Current methods to quantitate class

Current methods to quantitate classical swine fever virus (CSFV) infectivity in cell culture are time-consuming and labor-intensive. This study described the generation of a dark-to-bright fluorescent reporter cells to facilitate in vitro studies of CSFV infection and replication. This assay was based on a novel reporter cell stably expressing the enhanced green fluorescent protein (EGFP) fused in-frame to a quenching peptide via a special recognition sequence of the CSFV NS3 protease. Chromophore maturation of EGFP can be prevented by quenching peptide until the quenching peptide was specifically cleaved by NS3 protease during CSFV infection, making it a dark-to-bright reporter of CSFV infection. The result demonstrated that the CSFV-infected cells were clearly distinguishable from mock-infected cells and cells infected with other viruses. There was a strong correlation between the fluorescence intensity and viral RNA replication in CSFV-infected cells. The cell enabled rapid and sensitive detection of CSFV infection and viral replication in cell culture. The best time to examine the fluorescence in CSFV-infected cells was at 48 h post-inoculation. These data suggested that the cells can be used as a reporter cell in CSFV infection assays. This reporter cell provides a sensitive method for the detection and isolation of CSFV and it will be useful for the screening of antiviral drugs or neutralizing antibody assays.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ปัจจุบันวิธีการ quantitate infectivity ไวรัส (CSFV) ไข้สุกรคลาสสิกในงานเพาะเลี้ยงเซลล์จะใช้เวลานาน และ labor-intensive ศึกษานี้อธิบายการสร้างเซลล์โปรแกรมรายงานเรืองแสงมืดกับสดใสเพื่อให้ง่ายต่อการศึกษาการเพาะเลี้ยงเชื้อ CSFV และจำลองแบบ วิเคราะห์นี้เป็นไปตามเซลล์โปรแกรมรายงานนวนิยายแสดงการเพิ่มสีเขียวเรืองแสงโปรตีน (EGFP) fused ในเฟรมเพื่อเพปไทด์ quenching ผ่านลำดับการรับรู้พิเศษรติเอส CSFV NS3 stably พ่อแม่ chromophore ของ EGFP สามารถป้องกันได้ โดยการชุบจนกว่าโดยเฉพาะถูกแหวก โดย NS3 รติเอสเพปไทด์ quenching ในระหว่างการติดเชื้อ CSFV การทำให้ผู้สื่อข่าวดำกับสดใสของเชื้อ CSFV เพปไทด์ ผลแสดงว่า เซลล์ที่ติดเชื้อ CSFV ได้อย่างชัดเจนแตกต่างจากเซลล์ที่ติดเชื้อ mock และเซลล์ที่ติดเชื้อไวรัสอื่น ๆ มีความสัมพันธ์ที่แข็งแกร่งระหว่าง fluorescence ความเข้มและจำลองแบบอาร์เอ็นเอไวรัสในเซลล์ที่ติดเชื้อ CSFV เซลล์เปิดใช้งานอย่างรวดเร็ว และที่สำคัญตรวจสอบจำลองไวรัสในการเพาะเลี้ยงเซลล์และการติดเชื้อ CSFV เวลาตรวจสอบ fluorescence ในเซลล์ที่ติดเชื้อ CSFV ที่ inoculation หลัง 48 h ได้ ข้อมูลเหล่านี้แนะนำว่า สามารถใช้เซลล์เป็นเซลล์โปรแกรมรายงานใน assays ติดเชื้อ CSFV โปรแกรมรายงานเซลล์นี้มีวิธีการสำคัญในการตรวจพบ และแยก CSFV และมันจะเป็นประโยชน์สำหรับการคัดกรองของยาต้านไวรัสหรือ neutralizing assays แอนติบอดี

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธีการในปัจจุบันเพื่อ quantitate ไวรัสไข้หวัดหมูคลาสสิก (CSFV) การติดเชื้อในเซลล์เพาะเลี้ยงเป็นเวลานานและใช้แรงงานเข้มข้น การศึกษาครั้งนี้อธิบายการสร้างที่มืดไปสว่างเซลล์นักข่าวเรืองแสงเพื่ออำนวยความสะดวกในการศึกษาในหลอดทดลองของการติดเชื้อและการจำลองแบบ CSFV การทดสอบนี้ขึ้นอยู่กับเซลล์นักข่าวนวนิยายเสถียรแสดงเพิ่มโปรตีนเรืองแสงสีเขียว (EGFP) ผสมในกรอบเปปไทด์ดับผ่านลำดับการรับรู้พิเศษของโปรติเอส CSFV NS3 การเจริญเติบโตของ chromophore EGFP สามารถป้องกันได้โดยการดับเปปไทด์จนดับเปปไทด์ที่ถูกตัดโดยเฉพาะโปรติเอส NS3 ระหว่างการติดเชื้อ CSFV ทำให้นักข่าวมืดไปสว่างของการติดเชื้อ CSFV ผลที่ได้แสดงให้เห็นว่าเซลล์ที่ติดเชื้อ CSFV ได้แตกต่างอย่างชัดเจนจากเซลล์จำลองที่ติดเชื้อและเซลล์ที่ติดเชื้อไวรัสอื่น ๆ มีความสัมพันธ์ที่แข็งแกร่งระหว่างความเข้มของแสงและการจำลองแบบอาร์เอ็นเอของไวรัสในเซลล์ CSFV เชื้อเป็น เซลล์เปิดใช้งานตรวจสอบอย่างรวดเร็วและมีความสำคัญของการติดเชื้อ CSFV และการจำลองแบบของไวรัสในเซลล์เพาะเลี้ยง เวลาที่ดีที่สุดในการตรวจสอบการเรืองแสงในเซลล์ CSFV ติดเชื้ออยู่ที่ 48 ชั่วโมงหลังการฉีดวัคซีน ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าเซลล์สามารถนำมาใช้เป็นเซลล์นักข่าวในการตรวจการติดเชื้อ CSFV เซลล์รายงานนี้มีวิธีการที่มีความสำคัญสำหรับการตรวจสอบและการแยกของ CSFV และมันจะเป็นประโยชน์สำหรับการตรวจคัดกรองของยาต้านไวรัสหรือ neutralizing ตรวจแอนติบอดี

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในปัจจุบันวิธีที่จะ กับอหิวาต์สุกรไวรัสและการติดเชื้อในเซลล์เพาะเลี้ยงจะใช้เวลานาน และใช้แรงงาน . การศึกษานี้อธิบายการสร้างเซลล์เรืองแสงสว่างมืดกับนักข่าวเพื่ออำนวยความสะดวกในหลอดทดลองของการติดเชื้อและรูปแบบการทำซ้ำวิธีนี้ใช้ในนวนิยายนักข่าวเซลล์เสถียรแสดงเพิ่มโปรตีนเรืองแสงสีเขียว ( egfp ) ผสมในรูปของเปปไทด์ ดับทางลําดับการรับรู้พิเศษของรูปแบบสร้างโปรติเอส ที่มีสีปกติของ egfp สามารถป้องกันได้โดยการชุบเปปไทด์จนดับเปปไทด์ถูกเฉพาะของเอนไซม์โปรติเอส โดยสร้างในรูปแบบการติดเชื้อ ,ทำให้มืดเพื่อนักข่าวและสดใสของการติดเชื้อ . ผลการทดลองพบว่าเซลล์มีความชัดเจนและแตกต่างจากเซลล์ที่ติดเชื้อเยาะเย้ย และเซลล์ที่ติดเชื้อด้วยไวรัส มีความสัมพันธ์ที่แข็งแกร่งระหว่างความเข้มของการเรืองแสงและอาร์เอ็นเอไวรัสในเซลล์ที่ติดเชื้อและ .เซลล์เปิดใช้งานอย่างรวดเร็วและมีความละเอียดอ่อนและตรวจหาการติดเชื้อ และเชื้อไวรัสในเซลล์เพาะเลี้ยง เวลาดีที่สุดในการตรวจสอบสารในเซลล์ที่ติดเชื้อและอยู่ที่ 48 ชั่วโมงหลังการฉีดวัคซีน ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าเซลล์สามารถใช้เป็นนักข่าวหรือการติดเชื้อเซลล์ในรูปแบบ .นักข่าวมือถือแสดงวิธีการที่ละเอียดอ่อนในการตรวจหาและแยกรูปแบบและจะเป็นประโยชน์สำหรับการคัดกรองของยาต้านไวรัสหรือ neutralizing antibody ) .