Reagent setup The pH of 0.2 M MES s

Reagent setup
The pH of 0.2 M MES solution was adjusted with 1.0 M tris solution to 5.8.
Protoplast medium (PM): prepare 20 mM MES (pH 5.8) containing 0.5 M mannitol, 20 mM KCl, and 10 mM CaCl2.
Enzyme solution: prepare 1% (wt/vol) cellulase Onozuka R-10 and 0.5% (wt/vol) macerozyme R-10 in PM solution. Warm
the solution at 55 C for 10 min to enhance solubility. Cool to room temperature (25 C). Filter the final enzyme solution
through a 0.22-mm syringe filter device into a Petri dish (100 Â 25 mm2 for 10 ml enzyme solution).
Washing and incubation solution (WI) solution: prepare 4 mM MES (pH 5.8) containing 0.5 M mannitol and 20 mM KCl.
FDA stock solution: dissolve 5 mg of FDA in 1 ml acetone, and store in refrigerator.Note: The protoplasts medium (PM) and
the enzyme solution were filter sterilized. The enzyme solution should be freshly prepared.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การตั้งค่ารีเอเจนต์ PH ของ MES 0.2 M ถูกปรับปรุง ด้วยการแก้ไข 5.8 ตรี 1.0 M Protoplast ปานกลาง (PM): เตรียม mannitol 0.5 M มี MES (pH 5.8) 20 มม. 20 มม. KCl และ 10 มม. CaCl2 โซลูชั่นเอนไซม์: เตรียม 1% (wt/vol) cellulase Onozuka R-10 0.5% (wt/vol) macerozyme R-10 ในโซลูชัน PM อบอุ่น การแก้ปัญหาที่ C 55 ใน 10 นาทีเพื่อเพิ่มการละลาย เย็นที่อุณหภูมิห้อง (25 C) กรองโซลูชั่นเอนไซม์ final ผ่านอุปกรณ์ filter $ 0.22 มม.เข็มลงใน Petri แบบจาน (100 Â 25 มม 2 ได้ภายในโซลูชันเอนไซม์ 10 ml) โซลูชันโซลูชัน (WI) ซักผ้าและบ่มเพาะวิสาหกิจ: เตรียม mannitol 0.5 M มี MES (pH 5.8) 4 มม.และ 20 มม. KCl โซลูชันหุ้น FDA: ละลายเม็ดของ FDA ในอะซิโตน 1 ml และเก็บในตู้เย็นหมายเหตุ: โปสื่อ (PM) และ โซลูชั่นเอนไซม์ filter sterilized ได้ โซลูชั่นเอนไซม์ควรเตรียมสด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การติดตั้ง Reagent
ค่า pH 0.2 การแก้ปัญหา M MES มีการปรับด้วยสารละลาย 1.0 M tris 5.8.
กลาง Protoplast (PM): เตรียมความพร้อม 20 มิลลิเมตร MES (pH 5.8) ที่มี 0.5 M แมนนิทอล, 20 มิลลิ KCl และ 10 มม CaCl2.
การแก้ปัญหาของเอนไซม์: เตรียม 1% (น้ำหนัก / ปริมาตร) เซลลู Onozuka R-10 และ 0.5% (น้ำหนัก / ปริมาตร) เซอร์โรไซม์ R-10 ในการแก้ปัญหา PM อุ่น
วิธีการแก้ปัญหาที่ 55 C เป็นเวลา 10 นาทีเพื่อเพิ่มความสามารถในการละลาย เย็นที่อุณหภูมิห้อง (25 C) กรองไฟทางออกที่เอนไซม์เอ็น
ผ่านเข็มฉีดยา 0.22 มม Fi อุปกรณ์กรองลงในจาน Petri (100 25 mm2 10 ml แก้ปัญหาเอนไซม์).
ซักผ้าและการแก้ไขปัญหาการบ่ม (WI) วิธีการ: การเตรียมความพร้อม 4 มม MES (pH 5.8) ที่มี 0.5 M แมนนิทอล และ 20 มิลลิ KCl.
แก้ปัญหาหุ้นองค์การอาหารและยา: ละลาย 5 มิลลิกรัมขององค์การอาหารและยาใน 1 มิลลิลิตรอะซิโตน, และเก็บใน refrigerator.Note: protoplasts กลาง (PM) และ
การแก้ปัญหาการทำงานของเอนไซม์ที่ถูกไฟกรองผ่านการฆ่าเชื้อ การแก้ปัญหาการทำงานของเอนไซม์ควรจะเตรียมสดใหม่

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ที่ใช้ติดตั้ง
pH ของสารละลาย 0.2 M เดือนปรับ 1.0 M โดยโซลูชั่น 5.8
โปรขนาดกลาง ( น. ) : เตรียม 20 มิลลิเมตร เดือน ( pH 5.8 ) ที่มี mannitol 0.5 M KCl 20 มม. และผลิต 10 mm .
สารละลายเอนไซม์ : เตรียม 1 % ( น้ำหนัก / ปริมาตร ) onozuka r-10 เซลลูเลส และ 0.5 เปอร์เซ็นต์ ( น้ำหนัก / ปริมาตร ) macerozyme r-10 ใน PM โซลูชั่น อบอุ่น
ทางออกที่ 55 C 10 นาทีเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการละลาย .เย็นที่อุณหภูมิห้อง ( 25 C ) นาลจึงกรองสารละลายเอนไซม์
ผ่าน 0.22-mm เข็มจึง lter อุปกรณ์ในจานเพาะเชื้อ ( 100 Âแน่น 10 โซลูชั่น 25 มิลลิลิตรเอนไซม์ ) .
ซักผ้าและการบ่ม โซลูชั่น ( WI ) การแก้ไข : เตรียม 4 มม. MES ( pH 5.8 ) ที่มีปริมาณ mannitol 0.5 m และ 20 mm .
FDA : ละลาย 5 หุ้นโซลูชั่น มิลลิกรัมของ FDA ใน 1 มิลลิลิตร อะซิโตน และเก็บในตู้เย็น หมายเหตุ :ที่เหมาะสมปานกลาง ( PM ) และ
สารละลายเอนไซม์ถูกถ่ายทอด lter ฆ่าเชื้อ . สารละลายเอนไซม์ควรเตรียมสด