PCR amplification: The PCR was perf

PCR amplification: The PCR was performed according to MCVEIGH et al., (1996) except that with the annealing temperature of 68 °C. The primers used specifically amplified partiallength 16S rRNA gene from actinomycetes and related genera. Although corresponding regions of published 16S rDNA sequences of Thermoactinomyces strains differed by one or two bases from the one of the primers, these primers were successfully applied without modifications to all Thermoactinomyces strains under study. The primers are as follows: ACT283F (5’-GGGTAGCCGGCCUGAGAGGG) corresponding to E. coli 16S rRNA positions 283 to 302 and ACT1360R (5’-CTGATCTGCGATTACTAGCGACTCC) corresponding to the complement of Escherichia coli 16S rRNA positions 1360 to 1336. For the ATCC strains, 10 PCR reactions were pooled whereas 3 PCR reactions were pooled for the environmental strains. If the gel showed more than one PCR product, the target band (about 1050 base pairs (bp)) was purified using the QIAquick gel extraction kit (Qiagen).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กระบือ: PCR ได้ดำเนินการตาม MCVEIGH et al., (1996) ยกเว้นที่ มีอุณหภูมิหลอม 68 องศาเซลเซียส ไพรเมอร์ที่ใช้โดยเฉพาะขยาย partiallength 16S rRNA ยีนจาก actinomycetes และสกุลที่เกี่ยวข้อง แม้ว่าสอดคล้องภูมิภาคเผยแพร่ 16S rDNA ลำดับของสายพันธุ์ Thermoactinomyces ที่แตกต่างไปตามฐานที่หนึ่ง หรือสองตัวหนึ่งที่ไพรเมอร์ ไพรเมอร์เหล่านี้ถูกนำไปใช้ โดยไม่มีการปรับเปลี่ยนทุกสายพันธุ์ Thermoactinomyces การศึกษา ไพรเมอร์ที่เป็นดังนี้: ACT283F (5'-GGGTAGCCGGCCUGAGAGGG) ที่สอดคล้องกับ E. coli 16S rRNA ตำแหน่ง 283 302 และ ACT1360R (5'-CTGATCTGCGATTACTAGCGACTCC) ที่สอดคล้องกับส่วนเติมเต็มของ Escherichia coli 16S rRNA ตำแหน่ง 1360 1336 สำหรับสายพันธุ์ ATCC, 10 ปฏิกิริยา PCR มีพูในขณะที่ปฏิกิริยา PCR 3 ถูกพูสำหรับสายพันธุ์สิ่งแวดล้อม ถ้าเจพบมากกว่าหนึ่งผลิตภัณฑ์ PCR วงเป้าหมาย (ประมาณ 1050 คู่เบส (bp)) บริสุทธิ์ใช้ชุดสกัดเจ QIAquick (Qiagen)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ขยาย PCR: ผู้ PCR ได้ดำเนินการตาม McVeigh, et al (1996) ยกเว้นว่ามีอุณหภูมิการอบ 68 ° C. ไพรเมอร์ที่ใช้ขยายเฉพาะ partiallength 16S rRNA ยีนจาก actinomycetes และจำพวกที่เกี่ยวข้อง แม้ว่าภูมิภาคของการตีพิมพ์ลำดับ 16S rDNA ของสายพันธุ์ที่แตกต่าง Thermoactinomyces โดยหนึ่งหรือสองฐานจากหนึ่งในไพรเมอร์ที่สอดคล้องไพรเมอร์เหล่านี้ถูกนำไปใช้โดยไม่ได้ประสบความสำเร็จในการปรับเปลี่ยน Thermoactinomyces ทุกสายพันธุ์ภายใต้การศึกษา ไพรเมอร์มีดังนี้ ACT283F (5'-GGGTAGCCGGCCUGAGAGGG) ที่สอดคล้องกับ E. coli 16S rRNA ตำแหน่ง 283-302 และ ACT1360R (5'-CTGATCTGCGATTACTAGCGACTCC) ที่สอดคล้องกับส่วนประกอบของเชื้อ Escherichia coli 16S rRNA ตำแหน่ง 1360 เพื่อ 1336. สำหรับสายพันธุ์ ATCC 10 ปฏิกิริยา PCR ถูกรวบรวมในขณะที่ 3 PCR ปฏิกิริยาถูกรวบรวมสำหรับสายพันธุ์สิ่งแวดล้อม ถ้าเจลแสดงให้เห็นว่าผลิตภัณฑ์ PCR มากกว่าหนึ่งวงดนตรีเป้าหมาย (ประมาณ 1,050 คู่เบส (BP)) บริสุทธิ์โดยใช้ชุด QIAquick สกัดเจล (Qiagen)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เทคนิค : การขยาย PCR ตามกรณี แมคเวจช์ et al . , ( 1996 ) ยกเว้นกับอุณหภูมิการอบอ่อน 68 ° C . ไพรเมอร์ใช้เฉพาะแถบ partiallength เบส 16S rRNA ยีนจากเชื้อแอคติโนมัยสีทและเกี่ยวข้องกับสกุล แม้ว่าสอดคล้องภูมิภาคเผยแพร่ 16S rDNA ลำดับของ thermoactinomyces สายพันธุ์ที่แตกต่างจากหนึ่งหรือสองฐานจากหนึ่งในไพรเมอร์ , รองพื้นเหล่านี้สมัครเรียบร้อยแล้วโดยไม่ต้องปรับเปลี่ยนทุก thermoactinomyces สายพันธุ์ที่ศึกษา ไพรเมอร์มีดังนี้ act283f ( 5 " - gggtagccggccugagaggg ) สอดคล้องกับ E . coli เบส 16S rRNA ตำแหน่ง 283 เพื่อคอย act1360r ( 5 " - ctgatctgcgattactagcgactcc ) ที่สอดคล้องกับองค์ประกอบของ 16S rRNA เชื้อ Escherichia coli 1360 ถึงตำแหน่งของ . สำหรับสายพันธุ์ ATCC ปฏิกิริยา PCR ได้รวม 10 และ 3 ) ปฏิกิริยารวมสำหรับสายพันธุ์ที่สิ่งแวดล้อม ถ้าเจล พบว่าผลิตภัณฑ์ PCR มากกว่าหนึ่งวงดนตรีที่เป้าหมาย ( ประมาณ 1050 คู่เบส ( BP ) บริสุทธิ์ใช้ qiaquick เจลสกัดชุด ( เพิ่ม )