. Methods2.1. Preparation of GBS-sp

. Methods
2.1. Preparation of GBS-spiked samples
Streptococcus agalactiae (strain ATCC 12386) was cultured overnight
on Columbia Blood Agar (CBA) at 37 °C in a 10% CO2 atmosphere and resuspended
in sterile phosphate buffered saline (PBS) to an optical density
of ~1.5. Tenfold serial dilutions were prepared with the number of
colony forming units per ml (CFU·ml−1
) ascertained by the spread
plate method (Cruickshank). Triplicate aliquots (100 μl) of duplicate serial
dilutions were plated onto CBA plates. Following overnight incubation
at 37 °C in 10% CO2 atmosphere individual colonies were counted
and the mean CFU·ml−1 count determined. Aliquots (200 μl) of the
GBS suspension were stored at −20 °C until required. Each aliquot of
GBS cells underwent one freeze-thaw cycle only. Aliquots (2.8 ml) of
sterile PBS or whole EDTA-treated human blood were inoculated with
cell suspension (200 μl) containing either 6.3 × 104 cfu·μl
−1 (“high
spike” sample) or 63 cfu·μl
−1 (“low spike” sample) prior to DNA
extraction.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

. วิธี2.1. เตรียมตัวอย่างที่ได้ถูกแทง GBSอุณหภูมิ agalactiae (สายพันธุ์ ATCC 12386) ถูกล้างค้างคืนในโคลัมเบียวุ้นเลือด (CBA) ที่ 37 ° C ในบรรยากาศ 10% CO2 และ resuspendedในปลอดเชื้อฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ (PBS) ที่มีความหนาแน่นออปติคอลของ ~ 1.5 วจัดเจือจางประจำสิบเท่ากับจำนวนอาณานิคมสร้างหน่วยต่อมิลลิลิตร (CFU·ml−1) ตรวจสอบ โดยการแพร่กระจายแผ่นวิธี (Cruickshank) ลข้อ aliquots (100 μl) ของอนุกรมซ้ำเจือจางถูกเคลือบลงบนแผ่น CBA บ่มต่อคืนนับโคโลนีแต่ละบรรยากาศที่ 37 ° C 10% CO2และจำนวน CFU·ml−1 หมายถึงการกำหนด Aliquots (200 μl) ของการระงับ GBS ถูกเก็บไว้ที่ −20 ° C จนกว่าจำเป็น แต่ละส่วนลงตัวของเซลล์ GBS ผ่าน freeze-thaw รอบหนึ่งเท่านั้น Aliquots (2.8 ml) ของPBS เป็นหมันหรือเลือดมนุษย์ทั้ง EDTA ถือได้ inoculated ด้วยระงับเซลล์ (200 μl) ที่ประกอบด้วยทั้ง cfu·μl 6.3 × 104− 1 ("สูงตัวอย่างเข็ม") หรือ 63 cfu·μl− 1 (ตัวอย่าง "เข็มต่ำ") ก่อนดีเอ็นเอสกัด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

. วิธีการ
2.1 การเตรียมการของกลุ่มตัวอย่าง GBS-ถูกแทง
Streptococcus agalactiae (สายพันธุ์ ATCC 12386) คือการเพาะเลี้ยงในชั่วข้ามคืน
ในโคลัมเบียเลือดวุ้น (CBA) ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสในบรรยากาศ CO2 10% และ resuspended
ในฟอสเฟตหมันบัฟเฟอร์น้ำเกลือ (PBS) เพื่อให้ความหนาแน่นแสง
ของ ~ 1.5 . สิบเท่าเจือจางอนุกรมถูกจัดทำขึ้นด้วยจำนวนของ
อาณานิคมหน่วยขึ้นรูปต่อมิลลิลิตร (CFU · ML-1
) ตรวจสอบได้โดยการแพร่กระจาย
แผ่นวิธี (Cruickshank) aliquots เพิ่มขึ้นสามเท่า (100 ไมโครลิตร) ของอนุกรมซ้ำ
เจือจางถูกชุบลงบนแผ่น CBA ต่อไปนี้การบ่มค้างคืน
ที่ 37 ° C ใน 10% บรรยากาศ CO2 บุคคลอาณานิคมนับ
และค่าเฉลี่ย CFU · ML-1 นับกำหนด aliquots (200 ไมโครลิตร) ของ
การระงับ GBS ถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียสจนต้อง หารของแต่ละ
เซลล์ GBS เปลี่ยนไปหนึ่งรอบแช่แข็งละลายเท่านั้น aliquots (2.8 มิลลิลิตร)
ผ่านการฆ่าเชื้อหรือพีบีเอสได้รับการรักษา EDTA เลือดของมนุษย์ทั้งที่ถูกเชื้อด้วย
เซลล์แขวนลอย (200 ไมโครลิตร) ที่มีทั้ง 6.3 × 104 CFU ·ไมโครลิตร
-1 ( "สูง
เข็ม" ตัวอย่าง) หรือ 63 cfu ·ไมโครลิตร
-1 ( " ขัดขวางต่ำ "ตัวอย่าง) ก่อนที่จะมีดีเอ็นเอ
สกัด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

. วิธีการ2.1 . การเตรียมการของ GBS ถูกแทง ตัวอย่างเชื้อแบคทีเรียแลคเตีย ( สายพันธุ์ ATCC 12386 ) เลี้ยงค้างคืนบนอาหารวุ้นเลือดโคลัมเบีย ( CBA ) ที่ 37 ° C ในบรรยากาศ CO2 10 % และ resuspendedในฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือปลอดเชื้อ ( PBS ) มีความหนาแน่นของแสง~ 1.5 โตต่อเนื่องเตรียมด้วยวิธีการจำนวนสร้างหน่วยต่อมิลลิลิตร ( โคโลนีอาณานิคมด้วย− 1 มิลลิลิตร) การตรวจสอบโดยการแพร่กระจายแบบจาน ( กล้องอันนี้ ) ทำสำเนาสามฉบับเฉยๆ ( 100 μ L ) ของอนุกรมที่ซ้ำกันมีวิธีการชุบลงบน CBA จาน ต่อไปนี้ระยะเวลาค้างคืนที่ 37 ° C ในบรรยากาศ CO2 10% แต่ละอาณานิคมได้ถูกนับและหมายถึง CFU ml ด้วย− 1 นับวัด เฉยๆ ( 200 μ L ) ของGBS ช่วงล่างที่อุณหภูมิ 20 ° C −จนต้อง ในการเทศนาของGBS เซลล์จำนวนหนึ่งรอบจะเกิดเท่านั้น เฉยๆ ( 2.8 ml ) ของพีบีเอสเป็นหมันหรือทั้ง EDTA ถือว่ามนุษย์ปลูกเชื้อด้วยเลือดเซลล์แขวนลอย ( 200 μ L ) ที่มีทั้ง 6.3 × 104 CFU ·μ l− 1 ( " สูงเข็ม " ตัวอย่าง ) หรือ 63 CFU ·μ l− 1 ( " ชั่วคราว " ต่ำตัวอย่างดีเอ็นเอ ) ก่อนการสกัด