d in a final volume of 50 mL
containing 0.2 mM of each primer, all the deoxyribonucleotide
triphosphate (dNTPs, Promega) at 200 mM, 5 mL of 10 of TopTaq
reaction buffer containing 15 mM MgCl2 (Qiagen), 1.25 U TopTaq
DNA polymerase and 5 mL of extracted DNA (1 mg/reaction). The
amplification was carried out as follows: An initial denaturation at
94 C for 3 min, 35 cycles of 94 C for 30 s, 52 C (for yeast) or 55 C
(for bacteria) for 30 s, 72 C for 1 min and a final extension at 72 C
for 10 min. Aliquots (5 mL) of PCR products were analyzed first by
electrophoresis in 2% (w/v) agarose gel with TAE 1 buffer (40 mM
TriseHCl, pH 7.4, 20 mM sodium acetate, 1.0 mM Na2-EDTA),
stained with ethidium bromide in TAE 1 for 10 min and rinsed
with distilled water for 5 min. Gels
d ในปริมาตรสุดท้ายของ 50 mLประกอบด้วย 0.2 mM แต่ละพื้น deoxyribonucleotide ทั้งหมดโนซีนไตรฟอสเฟต (dNTPs, Promega) ที่ 200 mM, 5 mL 10 TopTaqบัฟเฟอร์ปฏิกิริยาประกอบด้วย 15 มม. MgCl2 (Qiagen), 1.25 U TopTaqดีเอ็นเอพอลิเมอเรสและ 5 mL ของสกัดดีเอ็นเอ (1 mg/ปฏิกิริยา) ที่ขยายได้ดำเนินการดังนี้: denaturation เป็นครั้งแรกที่C 94 สำหรับ 3 นาที รอบ 35 ของ 94 C s, C 52 (สำหรับยีสต์) หรือ 55 C 30(สำหรับแบคทีเรีย) s, C 72 1 นาทีและส่วนขยายเป็นขั้นสุดท้ายที่ 72 C 30สำหรับ 10 นาที Aliquots (5 มล.) ของ PCR ผลิตภัณฑ์ถูกวิเคราะห์ก่อนโดยelectrophoresis ใน 2% (w/v) เจ agarose กับเต้ 1 บัฟเฟอร์ (40 มม.TriseHCl, pH 7.4, acetate โซเดียม 20 มม. 1.0 mM Na2 EDTA),สีกับโบรไมด์ ethidium ในเต้ 1 ใน 10 นาที และ rinsedน้ำกลั่นสำหรับเจ 5 นาที
การแปล กรุณารอสักครู่..
