Bands of interest were excised from

Bands of interest were excised from Coomassie blue-stained gels
and de-stained with 25 mM ammonium bicarbonate in 50% acetonitrile/
50% water. The gel was dehydrated by addition of absolute
acetonitrile (covering each gel piece) for 5 min. The acetonitrile was
removed and the gel rehydrated with 100 mM ammonium bicarbonate
(10 min). Then, the gel was dehydrated with acetonitrile
(5 min), the acetonitrile removed and the sample dried in a Speed-
Vac for 2e3 min. The sample was rehydrated with 10 mM dithiothreitol
(DTT) and incubated for 30 min at room temperature
(22e24 C), then alkylated with 50mMiodoacetamide for 30 min at
room temperature, and then washed in 100 mM ammonium bicarbonate.
Once the iodoacetamide had been removed, the samplewent
through 3 further rounds of dehydrationerehydration (100%
acetonitrilee100 mM ammonium bicarbonate). After the final
dehydration, the sample was dried in a Speed-Vac. The gel spot was
rehydrated (with a 12.5 ng/ml solution of trypsin) in ice-cold 50mM
ammonium bicarbonate.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วงน่าสนใจถูก excised จากเจบลูสี Coomassieและยกเลิกสีกับแอมโมเนียมไบคาร์บอเนต 25 มม.ใน acetonitrile 50% /น้ำ 50% เจถูกอบแห้ง โดยเพิ่มสัมบูรณ์acetonitrile (ครอบคลุมแต่ละชิ้นเจ) สำหรับ 5 นาที Acetonitrile ถูกเอาออก และเจ rehydrated กับแอมโมเนียมไบคาร์บอเนต 100 มม.(10 นาที) แล้ว เจถูกอบ ด้วย acetonitrileacetonitrile ที่เอา (5 นาที), และตัวอย่างแห้งในความเร็วแบบVac สำหรับ 2e3 นาที ตัวอย่างที่ rehydrated กับ dithiothreitol 10 มม.(DTT) และ incubated สำหรับ 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง(22e24 C), แล้ว alkylated กับ 50mMiodoacetamide ใน 30 นาทีที่ห้องอุณหภูมิ และเครื่องซักผ้าในแอมโมเนียมไบคาร์บอเนต 100 มม.เมื่อ iodoacetamide ที่ถูกลบออก samplewentผ่านรอบ 3 ต่อไปที่ dehydrationerehydration (100%acetonitrilee100 มม.แอมโมเนียมไบคาร์บอเนต) หลังสุดท้ายคายน้ำ ตัวอย่างที่แห้งในความเร็ว-Vac มีจุดเจrehydrated (มีการแก้ไขปัญหา 12.5 ng/ml ของทริปซิน) ในฉ่ำ 50 มม.แอมโมเนียมไบคาร์บอเนต

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วงที่น่าสนใจที่ได้รับจากพอ Coomassie เจลสีฟ้าเปื้อน
และยกเลิกการย้อมด้วยไบคาร์บอเนต 25 มมแอมโมเนียมใน 50% acetonitrile /
น้ำ 50% เจลได้รับการอบแห้งโดยนอกเหนือจากที่แน่นอน
acetonitrile (ครอบคลุมชิ้นเจลแต่ละคน) เป็นเวลา 5 นาที acetonitrile ถูก
ลบออกและเจล rehydrated กับไบคาร์บอเนต 100 มิลลิแอมโมเนียม
(10 นาที) จากนั้นเจลก็แห้งด้วย acetonitrile
(5 นาที), acetonitrile ออกและตัวอย่างแห้งในความเร็ว
Vac สำหรับนาที 2E3 ตัวอย่างที่ได้รับการคืนรูปด้วย 10 มม dithiothreitol
(DTT) และบ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง
(22e24? C) จากนั้นอัลคีเลตกับ 50mMiodoacetamide เวลา 30 นาทีที่
อุณหภูมิห้องและล้างแล้วในไบคาร์บอเนต 100 มิลลิแอมโมเนียม.
เมื่อ iodoacetamide ที่ได้รับ ลบออก samplewent
ผ่าน 3 รอบต่อไปของ dehydrationerehydration (100%
acetonitrilee100 มิลลิแอมโมเนียมไบคาร์บอเนต) หลังจากครั้งสุดท้ายที่
ขาดน้ำตัวอย่างแห้งในความเร็ว-Vac จุดเจลที่ได้รับการ
คืนรูป (ที่มีการแก้ปัญหา 12.5 ng / มิลลิลิตร trypsin) ใน 50mm เย็น
แอมโมเนียมไบคาร์บอเนต

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วงดอกเบี้ยถูกตัดจากเหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้าเปื้อนเจล
และ de ย้อมด้วยแอมโมเนียมไบคาร์บอเนต 25 มม. /
50% 50% ไนน้ำ เจลมันแห้งโดยเพิ่มแน่นอน
ไน ( ครอบคลุมแต่ละเจลชิ้น ) 5 นาทีไนคือ
เอาออกและเจลได้ทำการ รีไฮเดรทมกับ 100 มม. แอมโมเนียมไบคาร์บอเนต
( 10 นาที ) แล้วเจลมันแห้งกับไน
( 5 นาที )ที่ไนเอาออกและตัวอย่างแห้งในความเร็ว -
vac สำหรับ 2e3 นาที ตัวอย่างที่ได้ทำการ รีไฮเดรทมกับ 10 มม. บัตรแข็ง
( DTT ) และบ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง (
22e24  C ) แล้ว alkylated กับ 50mmiodoacetamide สำหรับ 30 นาทีที่
อุณหภูมิห้อง แล้วล้างในแอมโมเนียมไบคาร์บอเนต 100 มม.
เมื่อ iodoacetamide ได้ถูกลบออก , samplewent
ผ่านรอบ 3 ต่อไป dehydrationerehydration ( 100%
acetonitrilee100 มม. แอมโมเนียมไบคาร์บอเนต ) หลังจากน้ำสุดท้าย
, ตัวอย่างแห้งในความเร็ว Vac . จุดเจลคือ
ได้ทำการ รีไฮเดรทม ( กับ 12.5 ng / ml สารละลายเอนไซม์ ) ในเย็น 50mm
แอมโมเนียมไบคาร์บอเนต