The strains were identified by dete

The strains were identified by determination of various gene sequences. Total DNA was extracted using GenElute BacterialGenomic DNA kit (Sigma–Aldrich, USA) according to the manu-facturer’s recommended protocol. PCR amplification of 16S rRNAgene fragments was performed with universal eubacterial primers27f (Lane 1991) and 1541r (Edwards et al. 1989). The amplifica-tion was conducted in a final volume of 20 L, using approximately400 ng of DNA/template, 0.5 M of each primer (Genomed, Poland)and 4 L of 5 × hot FIREPol®Blend Master Mix (Soils BioDyne, Tartu,Estonia). Thirty-five PCR cycles were carried out in a Mastercyclergradient (Eppendorf, Germany) according to procedure describedby Lane (1991). The amplified DNA was verified by electrophore-sis of aliquots (10 L) of PCR mixtures in 1.5% (w/v) agarose(Sigma–Aldrich, USA) containing ethidium bromide (0.5 mg mL−1)in 1× TBE buffer (0.1 M Tris, 0.09 M boric acid, 1 mM EDTA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สายพันธุ์ที่ระบุ โดยการกำหนดลำดับของยีนต่าง ๆ ดีเอ็นเอทั้งหมดถูกแยกโดยใช้ดีเอ็นเอ BacterialGenomic GenElute kit (Sigma-Aldrich สหรัฐอเมริกา) ตามโพรโทคอลแนะนำนู facturer ทำกระบือของชิ้นส่วน 16S rRNAgene กับ primers27f eubacterial สากล (1991 เลน) และ 1541r (เอ็ดเวิร์ด et al. 1989) ดำเนินการ amplifica-ทางการค้าในปริมาณสุดท้ายของ 20 ลิตร ใช้ approximately400 ฉบับของดีเอ็นเอต้นแบบ 0.5 M แต่ละพื้น (Genomed โปแลนด์) และ 5 × 4 L ร้อนผสมผสานหลัก® FIREPol (ดิน BioDyne ตาร์ตู เอสโทเนีย) สามสิบห้ารอบ PCR ได้ดำเนินการใน Mastercyclergradient (Eppendorf เยอรมัน) ตามขั้นตอน describedby เลน (1991) ขยายดีเอ็นเอถูกตรวจสอบ โดย electrophore sis ของ aliquots (10 ลิตร) ของส่วนผสม PCR ใน agarose 1.5% (w/v) (Sigma-Aldrich สหรัฐอเมริกา) ที่ประกอบด้วยโบรไมด์ ethidium (mL−1 0.5 มิลลิกรัม) ใน 1 × TBE บัฟเฟอร์ (0.1 M ทริสเรทติ้ง 0.09 มเป็นกรด 1 mM EDTA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สายพันธุ์ที่ถูกระบุโดยการกำหนดลำดับยีนต่างๆ ดีเอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดโดยใช้ชุด GenElute BacterialGenomic ดีเอ็นเอ (Sigma-Aldrich, สหรัฐอเมริกา) ตามโปรโตคอลแนะนำ manu-facturer ของ ขยาย PCR ของ 16S rRNAgene เศษได้ดำเนินการกับ primers27f สากล eubacterial (เลน 1991) และ 1541r (เอ็ดเวิร์ด et al. 1989) amplifica-การได้ดำเนินการในปริมาณสุดท้ายของ 20 L ใช้ NG ดีเอ็นเอแม่แบบ / 0.5? M ของแต่ละไพรเมอร์ (Genomed โปแลนด์) และ 4? L 5 ×ร้อนFIREPol®Blendโท Mix (ดิน BioDyne approximately400 , Tartu, เอสโตเนีย) สามสิบห้ารอบ PCR ได้ดำเนินการใน Mastercyclergradient (Eppendorf, เยอรมนี) ตามขั้นตอน describedby เลน (1991) ขยาย DNA ถูกตรวจสอบโดย electrophore-SIS ของ aliquots (10 ลิตร) ผสม PCR ใน 1.5% (w / v) agarose (Sigma-Aldrich, USA) ที่มี ethidium bromide (0.5 มิลลิกรัม ML-1) ใน 1 × TBE บัฟเฟอร์ (0.1 M Tris 0.09 M กรดบอริก 1 มิ EDTA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สายพันธุ์ที่ถูกระบุโดยการหาลำดับยีนต่าง ๆ ดีเอ็นเอทั้งหมดใช้ชุดสกัดดีเอ็นเอ bacterialgenomic genelute ( Sigma ) ดิช , USA ) ตามการ facturer มนูแนะนำโปรโตคอล PCR แบบเต็ม rrnagene เศษแสดงกับสากล eubacterial primers27f ( เลน 1991 ) และ 1541r ( Edwards et al . 1989 ) ที่ผ่าน amplifica ดำเนินการในเล่มสุดท้ายของ 20 ลิตร ใช้ approximately400 ng ของแม่แบบดีเอ็นเอ / 0.5 M ของแต่ละสี ( genomed , โปแลนด์ ) และ 4 ลิตร 5 ×ร้อน firepol ®ผสมผสานต้นแบบผสม ( ดิน biodyne Tartu , เอสโตเนีย , ) สามสิบห้าโดยรอบ พบว่าใน mastercyclergradient ( เพนดอร์ฟ , เยอรมนี ) ตามขั้นตอน describedby เลน ( 1991 ) ทำการตรวจสอบดีเอ็นเอของ electrophore พี่เฉยๆ ( 10 ลิตร ) ผสม PCR ใน 1.5 % ( w / v ) ( ซิกม่า Aldrich , – , USA ) ที่มีทิเดียมโบรไมด์ ( 0.5 มิลลิกรัม ml − 1 ) ในบัฟเฟอร์ทีบี 1 × ( 0.1 M หรือ 0.09 ม. boric acid 1 mM EDTA )