To generate calibration curves, DNA

To generate calibration curves, DNA extracts were adjusted at 100 pg/μl in the NucleoSpin Plant II kit elution buffer, and were then serially (1:10) diluted, resulting in a six point calibration curve range of 100 to 0.001 pg/μl. QPCR analysis was repeated three times for each concentration. For each qPCR assay, the calibration curve allowed us to calculate the linear dynamic range, the limit of detection (LOD) and PCR amplification efficiency. The linear dynamic range is the concentration range over which the quantification cycle (Cq) and concentration remain directly proportional to each other. Range interval and correlation coefficient (r2 value) were then reported. The LOD was the lowest concentration at which DNA was detected in all three samples. PCR amplification efficiency was established as the slope of the log–linear portion of the calibration curve: PCR efficiency = 10− 1/slope − 1.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เพื่อสร้างเส้นโค้งเทียบ สารสกัดดีเอ็นเอถูกปรับที่ pg 100 μl ในบัฟเฟอร์ elution ชุด II โรงงาน NucleoSpin และถูกแล้ว serially (1:10) ผสม ในช่วงโค้งเทียบจุดหกของ 100-0.001 pg/μl วิเคราะห์ QPCR ถูกซ้ำสามครั้งสำหรับแต่ละความเข้มข้น สำหรับการวิเคราะห์แต่ละ qPCR โค้งเทียบให้เราคำนวณช่วงแบบไดนามิกเชิงเส้น ข้อจำกัดของการตรวจสอบ (ลอด) และ PCR ขยายประสิทธิภาพ ช่วงแบบไดนามิกเชิงเส้นเป็นช่วงความเข้มข้นที่วงจรนับ (ซี) และความเข้มข้นยังคงสัดส่วนโดยตรงกับแต่ละอื่น ๆ ช่วงช่วงและสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ (r2 ค่า) ได้รายงานแล้วนั้น ลอดมีความเข้มข้นต่ำสุดที่ DNA ถูกตรวจพบในตัวอย่างที่ 3 ทั้งหมด PCR ขยายประสิทธิภาพก่อเป็นความชันของส่วน log–linear โค้งเทียบ: ประสิทธิภาพ PCR =− 1/ลาด 10− 1

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในการสร้างเส้นโค้งการสอบเทียบสารสกัดดีเอ็นเอถูกปรับที่ 100 / pg ไมโครลิตรในบัฟเฟอร์ชุด elution NucleoSpin พืชครั้งที่สองและเป็นลำดับแล้ว (01:10) เจือจางผลในหกจุดช่วงโค้งการสอบเทียบ 100-.001 พิโคกรัม / ไมโครลิตร การวิเคราะห์ qPCR ซ้ำสามครั้งสำหรับแต่ละความเข้มข้น สำหรับแต่ละทดสอบ qPCR เส้นโค้งการสอบเทียบให้เราในการคำนวณช่วงเชิงเส้นแบบไดนามิกขีด จำกัด ของการตรวจสอบ (LOD) และประสิทธิภาพการขยาย PCR ช่วงแบบไดนามิกเชิงเส้นเป็นช่วงความเข้มข้นกว่าที่วงจรปริมาณ (Cq) และความเข้มข้นยังคงสัดส่วนโดยตรงกับแต่ละอื่น ช่วงช่วงและค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ (ค่า r2) มีรายงานแล้ว LOD เป็นความเข้มข้นต่ำสุดที่ดีเอ็นเอถูกตรวจพบในทั้งสามตัวอย่าง ประสิทธิภาพการขยาย PCR ได้รับการยอมรับว่าเป็นความลาดชันของส่วนเข้าสู่ระบบเชิงเส้นของเส้นโค้งการสอบเทียบ: ประสิทธิภาพ PCR = 10 - 1/slope - 1

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสร้างเส้นโค้งสอบเทียบดีเอ็นเอสารสกัดปรับข้อมูลที่ 100 pg / μ L ในโรงงาน 2 nucleospin Kit ใช้บัฟเฟอร์ และได้เป็น ( 1 : 10 ) ซึ่งส่งผลให้หกจุดรูปโค้งช่วง 100 - 0.01 pg / μการวิเคราะห์ qpcr ลิตร ทำซ้ำ 3 ครั้ง สำหรับแต่ละความเข้มข้น สำหรับแต่ละ qpcr assay , รูปโค้งให้เราคำนวณพิสัยพลวัตเชิงเส้นขีดจำกัดของการตรวจหา ( LOD ) และประสิทธิภาพการขยาย PCR ช่วงแบบไดนามิกเส้นมีช่วงความเข้มข้นที่วงจรปริมาณ ( CQ ) และความเข้มข้นยังคงเป็นสัดส่วนโดยตรงกับแต่ละอื่น ๆ ช่วง ช่วง และสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ ( R2 ค่า ) แล้วรายงาน LOD คือความเข้มข้นต่ำสุดที่ดีเอ็นเอที่ตรวจพบในทั้งสามตัวอย่างการเพิ่มประสิทธิภาพเทคนิคก่อตั้งขึ้นตามความลาดชันของระบบเชิงเส้นและส่วนของรูปโค้ง : เพิ่มประสิทธิภาพ = 10 − 1 / ลาด− 1