 2 ×บัฟเฟอร์ที่มีตัวอย่าง 0.5 m หรือกรดไฮโดรคลอริก pH 6.8 % 25 ; 6 m อย่างเดียว ; SDS , 0.14 เมตร โบรโมฟีนอลสีฟ้า , 0.003 M ; กลีเซอรอล , 20% ; H2O , 50% ) และสารผสมแล้วต้มสำหรับ 2 นาทีที่ .แต่ละตัวอย่าง ( 10 μ L ) ถูกโหลดในเจลและ electrophoresed 1.5 ชั่วโมง 120 V ในมินิซึ่งเปลี่ยนแปลงได้มากสี่เซลล์ ( Bio-rad , Hercules , CA , USA ) เจลเปื้อนเหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้าและสแกนในรายการ clx ระบบการถ่ายภาพอินฟราเรด ( li-cor Lincoln , เน , สหรัฐอเมริกา ) ที่ 700 นาโนเมตร สัญญาณที่ความตั้งใจของแต่ละกลุ่มในการศึกษา คือ วัด โดยซอฟต์แวร์ของเวอร์สตูดิโอภาพ ( li-cor 2.1 ,ลิงคอล์น , เน , สหรัฐอเมริกา )