Expressed bacterial cells were pell

Expressed bacterial cells were pelleted and 0.48 g of wet weight
cells obtained from 50 ml of culture was lysed in 6 ml of lysis buffer
(50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, 10 mM Imidazole, pH 8.0).
Lysozyme lyophilized powder MW 14600 obtained from chicken
egg white (Himedia Cat. no. RM074) at a concentration of 1 mg/
ml was also added to the suspension. After 30 min on ice-bath,
the suspension was sonicated for 10 min at 40W amplitude and
8 s pulse. The sonicated sample was centrifuged at 10,000 rpm
for 30 min at 4 C. The soluble fraction of protein present in cleared
lysate was purified using Ni–NTA affinity chromatography. Small
fraction of cleared lysate and pellet after centrifugation was kept
for analysis in SDS–PAGE. The cleared lysate was loaded onto the
pre-equilibrated column with lysis buffer and the protein was allowed
to bind with resin for 10 min and the flow-through was collected.
Further the column was washed three times with wash
buffer (50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, 20 mM imidazole, pH
8.0) to remove the unbound non-specific proteins and finally protein
was eluted from column using elution buffer (50 mM NaH2-
PO4, 300 mM NaCl, 250 mM imidazole, pH 8.0) in 3–4 fractions of
1 ml each. All the fractions of purified protein were analysed by
SDS–PAGE

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เซลล์แบคทีเรียที่แสดงถูกสัตว์ และ 0.48 กรัมน้ำหนักเปียกเซลล์ที่ได้รับจาก 50 ml ของวัฒนธรรมคือนาทีที่ 37uc ใน 6 ml ของ lysis บัฟเฟอร์(50 มม. NaH2PO4, NaCl อิมิดาโซล 10 มม. 300 มม. pH 8.0)Lysozyme lyophilized ผง MW 14600 ได้จากไก่ไข่ขาว (Himedia Cat. ไม่ RM074) ที่ความเข้มข้น 1 มิลลิกรัม /มลยังถูกระงับ หลังจาก 30 นาทีบนน้ำแข็ง น้ำระบบกันสะเทือนถูก sonicated สำหรับ 10 นาทีที่คลื่น 40W และ8 s ชีพจร ตัวอย่าง sonicated เป็นผลิตภัณฑ์ที่ 10,000 รอบต่อนาที30 นาทีที่ 4 c ล้างเศษส่วนละลายโปรตีนในlysate บริสุทธิ์ใช้ Ni – NTA chromatography ความสัมพันธ์ ขนาดเล็กเศษของเคลียร์ lysate และเม็ดหลังจากหมุนเหวี่ยงถูกเก็บไว้สำหรับการวิเคราะห์ใน SDS – หน้า การเคลียร์ lysate ถูกโหลดลงในคอลัมน์ก่อน equilibrated lysis บัฟเฟอร์และโปรตีนได้รับอนุญาตผูก ด้วยเรซิน 10 นาทีและไหลผ่านได้รวบรวมเพิ่มเติม คอลัมน์ถูกล้าง 3 ครั้งกับล้างบัฟเฟอร์ (50 มม. NaH2PO4, 300 มม. NaCl อิมิดาโซล 20 มม. pH8.0) เอาผูกไม่ใช่เฉพาะโปรตีน และในที่สุดโปรตีนถูก eluted จากคอลัมน์ที่ใช้บัฟเฟอร์ชะ (50 มม. NaH2-PO4, NaCl อิมิดาโซล 250 มม. 300 มม. pH 8.0) ในเศษ 3-41 ml แต่ละ เศษส่วนทั้งหมดของโปรตีนบริสุทธิ์ถูกนำมาวิเคราะห์โดยSDS-หน้า

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แสดงเซลล์แบคทีเรียถูกเม็ดและ 0.48 กรัมน้ำหนักเปียก
เซลล์ที่ได้รับจาก 50 มล. ของวัฒนธรรมถูก lysed ใน 6 มล. ของบัฟเฟอร์สลาย
(ขนาด 50 มม NaH2PO4, 300 มิลลิเมตรโซเดียมคลอไรด์ 10 มิลลิ Imidazole ค่า pH 8.0).
Lysozyme ผงแห้งเมกะวัตต์ 14600 ที่ได้รับจาก ไก่
ไข่สีขาว (HIMEDIA แมว. ไม่มี. RM074) ที่ความเข้มข้น 1 มิลลิกรัม /
มิลลิลิตรยังถูกบันทึกอยู่ในการระงับ หลังจาก 30 นาทีบนน้ำแข็งอาบน้ำ
ระงับถูก sonicated เวลา 10 นาทีที่ 40W กว้างและ
8 s ชีพจร ตัวอย่าง sonicated ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาที
เป็นเวลา 30 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส ส่วนที่ละลายของโปรตีนในปัจจุบันเคลียร์
lysate บริสุทธิ์โดยใช้ Ni-NTA ความสัมพันธ์ Chromatography ขนาดเล็ก
ส่วนของ lysate ล้างและเม็ดหลังจากการหมุนเหวี่ยงถูกเก็บไว้
เพื่อการวิเคราะห์ระบบ SDS-PAGE lysate ล้างถูกโหลดลงใน
คอลัมน์ก่อน equilibrated กับบัฟเฟอร์สลายและโปรตีนได้รับอนุญาต
ในการผูกกับเรซินเป็นเวลา 10 นาทีและไหลผ่านที่ถูกเก็บรวบรวม.
ต่อไปคอลัมน์ถูกล้างสามครั้งด้วยการล้าง
บัฟเฟอร์ (50 มิลลิ NaH2PO4 300 มิลลิโซเดียมคลอไรด์ 20 imidazole มิลลิค่า pH
8.0) เพื่อเอาโปรตีนที่ไม่เฉพาะเจาะจงไม่ได้ผูกไว้และในที่สุดก็โปรตีน
ถูกชะจากคอลัมน์โดยใช้บัฟเฟอร์ชะ (ขนาด 50 มม NaH2-
PO4, 300 มิลลิเมตรโซเดียมคลอไรด์ 250 มิลลิ imidazole ค่า pH 8.0) ใน 3-4 เศษของ
1 มิลลิลิตรแต่ละ ทั้งหมดเศษส่วนของโปรตีนบริสุทธิ์ที่ถูกวิเคราะห์โดย
SDS-PAGE

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แสดงเซลล์แบคทีเรียที่ถูกอัดเม็ดและ 0.48 กรัม น้ำหนักเปียกเซลล์ที่ได้จาก 50 มิลลิลิตร วัฒนธรรมในการสลายบัฟเฟอร์ lysed 6 มิลลิลิตร( 50 มม. nah2po4 300 mM NaCl 10 มม. อิมิดาโซล pH 8.0 )ไลโซไซม์โปรตีนผง MW 14600 ที่ได้จากไก่ไข่ขาว ( himedia แมว ไม่ rm074 ) ที่ความเข้มข้น 1 มิลลิกรัมต่อลิตรมล ก็เพิ่มให้ระงับ หลังจาก 30 นาทีบนน้ำแข็งอาบถูกระงับ sonicated สำหรับ 10 นาทีที่ 40w แอมพลิจูดและ8 s ชีพจร การ sonicated ตัวอย่างระดับที่ 10 , 000 รอบต่อนาที30 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส ปริมาณโปรตีนที่มีอยู่ในส่วนของเคลียร์lysate บริสุทธิ์ใช้ฉัน– NTA ขี้รังแค . เล็ก ๆส่วนการล้างและเก็บไว้ lysate เม็ดหลังการปั่นเหวี่ยงสำหรับการวิเคราะห์ใน SDS - หน้า การล้าง lysate ถูกโหลดลงก่อน equilibrated คอลัมน์ที่มีบัฟเฟอร์การสลายโปรตีนและไม่ได้รับอนุญาตผูกด้วยเรซิน 10 นาที และ flow-through ถูกเก็บอีกซักครั้งกับล้างคอลัมน์บัฟเฟอร์ ( 50 มม. nah2po4 300 mM NaCl อิมิดาโซล 20 มม. , อ8 ) เอาเฉพาะโปรตีนจับกับโปรตีน และในที่สุดมีตัวอย่างจากคอลัมน์โดยใช้สารประกอบบัฟเฟอร์ ( nah2 - 50 มม.po4 NaCl 250 มม. 300 มม. อิมิดาโซล pH 8.0 ) ใน 3 – 4 เศษส่วนของ1 มิลลิลิตร ในแต่ละ ทุกส่วนของโปรตีนวิเคราะห์โดยSDS - หน้า