vation was done by incubating for 1

vation was done by incubating for 10 min at 95 C. The following
temperature range of 95 C for 20 s, 55 C for 20 s and 72 C for 30 s
were used for the 35 PCR cycles.
2.3.3. Gel electrophoresis
Agarose gel DNA electrophoresis was performed according to the
modified method of Saghai-Maroof et al. (1984). Two grams of
agarose (BioRad agarose, Qiagen) was prepared in 98 ml 1Â TAE
(Tris/Acetate/EDTA) buffer to give a 2% solution and heated to
boiling point in a water bath. The solution was allowed to cool to
60 C prior to the addition of 3 ml ethidium bromide (Et Br) (10 mg/l
in water to a final concentration of 0.5 mm/ml) and thoroughly
mixed. The gel was poured in glass plates. Polymerase Chain Reac-
tion products (as published in Iheanacho et al., 2014) were slowly
loaded (2 ml) into the wells. A voltage of 5 V/cm was applied to the gel
for the electrophoresis run and PCR product (Fig. 2) was viewed
using the Vacutec Gel documentation system and product size
confirmed by comparison to the Middle Range Fast Ruler. The mo-
lecular size of DNA obtained after extraction was determined by gel
electrophoresis. The gel electrophoresis allowed for the separation
and visualization of DNA fragments from A. parasiticus and A. flavus.
3. Results and discussion
The occurrence and contamination levels of A. flavus and
A. parasiticus in the various selected compound feeds were assessed
and data summarised in Table 1. 1A and B in Fig. 1 show typical
colonies of these species of fungi isolated from feed samples, while
1C and D (Fig. 1) show the morphological microscopic identification
of each fungal species. Overall data indicated that 67.5 and 51.1% of
feed samples were found to be contaminated with A. flavus and
A. parasiticus, respectively. Accordingly, poultry feed had the
highest contamination mean level when compared to cattle, and
pig, while the lowest contamination was observed in horse feed.
Reports from South Africa (Passone et al., 2012; Somai and
Belewa, 2011) and other regions of the world (Ige et al., 2012; Pitt
and Hocking, 2006; Razzaghi-Abyaneh et al., 2006), show that
the two species of Aspergillus are most widely studied. This maybe
as a result of their occurrence frequencies, especially A. flavus as
compared to A. parasiticus in feeds, and their individual abilities to
produce aflatoxin. However, their identifications based on synoptic
keys were compared to that obtained in this study.
3.1. Molecular identification of A. flavus and A. parasiticus
Molecular sizes of the DNA of fungal species were estimated by
the fluorescence intensity and comparison of the distance travelled
with that of the molecular weight of marker standard as measured
using gel electrophoresis and shown in Fig. 2. However, the data
indicated that the DNA fragment in lane IV compared to lane III has
relatively distinct molecular sizes of 742 bp and 737 bp. This
distinct size difference, in relation to their Restriction Fragment
Length Polymorphism (RFLP) according to Somashekar et al. (2004)
studies, may be suggested to give reasons for the AF production
capacity of A. parasiticus against that of A. flavus (Iheanacho, 2012;
Iheanacho et al., 2014), with respect to the AF types they both

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทำ โดย incubating ใน 10 นาทีที่ 95 C. vation ต่อไปนี้ช่วงอุณหภูมิ 95 C สำหรับ 20 s, 55 C s และ 72 C 20 สำหรับ 30 sใช้สำหรับวงจร PCR 352.3.3. เจ electrophoresis Agarose เจล DNA electrophoresis มีดำเนินการตามmodified วิธีของ Saghai Maroof et al. (1984) สองกรัมของagarose (BioRad agarose, Qiagen) ถูกเตรียมใน 98 ml 1Â เต้บัฟเฟอร์ (ตรี/Acetate/EDTA) เพื่อให้การแก้ไขปัญหา 2% และว่ายไปจุดเดือดในอ่างน้ำ โซลูชันได้รับอนุญาตให้เย็นเพื่อC 60 ก่อนแห่งโบรไมด์ ethidium 3 ml (Et Br) (10 mg/lในน้ำความเข้มข้น final 0.5 mm/ml) แล้วผสม เจมี poured ในจานแก้ว พอลิเมอเรสเชน Reac-ผลิตภัณฑ์สเตรชัน (เผยแพร่ใน Iheanacho et al., 2014) ได้ช้าโหลด (2 ml) ลงในบ่อ แรงดันของ 5 V/cm ใช้กับเจสำหรับการทำ electrophoresis และ PCR ผลิตภัณฑ์ (Fig. 2) ดูใช้เจ Vacutec เอกสารประกอบระบบและผลิตภัณฑ์ขนาดconfirmed โดยเปรียบเทียบกับกลางช่วงเร็วไม้บรรทัด หมอ-lecular ขนาดของดีเอ็นเอที่ได้รับหลังจากที่สกัดถูกกำหนด โดยเจelectrophoresis Electrophoresis เจลได้แยกและบางส่วนของการแสดงภาพประกอบเพลงของดีเอ็นเอจาก A. parasiticus และอ. flavus3. ผลลัพธ์ และสนทนา ระดับเกิดและการปนเปื้อนของ A. flavus และA. parasiticus ในเนื้อหาสรุปผสมเลือกต่าง ๆ ถูกประเมินและ summarised ข้อมูลในตารางที่ 1 1A และ B ใน Fig. 1 แสดงทั่วไปอาณานิคมของพันธุ์เชื้อราเหล่านี้แยกต่างหากจากตัวอย่างอาหาร ขณะที่1C และ D (Fig. 1) แสดง identification กล้องจุลทรรศน์สัณฐานเชื้อราแต่ละชนิด โดยรวม ข้อมูลระบุที่ 67.5 และ 51.1%อาหารตัวอย่างพบการปน A. flavus และA. parasiticus ตามลำดับ ตาม ตัวดึงข้อมูลสัตว์ปีกมีการปนเปื้อนหมายถึงระดับสูงเมื่อเทียบกับวัว และหมู ในขณะที่การปนเปื้อนต่ำที่พบในอาหารม้า รายงานจากแอฟริกาใต้ (Passone et al., 2012 Somai และBelewa, 2011) และภูมิภาคอื่น ๆ ของโลก (Ige et al., 2012 พิตต์และ Hocking, 2006 Razzaghi-Abyaneh และ al., 2006), แสดงว่าพันธุ์ Aspergillus สองที่ได้ศึกษากันอย่างแพร่หลาย ทีนี้จากการเกิดคลื่นความถี่ โดยเฉพาะ A. flavus เป็นเมื่อเทียบกับ A. parasiticus ในตัวดึงข้อมูล และความสามารถในแต่ละการผลิต aflatoxin อย่างไรก็ตาม identifications ของพวกเขาตามสหทรรศน์คีย์ถูกเปรียบเทียบกับที่ได้รับในการศึกษานี้3.1. โมเลกุล identification A. flavus และ A. parasiticus ขนาดโมเลกุลของดีเอ็นเอของสายพันธุ์เชื้อราได้โดยประมาณความเข้ม fluorescence และเปรียบเทียบระยะทางการเดินทางกับค่าของน้ำหนักโมเลกุลเครื่องหมายมาตรฐานเป็นใช้เจล electrophoresis และแสดงใน Fig. 2 อย่างไรก็ตาม ข้อมูลระบุว่า มีส่วนดีเอ็นเอใน IV เลนไปเลน IIIขนาดโมเลกุลค่อนข้างแตกต่างกันของ 742 bp และ 737 bp. นี้ความแตกต่างขนาดแตกต่างกัน เกี่ยวกับส่วนของข้อจำกัดความยาวโพลีมอร์ฟิซึม (RFLP) ตาม Somashekar et al. (2004)ศึกษา อาจแนะนำให้เหตุผลสำหรับการผลิต AFกำลังการผลิตของ A. parasiticus กับของอ. flavus (Iheanacho, 2012Iheanacho et al., 2014), กับ AF ชนิดของพวกเขาทั้งสอง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สังเกตได้โดยการแช่ 10 นาทีที่ 95 C . ต่อไปนี้
ช่วงอุณหภูมิ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 S 55 C 20 และ 72 C 30 S
3 ซึ่งถูกใช้เพื่อรอบ
2.3.3 . เจล
เจล DNA electrophoresis ได้ปฏิบัติตาม
Modi จึงเอ็ดวิธีการ saghai maroof et al . ( 1984 ) 2 กรัม ( biorad
, , เพิ่ม , ) ถูกเตรียมใน 98 มล. 1 Âแท
( บริษัท / / น้ำนม EDTA ) บัฟเฟอร์ที่จะให้โซลูชันที่ 2 % และเร่าร้อน
จุดเดือดในอ่างน้ำ โซลูชั่นได้รับอนุญาตให้เย็น

60 C ก่อนที่จะเพิ่ม 3 โบรไมด์คู่ ml ( ET BR ) ( 10 mg / l
ในน้ำ เพื่อความเข้มข้น 0.5 มม. จึงนาล / มิลลิลิตร ) และทั่วถึง
ผสม เจลถูกเทลงในจานแก้ว ปฏิกิริยาลูกโซ่ reac -
tion ผลิตภัณฑ์ ( ที่เผยแพร่ iheanacho et al . , 2014 ) ช้า
โหลด ( 2 มล. ) ลงในหลุม แรงดัน 5 โวลท์ / เซนติเมตรใช้เจล
สำหรับเรสวิ่งและตรวจสินค้า ( รูปที่ 2 ) คือดู
ใช้ vacutec เจลเอกสารระบบและถ่ายทอดคอนขนาด
ผลิตภัณฑ์ rmed โดยเปรียบเทียบกับระยะกลางอย่างรวดเร็ว ไม้บรรทัด มิสซูรี -
lecular ขนาดของดีเอ็นเอที่ได้จากการสกัดถูกกำหนดโดยเจล
เรส เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสได้รับอนุญาตสำหรับการแยก
และการมองเห็นของชิ้นส่วนดีเอ็นเอจาก ผู้ดูแล และ fl avus .
3 ผลและการอภิปราย
เกิดและระดับการปนเปื้อนของ A และfl avus
. ผู้ดูแล ในต่าง ๆเลือกอาหารผสมจะถูกประเมินและสรุปผลข้อมูลในตาราง
1 1A และ B ในรูปที่ 1 แสดงอาณานิคมทั่วไป
เหล่านี้ชนิดของเชื้อราที่แยกได้จากตัวอย่างอาหารขณะ
c และ d ( ฟิค1 ) แสดงลักษณะทางกล้องจุลทรรศน์ identi จึงบวก
แต่ละเชื้อราชนิด ข้อมูลโดยรวม พบว่า ตัวอย่างร้อยละ 51.1 และ 67.5
อาหาร พบว่ามีการปนเปื้อนด้วย fl avus
. ผู้ดูแล และ ตามลำดับ ดังนั้น อาหารมีการปนเปื้อนจากระดับเฉลี่ยสูงสุดเมื่อเทียบกับโค

หมู และในขณะที่การปนเปื้อนน้อยที่สุด คือ พบในอาหารม้า
.รายงานจากแอฟริกาใต้ ( passone et al . , 2012 ; somai และ
belewa , 2011 ) และภูมิภาคอื่น ๆของโลก ( IgE et al . , 2012 ; และพิตต์
ขาย , 2006 ; razzaghi abyaneh et al . , 2006 ) แสดงให้เห็นว่าสองสายพันธุ์ของเชื้อรา Aspergillus
ส่วนใหญ่การศึกษาอย่างกว้างขวาง . นี้อาจเป็นผลมาจากความถี่
ที่เกิดขึ้น โดยเฉพาะ อ. fl avus เป็น
เมื่อเทียบกับ A . ผู้ดูแลในอาหารสัตว์ และความสามารถของแต่ละคน

ผลิตflลาท ซิน . อย่างไรก็ตาม ตนจึง identi ไอออนตามกุญแจ
สรุปเปรียบเทียบเพื่อที่ได้รับในการศึกษา .
1 . โมเลกุลจึง identi ไอออนบวก . fl avus และ ผู้ดูแล
โมเลกุลขนาดดีเอ็นเอของเชื้อราชนิดโดยประมาณ
fl uorescence ความรุนแรงและการเปรียบเทียบระยะทางเดินทาง
ที่มีน้ำหนักโมเลกุลเครื่องหมายมาตรฐานที่วัด
ใช้เจลและแสดงในรูปที่ 2 อย่างไรก็ตาม ข้อมูล
พบว่าดีเอ็นเอใน 4 เลนเมื่อเทียบกับเลน 3 มีขนาดของโมเลกุลที่แตกต่างกัน
ค่อนข้างเป็น BP และ 737 BP . ขนาดนี้
แตกต่างกันความแตกต่างในความสัมพันธ์ของพวกเขาจำกัด ~
length polymorphism ( RFLP ) ตาม somashekar et al . ( 2004 )
ศึกษา อาจจะแนะนำให้เหตุผลสำหรับ
การผลิต AFความจุของ ผู้ดูแล กับที่ของ fl avus ( iheanacho , 2012 ;
iheanacho et al . , 2010 ) , ด้วยความเคารพต่อ AF ประเภททั้งคู่