ImmunohistochemistryCoronal free-fl

Immunohistochemistry
Coronal free-floating sections (40 μm thick) were pretreated with 3% H2O2/3% methanol in Tris-buffered saline (TBS) for 30 min to block endogenous peroxide activity. After TBS wash, sections were incubated first in TBS with 0.1% Triton X-100 (TBST) for 15 min, and then in TBST with 2% bovine serum albumin (BSA, Sigma-Aldrich) for 30 min. Sec- tions were incubated with anti-6E10 (Covance Research Products, Den- ver, PA, USA) in TBS + 5% normal goat or horse serum overnight at 4 °C. Sections were then incubated with biotinylated anti-mouse; 1:500 in TBS + 2% BSA + 5% normal serum for 1 h at 20 °C, followed by Vector ABC Kit and DAB reagents (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) to visualize staining. Sections were mounted on gelatin-coated slides, dehydrated in graded ethanol, cleared with xylene and coverslipped with DPX (BDH) mounting medium. The specificity of the immune reac- tions was controlled by omitting the primary antibody.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

immunohistochemistry
เวียนฟรีลอยส่วน (40 ไมโครเมตรหนา) มีปรับสภาพ 3% H2O2 3% เมทานอล / ใน tris-buffered น้ำเกลือ (TBS) เป็นเวลา 30 นาทีเพื่อป้องกันกิจกรรมเปอร์ออกไซด์ภายนอก หลังจาก TBS ล้างส่วนบ่มแรกใน TBS 0.1% ไทรทัน x-100 (tbst) เป็นเวลา 15 นาทีและจากนั้นใน tbst 2% วัวซีรั่มอัลบูมิ (BSA, Sigma-Aldrich) เป็นเวลา 30 นาทีวินาทีทั้งนี้บ่มด้วยการต่อต้าน 6e10 (วิจัยผลิตภัณฑ์ COVANCE, den-เวอร์ชั่น pa, usa) ใน TBS ปกติ 5% แพะหรือม้าซีรั่มค้างคืนที่ 4 องศาเซลเซียส ส่วนที่ถูกบ่มแล้วกับ biotinylated ป้องกันเมาส์; 1:500 ใน TBS 2% BSA 5% ซีรั่มปกติเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ 20 ° C, ตามด้วยชุด abc เวกเตอร์และน้ำยาตบเบา ๆ (ห้องปฏิบัติการเวกเตอร์เบอร์ลินเกม, usa) จะเห็นภาพ การย้อมสีส่วนที่ได้รับการติดตั้งบนภาพนิ่งเจลาตินเคลือบแห้งในเอทานอลช้าเคลียร์ด้วยไซลีนและ coverslipped ด้วย dpx (BDH) กลางติดตั้ง ความจำเพาะของภูมิคุ้มกัน reac ทั้งนี้ถูกควบคุมโดยถนัดแอนติบอดีหลัก

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Immunohistochemistry
Coronal free-floating ส่วน (40 μm หนา) ถูก pretreated กับเมทานอล H2O2/3% 3% ในทริสเรทติ้ง buffered น้ำเกลือ (TBS) สำหรับ 30 นาทีกิจกรรมเปอร์ออกไซด์ endogenous บล็อก หลังจากล้าง TBS ส่วนที่ incubated แรกใน TBS ด้วย 0.1% ไตรตั้น X 100 (TBST) สำหรับ 15 นาที แล้ว ใน TBST มี 2% วัว serum albumin (บีเอสเอ ซิก Aldrich) สำหรับ 30 นาที วินาที-tions ถูก incubated กับต่อต้าน-6E10 (Covance วิจัยผลิตภัณฑ์ เดนหนอน PA สหรัฐอเมริกา) TBS 5% ปกติครีมหรือซีรั่มม้าข้ามคืนที่ 4 องศาเซลเซียส ส่วนได้แล้ว incubated กับ biotinylated ป้องกันเมาส์ 1: 500 ใน TBS 2% บีเอสเอ 5% ปกติซีรั่มสำหรับ h 1 ที่ 20 ° C ตามเวกเตอร์ชุด ABC และบแด reagents (ห้องปฏิบัติการเวกเตอร์ เบอร์ลินเกม CA, USA) เห็นภาพย้อมสี ส่วนติดตั้งบนเคลือบตุ๋นภาพนิ่ง อบแห้งในมีการจัดระดับเอทานอล ล้างไซและ coverslipped กับกลางติด DPX (BDH) Specificity ของภูมิคุ้มกัน reac tions ถูกควบคุม โดยรัฐบาลแอนติบอดีหลัก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

immunohistochemistry
coronal แบบไม่เสียค่าบริการ - ลอยอยู่ส่วน( 40 μ m หนา)ได้ฆ่าเชื้อโรคมาแล้วพร้อมด้วย 3% H 2 O 2/3% โรงงานเมธานอลในบริษัททริสเรทติ้งจำกัด - Buffered น้ำเกลือ(สถานีโทรทัศน์ TBS )สำหรับ 30 นาทีในการบล็อกเองในระยะยาวเปอร์ออกไซด์กิจกรรม. ล้างทำความสะอาดหลังจากสถานีโทรทัศน์ TBS ,ส่วนเป็น incubated ครั้งแรกในสถานีโทรทัศน์ TBS พร้อมด้วย 0.1% Triton X - 100 ( tbst )สำหรับ 15 นาทีและใน tbst พร้อมด้วย 2% หลังจากเจลมาสก์มอยเจอร์ไรเซอร์ไข่ขาว( BSA , sigma-aldrich )สำหรับ 30 นาทีก.ล.ต. - ับเป็น incubated พร้อมด้วยการป้องกันการ - 6 E 10 ( covance การวิจัย ผลิตภัณฑ์ ,เด่น - เวอร์ชันป่า, USA )ในสถานีโทรทัศน์ TBS 5% ตามปกติแพะม้าหรือเจลมาสก์มอยเจอร์ไรเซอร์พักค้างคืนที่ 4 ° C ส่วนมี incubated ด้วย biotinylated ป้องกัน - เมาส์; 1 : 500 ในสถานีโทรทัศน์ TBS 2% BSA 5% ตามปกติน้ำเหลืองสำหรับ 1 ชั่วโมงที่ 20 ° C ,ตามด้วยเวกเตอร์ ABC ชุดและซับ reagents ( vector Laboratories , Burlingame , CA , USA )เพื่อแสดง ภาพ เกิดรอยเปื้อนควรส่วนต่างๆได้ถูกติดตั้งอยู่บนกระดานลื่นเหลว - ที่เคลือบสารกันความร้อนในเอทานอล)เรียกเก็บกับ coverslipped และ xylene ด้วย dpx ( bdh )สำหรับติดตั้งขนาดกลาง Mainstream )เพียงเท่านั้นที่มี ภูมิคุ้มกัน reac - ใช้งานที่เป็นการควบคุมโดยข้ามแอนทิบอด - อิหลัก