2.4. Phytase assayPhytase activity

2.4. Phytase assay
Phytase activity was measured in terms of inorganic ortophosphate
released from the phytic acid by phytase, using a modification
of the method of Fiske and Subbarow (Fiske & Subbarow,
1925). A reaction mixture containing 150 mL of cell-free supernatant,
cellular crude protein extract and 600 mL of substrate (3 mmol/
L Na-phytate in 0.2 mol/L Na-acetate buffer, pH 4.0) was incubated
at 37
C. After 30, 60, 90, 120 and 180 min, the reactionwas stopped
adding 750 mL of 5% (v/v) trichloroacetic acid (Sigma). The released
inorganic phosphate was measured by adding 750 mL of colour
reagent prepared daily by mixing four volumes of 1.5% (w/v)
ammonium molybdate (Sigma) in a 5.5% (v/v) sulphuric acid solution
(Carlo Erba Reagenti, Milan, Italy) and one volume of a 2.7%
(w/v) ferrous sulphate (Sigma) solution. The absorbance was
measured at 700 nm. One U of phytase activity was defined as the
amount of enzyme (contained in the initial volume of a stationaryphase
culture of ca. 9.0 log CFU/mL of medium) required to liberate
1 mmol/L of phosphate per min at pH 4.0 and 37
C. The specific
phytase activity was defined as U per mg of protein.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4. โอสเตบิลวิเคราะห์กิจกรรมโอสเตบิลถูกวัดนินทรีย์ ortophosphateออกจากกรดไฟติก โดยใช้การเปลี่ยนแปลง โอสเตบิลวิธีการฟิกส์และ Subbarow (ฟิกส์ & Subbarow1925) . ส่วนผสมปฏิกิริยาที่ประกอบด้วย 150 มล.ของ supernatant ฟรีเซลล์สารสกัดจากโปรตีนเซลลูลาร์และ 600 มิลลิลิตรของพื้นผิว (3 โมล /มี incubated L Na-phytate ใน 0.2 mol/L อะซิเตนาบัฟเฟอร์ pH 4.0)ที่ 37 c หลังจาก 30, 60, 90, 120 และ 180 นาที reactionwas หยุดเพิ่ม 750 มล.ของ 5% (v/v) trichloroacetic กรด (Sigma) การนำออกใช้โดยวัดจากการเพิ่ม 750 มล.สีอนินทรีย์ฟอสเฟตรีเอเจนต์ไว้ ด้วยผสมสี่ปริมาณ 1.5% (w/v)แอมโมเนีย molybdate (Sigma) ในโซลูชันกรดซัลฟูริก 5.5% (v/v)(Carlo Erba Reagenti มิลาน อิตาลี) และหนึ่งระดับ 2.7%(w/v) ซัลเฟตเหล็ก (Sigma) โซลูชั่น ค่าที่แก้ไขวัดที่ 700 nm U หนึ่งโอสเตบิลกิจกรรมถูกกำหนดเป็นการปริมาณของเอนไซม์ (อยู่ในระดับ stationaryphase เป็นต้นต้องปลดปล่อยวัฒนธรรมของ ca. 9.0 ล็อก CFU/mL ของกลาง)1 mmol/L ของฟอสเฟตต่อนาทีที่ pH 4.0 และ 37 เซลเซียส เฉพาะโอสเตบิลกิจกรรมถูกกำหนดเป็น U ต่อมิลลิกรัมโปรตีน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 phytase ทดสอบ
กิจกรรม phytase วัดในแง่ของ ortophosphate นินทรีย์
ปล่อยออกมาจากกรดไฟติกโดย phytase โดยใช้การปรับเปลี่ยน
วิธีการของ Fiske และ Subbarow (Fiske & Subbarow ที่
1925) ส่วนผสมที่มีปฏิกิริยา 150 มิลลิลิตรใสปราศจากเซลล์,
สารสกัดจากโปรตีนของเซลล์และ 600 มิลลิลิตรของพื้นผิว (3 มิลลิโมล /
ลิตรนาไฟเตทใน 0.2 โมล / ลิตรบัฟเฟอร์นาน้ำนมค่า pH 4.0) ถูกบ่ม
ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส หลังจากวันที่ 30, 60, 90, 120 และ 180 นาที, reactionwas หยุด
เพิ่ม 750 มล 5% (v / v) กรดไตรคลอโร (ซิกม่า) ปล่อย
ฟอสเฟตอนินทรีวัดโดยการเพิ่ม 750 มลสี
น้ำยาเตรียมทุกวันโดยการผสมสี่เล่ม 1.5% (w / v)
โมลิบแอมโมเนียม (Sigma) ใน 5.5% (v / v) สารละลายกรดซัลฟูริก
(Carlo Erba Reagenti, มิลาน อิตาลี) และปริมาณหนึ่งของ 2.7%
(w / v) เฟอรัสซัลเฟต (ซิกม่า) วิธีการแก้ปัญหา ค่าการดูดกลืนได้รับการ
วัดที่ 700 นาโนเมตร หนึ่งของกิจกรรม U phytase ถูกกำหนดเป็น
ปริมาณของเอนไซม์ (ที่มีอยู่ในปริมาณเริ่มต้นของ stationaryphase
วัฒนธรรมของรัฐแคลิฟอร์เนียได้ 9.0 log CFU / mL ของกลาง) ที่จำเป็นเพื่อปลดปล่อย
1 มิลลิโมล / ลิตรของฟอสเฟตต่อนาทีที่ pH 4.0 และ 37? ซี เฉพาะ
กิจกรรม phytase ถูกกำหนดเป็น U ต่อมิลลิกรัมโปรตีน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . และการทดสอบกิจกรรมที่ 1 เป็นวัดในแง่ของ ortophosphate อนินทรีย์ปล่อยออกมาจากกรดไฟติก โดยการใช้ ใช้ดัดแปลงของวิธีการ และ subbarow ฟิกซ์ ( subbarow ฟิกซ์ & ,1925 ) ปฏิกิริยาการสังเคราะห์นำส่วนผสมประกอบด้วย 150 มิลลิลิตร ,สารสกัดจากเซลล์โปรตีนและ 600 มิลลิลิตร ( 3 มิลลิโมล / พื้นผิวผม na : 0.2 mol / l ในนา อะซิเตทบัฟเฟอร์ pH 4.0 ) คือ )ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส หลังจาก 30 , 60 , 90 , 120 และ 180 นาที พบว่าหยุดเพิ่ม 750 ml 5 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) กรดไตรคลอโรอะซิติก ( Sigma ) การปล่อยตัวอนินทรีย์ฟอสเฟตถูกวัดโดยการเพิ่ม 750 มิลลิลิตร สีสารเคมีที่เตรียมไว้ทุกวัน โดยผสมสี่เล่ม 1.5 % ( w / v )แอมโมเนียมโมลิบเดต ( Sigma ) ใน 5.5 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) สารละลายกรดซัลฟิวริก( คาร์โล มา reagenti , มิลาน , อิตาลี ) และระดับหนึ่งของ 2.7%( w / v ) เฟอรัสซัลเฟต ( Sigma ) โซลูชั่น น คือวัดที่ 700 นาโนเมตร กิจกรรมที่ 1 คือ u หนึ่งหมายถึงปริมาณของเอนไซม์ที่มีอยู่ในเล่มแรกของ stationaryphaseวัฒนธรรมแห่งแคลิฟอร์เนีย 9.0 log CFU / ml ) ต้องปลดปล่อยกลาง1 มิลลิโมล / ลิตรของฟอสเฟตต่อนาทีที่ pH 4.0 และ 37 องศาเซลเซียส โดยเฉพาะกิจกรรมที่ 1 คือ เช่น U / mg โปรตีน