6.8. A VF-5 ms (30 m  0.25 mm  0.

6.8. A VF-5 ms (30 m  0.25 mm  0.25 lm) column (VARIAN) was
used. A CombiPAL automatic autosampler (Varian, Palo Alto, CA)
was used for all experiments. The injector port was heated to
250 C. Injections were performed in split mode, with a ratio of
1/40. The carrier gas was helium C-60 (Gasin, Portugal), at a constant
flow of 1 ml/min. The ion trap detector was set as follows:
transfer line, manifold and trap temperatures were 280, 50, and
180 C, respectively. The mass ranged from 50 to 600 m/z, with a
scan rate of 6 scan/s. The emission current was 50 lA and the electron
multiplier was set in relative mode to auto tune procedure.
The maximum ionisation time was 25.000 ls, with an ionisation
storage level of 35 m/z. The injection volume was 2 ll and the analysis
was performed in Full Scan mode.
2.4.2. GC–MS conditions for trimethylsilyl (TMS) derivatives analysis
The oven temperature was set at 100 C for 1 min, then increasing
20 C/min to 250 C and held for 2 min, 10 C/min to 300 C and
held for 10 min. All mass spectra were acquired in electron impact
(EI) mode. Ionisation was maintained off during the first 3 min to
avoid solvent overloading. Identification of compounds was
achieved by comparisons of their retention time and mass spectra
with those of pure standards TMS derivatives prepared and injected
under the same conditions and from NIST 05 MS Library
Database. In addition, the retention index (RI) was experimentally
calculated and the values were compared with those reported in
NIST webBook and in the literature (Isidorov & Vinogorova, 2003;
Meyer et al., 2009; Radulovic & Dordevic, 2011; Shepherd et al.,
2007) for GC columns with 5%-phenyl-95%-dimethylpolysiloxane.
For the RI determination, an n-alkanes series (C8–C40) was used.
2.5. Metabolites extraction and derivatization
The metabolites extraction was performed according to the
method previously reported by our group (Pereira et al., 2012).
Briefly, 100.00 ± 1.00 mg of dried sample were transferred to a
glass vial and the internal standards were added: 80 ll of norvaline
(0.30 mg/ml), 20 ll of methyl linolelaidate (10.00 mg/ml), and
80 ll of desmosterol (2.00 mg/ml). The volume was then completed
to 2.00 ml with ethanol. The extraction procedure was as
follows: incubation for 20 min at 40 C under magnetic stirring
(200 rpm). Samples were then filtered through a 0.45 lm membrane
(Millipore). An aliquot of 50 ll of extract was transferred
to a glass vial, the solvent was evaporated under nitrogen stream
and 50 ll of the derivatizing reagent (MSTFA) was added to the
dried residue. The vial was capped, vortexed and heated for
20 min in a dry block heater maintained at 40 C. All analyses were
performed in triplicate.
2.6. Metabolites quantification
For quantification purposes, each sample was injected in triplicate
and the amount of metabolites present in samples was
achieved from the calibration curves of the respective TMS derivatives.
All compounds were quantified in Full Scan mode with the
exception of a-linolenic (m/z 191, 335, and 350) and oleic (m/z
264, 339 and 354) derivatives that were quantified by the area obtained
from the reprocessed chromatogram, using the characteristic
m/z fragments.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

6.8. VF-5 ms (30 m 0.25 มม. 0.25 lm) คอลัมน์ (แล้วแต่กำหนด) คือใช้ อัตโนมัติสามารถ CombiPAL (Varian พาโลอัลโต แคลิฟอร์เนีย)ใช้สำหรับการทดลองทั้งหมด ท่าหัวฉีดถูกความร้อนเพื่อค. 250 ฉีดดำเนินการในโหมดแยก อัตราส่วนของ1/40 ผู้ขนส่งก๊าซฮีเลียม C-60 (Gasin โปรตุเกส), ที่คงความเป็นการไหล 1 มิลลิลิตร/นาที จับดักไอออนถูกตั้งค่าเป็นดังนี้:โอนย้ายบรรทัด แมนิโฟลด์ และดักจับอุณหภูมิได้ 280, 50 และ180 C ตามลำดับ มวลอยู่ในช่วง 50 ถึง 600 m/z กับการอัตราการสแกน 6 แกน/s ปล่อยปัจจุบันก็ 50 ลาและอิเล็กตรอนตัวคูณถูกตั้งค่าในโหมดสัมพัทธ์การกระบวนการปรับแต่งอัตโนมัติเวลาสูงสุด ionisation ได้ 25,000 ls กับการ ionisationเก็บระดับ 35 m/z ของ ปริมาณฉีดได้ 2 ll และวิเคราะห์ดำเนินการในโหมดการสแกนแบบเต็ม2.4.2. GC – MS เงื่อนไขสำหรับการวิเคราะห์ตราสารอนุพันธ์ trimethylsilyl (TMS)ตั้งเตาอบอุณหภูมิ 100 c เป็นเวลา 1 นาที เพิ่มแล้ว20 C นาทีถึง 250 C และรอนาที 2 นาที 10 C ถึง 300 C และรอ 10 นาที สเปกตรัมมวลทั้งหมดได้รับมาในผลกระทบอิเล็กตรอนโหมด (EI) Ionisation กรุงปิดในช่วง 3 นาทีแรกไปหลีกเลี่ยงการบรรทุกเกินพิกัดตัวทำละลาย รหัสของสารคือโดยการเปรียบเทียบเวลาการเก็บรักษาและมวลสเปกตรัมผู้บริสุทธิ์มาตรฐาน TMS อนุพันธ์เตรียม และฉีดภาย ใต้เงื่อนไขเดียวกัน และ จากไลบรา รี MS NIST 05ฐานข้อมูล นอกจากนี้ การเก็บรักษาดัชนี (RI) ได้ทดลองคำนวณ และค่าได้เทียบกับรายงานในNIST webBook และ ในวรรณคดี (Isidorov & Vinogorova, 2003Meyer et al. 2009 Radulovic & Dordevic, 2011 เลี้ยงแกะ et al.,2007) สำหรับคอลัมน์ GC กับ 5%-ฟีนิล-95%-dimethylpolysiloxaneสำหรับการวัดค่า RI ถูกใช้เป็นชุด n-alkanes (C8 – C40)2.5. สารสกัดและ derivatizationการสกัดสารได้ดำเนินการตามวิธีรายงานโดยกลุ่มของเรา (Pereira et al. 2012)สั้น ๆ 100.00 ± 1.00 มิลลิกรัมของแห้งอย่างถูกโอนย้ายไปขวดแก้วและมาตรฐานภายในถูกเพิ่ม: 80 ll ของ norvaline(0.30 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร), 20 ll ของ methyl linolelaidate (10.00 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร), และ80 ของ desmosterol (2.00 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร) จะ ไดรฟ์ข้อมูลแล้วเสร็จเพื่อมล. 2.00 กับเอทานอล ขั้นตอนการสกัดเป็นดังต่อไปนี้: กกไข่ประมาณ 20 นาทีที่ 40 C ใต้แม่เหล็กกวน(200 rpm) ตัวอย่างจากนั้นกรองผ่านเมมเบรน lm 0.45(มิลลิพอร์) ส่วนลงตัวของสารสกัดจะถูกถ่ายโอนการขวดแก้ว ตัวทำละลายระเหยภายใต้กระแสไนโตรเจนและ 50 ของเอเจนต์ derivatizing (MSTFA) จะถูกเพิ่มไปกากแห้ง ต่อย อด vortexed และความร้อนสำหรับขวด20 นาทีในบล็อกแห้งร้อนที่ 40 c มีการวิเคราะห์ทั้งหมดดำเนินการในลข้อ2.6. สารนับประสงค์ นับอย่างฉีดลข้อและปริมาณของสารในตัวอย่างประสบความสำเร็จจากเส้นโค้งการสอบเทียบของอนุพันธ์ TMS เกี่ยวข้องสารทั้งหมดถูกวัดในโหมดการสแกนแบบเต็มที่มีการข้อยกเว้นของโอเลอิค (m/z และ a-ไลโนเลนิ (m/z 191, 335 และ 350)264, 339 และ 354) อนุพันธ์ที่ถูกวัดตามพื้นที่ที่ได้รับจาก reprocessed chromatogram ใช้ลักษณะส่วน m/z

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

6.8 VF-5 ms (30 เมตร? 0.25 มม? 0.25 LM) และคอลัมน์ (VARIAN) ถูก
นำมาใช้ CombiPAL autosampler อัตโนมัติ (Varian, พาโลอัลโต)
ถูกนำมาใช้สำหรับการทดลองทั้งหมด พอร์ตหัวฉีดถูกความร้อนจะ
250 องศาเซลเซียส ฉีดได้ดำเนินการในโหมดแยกมีอัตราส่วนของ
1/40 ก๊าซฮีเลียมเป็นผู้ให้บริการ C-60 (Gasin, โปรตุเกส) ที่คง
การไหลของ 1 มล. / นาที เครื่องตรวจจับไอออนกับดักถูกกำหนดดังนี้
โอนสายอุณหภูมิต่าง ๆ นานาและดัก 280, 50, และ
180 C ตามลำดับ? มวลตั้งแต่ 50-600 เมตร / z ที่มี
อัตราการสแกน 6 สแกน / S การปล่อยในปัจจุบันเป็น 50 ลาอิเล็กตรอน
คูณตั้งอยู่ในโหมดเทียบกับขั้นตอนการปรับแต่งอัตโนมัติ.
เวลา Ionisation สูงสุด 25.000 LS กับ Ionisation
ระดับการจัดเก็บ 35 เมตร / z ปริมาณการฉีด 2 LL และการวิเคราะห์
ที่ได้ดำเนินการในโหมดการสแกนแบบเต็ม.
2.4.2 เงื่อนไข GC-MS สำหรับ trimethylsilyl (TMS) สัญญาซื้อขายล่วงหน้าวิเคราะห์
อุณหภูมิเตาอบตั้งอยู่ที่ 100 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีแล้วเพิ่มขึ้น
20? C / นาทีถึง 250 องศาเซลเซียสและจัดขึ้นเป็นเวลา 2 นาที 10? C / นาทีถึง 300 องศาเซลเซียส และ
จัดขึ้นเป็นเวลา 10 นาที สเปกตรัมมวลทั้งหมดที่ได้มาในผลกระทบอิเล็กตรอน
โหมด (EI) Ionisation ก็ยังคงออกไปในช่วงแรก 3 นาทีเพื่อ
หลีกเลี่ยงการบรรทุกเกินพิกัดตัวทำละลาย บัตรประจำตัวของสารประกอบที่ได้รับการ
ประสบความสำเร็จโดยการเปรียบเทียบเวลาการเก็บรักษาของพวกเขาและมวลสเปกตรัม
กับผู้บริสุทธิ์มาตรฐานอนุพันธ์ TMS จัดทำและฉีด
ภายใต้เงื่อนไขเดียวกันและจาก NIST 05 MS ห้องสมุด
ฐานข้อมูล นอกจากนี้ดัชนีการเก็บรักษา (RI) คือการทดลอง
การคำนวณและค่าที่ถูกเมื่อเทียบกับผู้ที่รายงานใน
NIST WebBook และในวรรณคดี (Isidorov & Vinogorova 2003;
เมเยอร์ et al, 2009;. Radulovic & Dordevic 2011; ต้อน et al, .,
2007) สำหรับคอลัมน์ GC 5% -phenyl-95% -dimethylpolysiloxane.
สำหรับความมุ่งมั่นของโรตารีสากลเป็น n-alkanes Series (C8-C40) ถูกนำมาใช้.
2.5 metabolites สกัดและอนุพันธ์
สกัดสารที่ได้ดำเนินการตาม
วิธีการรายงานก่อนหน้านี้โดยกลุ่มของเรา (Pereira, et al, 2012)..
สั้น ๆ , 100.00 ± 1.00 mg ของตัวอย่างแห้งถูกโอนไปยัง
ขวดแก้วและมาตรฐานภายในถูกเพิ่ม: 80 LL ของ Norvaline
(0.30 mg / ml) 20 LL เมทิล linolelaidate (10.00 mg / ml) และ
80 ของ LL desmosterol (2.00 mg / ml) ปริมาณการซื้อขายเสร็จสมบูรณ์แล้ว
2.00 มล. กับเอทานอล ขั้นตอนการสกัดเป็น
ดังนี้? บ่มเป็นเวลา 20 นาทีที่ 40 C ภายใต้กวนแม่เหล็ก
(200 รอบต่อนาที) ตัวอย่างที่ผ่านการกรองแล้วผ่านเมมเบรน 0.45 LM
(อร์ค) หาร 50 LL ของสารสกัดที่ถูกย้าย
ไปเป็นขวดแก้วตัวทำละลายที่ถูกระเหยภายใต้กระแสไนโตรเจน
และ 50 LL สาร derivatizing นี้ (MSTFA) ถูกเพิ่มลงใน
สารตกค้างแห้ง ขวดเป็นหมวกหมุนวนและให้ความร้อนสำหรับ
20 นาทีในเครื่องทำบล็อกแห้งเก็บรักษาไว้ที่ 40 องศาเซลเซียส การวิเคราะห์ทั้งหมดถูก
ดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่า.
2.6 metabolites ปริมาณ
เพื่อวัตถุประสงค์ในปริมาณแต่ละตัวอย่างถูกฉีดในเพิ่มขึ้นสามเท่า
และปริมาณของสารที่อยู่ในกลุ่มตัวอย่างได้รับการ
ประสบความสำเร็จจากเส้นโค้งการสอบเทียบของอนุพันธ์ TMS นั้น.
สารประกอบทั้งหมดถูกวัดในโหมดการสแกนด้วย
ข้อยกเว้นของ A-linolenic (m / Z 191, 335 และ 350) และโอเลอิก (m / z
264, 339 และ 354) สัญญาซื้อขายล่วงหน้าที่ได้รับการวัดพื้นที่ที่ได้รับ
จาก chromatogram ประมวลผลใหม่โดยใช้ลักษณะ
M / z เศษ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

6.8 . เป็น vf-5 MS ( 30 M 0.25 มม. 0.25 LM ) คอลัมน์ ( เครื่อง ) คือใช้ เป็น combipal อัตโนมัติ autosampler ( Varian , พาโลอัลโต , แคลิฟอร์เนีย )ใช้สำหรับทุกการทดลอง หัวฉีดให้ความร้อนกับพอร์ต250 C ฉีดได้ในโหมดแยกกับอัตราส่วน1 / 40 บริษัทขนส่งแก๊สฮีเลียม c-60 ( gasin , โปรตุเกส ) , ที่คงที่การไหลของ 1 มิลลิลิตร / นาที เครื่องตรวจจับไอออนกับดักไว้ดังนี้โอนสาย , ท่อและอุณหภูมิกับดัก 28 , 50 , และ180 องศาเซลเซียส ตามลำดับ มวลมีค่าตั้งแต่ 50 600 m / z , กับอัตราการสแกนสแกน / วินาที 6 มลพิษในปัจจุบันเป็น 50 ลาและอิเล็กตรอนคูณคือตั้งค่าในโหมดการปรับเทียบอัตโนมัติเวลา ionisation สูงสุด 25.000 LS กับ ionisationระดับกระเป๋า 35 M / Z . ปริมาณการฉีด 2 ll และการวิเคราะห์ในการปฏิบัติเต็มรูปแบบสแกนโหมด2.4.2 . GC - นางสาวเงื่อนไข trimethylsilyl ( TMS ) การวิเคราะห์ อนุพันธ์เตาอบอุณหภูมิถูกกำหนดไว้ที่ 100 องศาเซลเซียส นาน 1 นาที แล้วเพิ่ม20 องศาเซลเซียส / นาที 250 C และจัดขึ้นเป็นเวลา 2 นาที , 10 องศาเซลเซียส / นาที ถึง 300 องศาเซลเซียสที่จัดขึ้นเป็นเวลา 10 นาทีทั้งหมดที่ได้มาในช่วงมวลอิเล็กตรอนผลกระทบ( EI ) โหมด ionisation ยังคงปิดในช่วง 3 นาทีแรกหลีกเลี่ยงสารเคมี เกินพิกัด การจำแนกสารประกอบคือทำได้โดยการเปรียบเทียบเวลาการเก็บรักษาของพวกเขาและมวลสเปกตรัมกับมาตรฐานของงานที่เตรียมไว้ และฉีดอนุพันธ์บริสุทธิ์ภายใต้เงื่อนไขเดียวกันและจาก NIST 05 นางสาวห้องสมุดฐานข้อมูล นอกจากนี้ ดัชนีความคงทน ( ริ ) คือการทดลองที่คำนวณได้กับค่าถูกเปรียบเทียบกับรายงานในทั้งนี้ webbook และในวรรณกรรม ( isidorov & vinogorova , 2003 ;เมเยอร์ et al . , 2009 ; radulovic & dordevic 2011 ; ผู้เลี้ยง et al . ,2007 ) สำหรับคอลัมน์ GC ด้วย 5 % - phenyl-95 - ปลงชนม์ .สำหรับ ริ ความมุ่งมั่น เป็นชุด n-alkanes ( ดอง ) c40 ) คือใช้2.5 สารสกัดและซัลสารสกัดที่ได้ดำเนินการไปตามวิธีรายงานว่า ก่อนหน้านี้ โดยกลุ่มของเรา ( Pereira et al . , 2012 )สั้น ๆ , 100.00 ± 1.00 มก. ของตัวอย่างแห้งถูกส่งไปขวดแก้วและมาตรฐานภายในถูกเพิ่ม : 80 จะ norvaline( 0.30 มก. / มล. ) 20 จะได้เมทิล linolelaidate ( 10.00 มก. / มล. )80 จะ desmosterol ( 2.00 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ) ระดับเสียงก็เสร็จแล้ว2.00 กรัม กับเอทานอล ขั้นตอนการสกัดคือดังนี้ : บ่มเป็นเวลา 20 นาทีที่ 40 องศาเซลเซียสภายใต้สนามแม่เหล็กกวน( 200 รอบต่อนาที ) จำนวนแล้วกรองผ่านเมมเบรนสำหรับกล.( มิลลิ ) เป็นส่วนลงตัวของ 50 จะสกัดถูกย้ายกับขวดแก้ว , ตัวทำละลายระเหยภายใต้กระแสไนโตรเจนคือและ 50 จะของ derivatizing Reagent ( mstfa ) คือเพิ่มไปกากแห้ง ขวดถูกปกคลุม vortexed และความร้อนสำหรับ20 นาทีในบริการบล็อกไว้ที่ 40 C เครื่องวิเคราะห์ข้อมูลทั้งหมดแสดงทั้งสามใบ2.6 ปริมาณสารมีปริมาณแต่ละตัวอย่างถูกฉีดทั้งสามใบและปริมาณของสารที่มีอยู่ในตัวอย่างคือได้จากเส้นโค้งสอบเทียบของตนโดย TMS .มีปริมาณสารทั้งหมดในโหมดการสแกนเต็มรูปแบบกับข้อยกเว้นของ a-linolenic ( M / Z 191 , 335 , 350 ) และโอเลอิก ( M / Z264 , และ 354 ) อนุพันธ์ที่ถูก quantified โดยพื้นที่ได้รับจากแปรสภาพการปลูกถ่ายไต การใช้ลักษณะส่วน M / Z .