yeast contamination is a serious pr

yeast contamination is a serious problem in the food industry and a major cause of food spoilage. Several yeasts, such as Filobasidiella neoformans, which cause cryptococcosis in humans, are also opportunistic pathogens, so a simple and rapid method for monitoring yeast contamination in food is essential. Here, we developed a simple and rapid method that utilizes loop-mediated isothermal amplification (LAMP) for the detection of F. neoformans. A set of five specific LAMP primers was designed that targeted the 5.8S–26S rDNA internal transcribed spacer 2 region of F. neoformans, and the primer set's specificity was confirmed. In a pure culture of F. neoformans, the LAMP assay had a lower sensitivity threshold of 102 cells/mL at a runtime of 60 min. In a probiotic dairy product artificially contaminated with F. neoformans, the LAMP assay also had a lower sensitivity threshold of 102 cells/mL, which was comparable to the sensitivity of a quantitative PCR (qPCR) assay. We also developed a simple two-step method for the extraction of DNA from a probiotic dairy product that can be performed within 15 min. This method involves initial protease treatment of the test sample at 45 °C for 3 min followed by boiling at 100 °C for 5 min under alkaline conditions. In a probiotic dairy product artificially contaminated with F. neoformans, analysis by means of our novel DNA extraction method followed by LAMP with our specific primer set had a lower sensitivity threshold of 103 cells/mL at a runtime of 60 min. In contrast, use of our novel method of DNA extraction followed by qPCR assay had a lower sensitivity threshold of only 105 cells/mL at a runtime of 3 to 4 h. Therefore, unlike the PCR assay, our LAMP assay can be used to quickly evaluate yeast contamination and is sensitive even for crude samples containing bacteria or background impurities. Our study provides a powerful tool for the primary screening of large numbers of food samples for yeast contamination.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ปนเปื้อนของยีสต์เป็นปัญหาที่รุนแรงในอุตสาหกรรมอาหารและสาเหตุการเน่าเสียของอาหาร Yeasts หลาย เช่น Filobasidiella neoformans ซึ่งทำให้ cryptococcosis ในมนุษย์ เป็นโรคยก ดังนั้นวิธีที่ง่าย และรวดเร็วสำหรับตรวจสอบการปนเปื้อนของยีสต์ในอาหารเป็นสิ่งสำคัญ ที่นี่ เราพัฒนาวิธีที่ง่าย และรวดเร็วที่ใช้ลูป mediated isothermal ขยาย (โคมไฟ) ตรวจ neoformans เอฟ ชุดไพรเมอร์ไฟเฉพาะ 5 ถูกออกแบบมาที่เป้าหมาย 5.8S – 26S rDNA ภายในภูมิภาคเป็นตัวเว้นวรรค 2 ของ F. neoformans ที่ทับศัพท์ และ specificity ของชุดพื้นได้รับการยืนยัน ในวัฒนธรรมบริสุทธิ์ของ F. neoformans ทดสอบโคมไฟได้เป็นขีดจำกัดความไวต่ำของ 102 เซลล์/mL ในขณะทำงาน 60 นาที ในการโปรไบโอติกส์ผลิตภัณฑ์นมปน F. neoformans เหือด ทดสอบหลอดไฟยังได้เป็นขีดจำกัดความไวต่ำของ 102 เซลล์/mL ซึ่งได้เทียบเท่ากับความไวของการทดสอบ PCR (qPCR) เชิงปริมาณ นอกจากนี้เรายังพัฒนาวิธีการสองขั้นตอนง่าย ๆ ในการสกัดดีเอ็นเอจากผลิตภัณฑ์นมโปรไบโอติกส์ที่สามารถดำเนินการได้ภายใน 15 นาที วิธีการนี้เกี่ยวข้องกับการรักษารติเอสเริ่มต้นของตัวอย่างทดสอบที่ 45 ° C สำหรับ 3 นาทีตาม ด้วยเดือดที่ 100 ° C สำหรับ 5 นาทีในสภาวะด่าง ในเป็นโปรไบโอติกส์ผลิตภัณฑ์นมปน F. neoformans เหือด วิเคราะห์จากนวนิยายดีเอ็นเอแยกวิธีการของเราตาม ด้วยโคมไฟกับชุดรองพื้นเฉพาะของเรามีขีดจำกัดความไวต่ำของ 103 เซลล์/มล.ที่รันไทม์ของ 60 นาที ในทางตรงข้าม ใช้วิธีการสกัดดีเอ็นเอตาม qPCR วิเคราะห์ของเรานวนิยายได้เป็นขีดจำกัดความไวต่ำของเพียง 105 เซลล์/มล.ที่รันไทม์ของ h 3-4 ดังนั้น ต่างจาก PCR assay ทดสอบโคมไฟของเราสามารถใช้เพื่อประเมินการปนเปื้อนของยีสต์ได้อย่างรวดเร็ว และสำคัญแม้ตัวอย่างน้ำมันที่ประกอบด้วยแบคทีเรีย หรือสิ่งสกปรกพื้นหลัง เรามีเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพสำหรับคัดกรองหลักของตัวอย่างอาหารสำหรับยีสต์ปนเปื้อนจำนวนมาก

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การปนเปื้อนยีสต์เป็นปัญหาที่ร้ายแรงในอุตสาหกรรมอาหารและเป็นสาเหตุสำคัญของการเน่าเสียของอาหาร ยีสต์ต่างๆเช่น neoformans Filobasidie​​lla ที่ทำให้เกิด cryptococcosis ในมนุษย์นอกจากนี้ยังมีเชื้อโรคฉวยโอกาสเพื่อให้ง่ายและวิธีการที่รวดเร็วสำหรับการตรวจสอบการปนเปื้อนยีสต์ในอาหารเป็นสิ่งจำเป็น ที่นี่เรามีการพัฒนาวิธีที่ง่ายและรวดเร็วที่ใช้ขยายวง isothermal พึ่ง (โคมไฟ) สำหรับการตรวจสอบของเอฟ neoformans ชุดโคมไฟห้าไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจงได้รับการออกแบบที่กำหนดเป้​​าหมาย 5.8S-26S rDNA spacer คัดลอกภายใน 2 ภูมิภาค neoformans เอฟและความจำเพาะชุดไพรเมอร์ที่ได้รับการยืนยัน ในวัฒนธรรมอันบริสุทธิ์ของ neoformans เอฟ, การทดสอบโคมไฟมีความไวเกณฑ์ที่ต่ำกว่า 102 เซลล์ / มิลลิลิตรที่รันไทม์ 60 นาที ในผลิตภัณฑ์นมปนเปื้อนเทียมโปรไบโอติกที่มี neoformans เอฟ, การทดสอบโคมไฟยังมีความไวเกณฑ์ที่ต่ำกว่า 102 เซลล์ / มิลลิลิตรซึ่งเปรียบได้กับความไวของ PCR เชิงปริมาณ (qPCR) ทดสอบ นอกจากนี้เรายังพัฒนาวิธีการสองขั้นตอนง่ายๆในการสกัดดีเอ็นเอจากผลิตภัณฑ์นมโปรไบโอติกที่สามารถดำเนินการได้ภายใน 15 นาที วิธีนี้เกี่ยวข้องกับการรักษาน้ำย่อยเริ่มต้นของตัวอย่างทดสอบที่ 45 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 นาทีตามด้วยเดือดที่ 100 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีภายใต้เงื่อนไขที่อัลคาไลน์ ในผลิตภัณฑ์นมปนเปื้อนเทียมโปรไบโอติกที่มีเอฟ neoformans การวิเคราะห์โดยวิธีการสกัดดีเอ็นเอนวนิยายของเราตามด้วยโคมไฟกับชุดไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจงของเรามีความไวเกณฑ์ที่ต่ำกว่า 103 เซลล์ / มิลลิลิตรที่รันไทม์ 60 นาที ในทางตรงกันข้ามการใช้วิธีการของเรานวนิยายของการสกัดดีเอ็นเอตามด้วยการทดสอบ qPCR มีเกณฑ์ความไวต่ำเพียง 105 เซลล์ / มิลลิลิตรที่รันไทม์ 3 ถึง 4 ชั่วโมง จึงแตกต่างจากการทดสอบ PCR, ทดสอบโคมไฟของเราสามารถนำมาใช้การได้อย่างรวดเร็วประเมินการปนเปื้อนยีสต์และมีความสำคัญแม้สำหรับตัวอย่างน้ำมันดิบที่มีเชื้อแบคทีเรียหรือสิ่งสกปรกที่พื้นหลัง การศึกษาของเราให้เป็นเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพสำหรับการคัดกรองหลักของจำนวนมากของตัวอย่างอาหารปนเปื้อนยีสต์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การปนเปื้อนยีสต์เป็นปัญหาร้ายแรงในอุตสาหกรรมอาหาร และสาเหตุหลักของการเน่าเสียของอาหาร หลาย ๆ ยีสต์ เช่น filobasidiella neoformans ซึ่งทำให้เกิดฝอยในมนุษย์ยังฉวยโอกาสก่อโรค ดังนั้น ที่ง่ายและวิธีที่รวดเร็วในการตรวจสอบการปนเปื้อนของเชื้อในอาหารเป็นสิ่งที่จำเป็น ที่นี่เราพัฒนาง่ายและรวดเร็ววิธีที่ใช้คำนวณ ( ห่วง ) ( โคมไฟ ) สำหรับการตรวจหาของ เอฟ neoformans . ชุดของห้าชนิด โคมไฟถูกออกแบบที่เฉพาะเป้าหมาย 5.8s – 26 rDNA spacer 2 ภายในและภูมิภาคของ F . neoformans และ primer ตั้งค่าความไวและความจำเพาะของการยืนยัน ในวัฒนธรรมที่บริสุทธิ์ของ neoformans F ,โคมไฟโดยมีความไวต่ำกว่าเกณฑ์ของ 102 เซลล์ / มล. ที่ไทม์ 60 นาทีในผลิตภัณฑ์นมปนเปื้อนด้วยโปรไบโอติกเทียม . neoformans , โคมไฟ assay ได้ลดความไวของ 102 เซลล์ / มิลลิลิตร ซึ่งเทียบได้กับความไวของเทคนิคเชิงปริมาณ ( qpcr ) ตามลำดับนอกจากนี้เรายังพัฒนาวิธีการสองขั้นตอนง่ายๆสำหรับการสกัดดีเอ็นเอจากผลิตภัณฑ์นมโปรไบโอติกส์ที่สามารถดำเนินการได้ภายใน 15 นาที วิธีนี้เป็นการรักษาที่สามารถเริ่มต้นของตัวอย่างตรวจที่ 45 ° C เป็นเวลา 3 นาที ตามด้วยน้ำเดือดที่ 100 องศา C เป็นเวลา 5 นาที ภายใต้สภาวะที่เป็นด่าง ในผลิตภัณฑ์นมปนเปื้อนด้วยโปรไบโอติก ตั้งใจ neoformans F ,การวิเคราะห์โดยใช้วิธีการสกัดดีเอ็นเอใหม่ ตามด้วยโคมไฟชุดรองพื้นเฉพาะของเรามีความไวต่ำกว่าเกณฑ์ของ 103 เซลล์ / มล. ที่ runtime ของ 60 นาที ในทางตรงกันข้าม การใช้วิธีการใหม่ของเราของการสกัดดีเอ็นเอตาม qpcr โดยมีความไวต่ำกว่าเกณฑ์เพียง 105 เซลล์ / มล. ที่ runtime 3 4 ชั่วโมง จึงแตกต่างจากวิธีวิเคราะห์การทดสอบหลอดของเราสามารถใช้อย่างรวดเร็ว ประเมินการปนเปื้อนยีสต์และอ่อนไหวแม้อย่างหยาบที่มีแบคทีเรียหรือสิ่งสกปรกที่พื้นหลัง การศึกษาของเรามีเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพสำหรับการคัดกรองของตัวเลขขนาดใหญ่ของตัวอย่างอาหารปนเปื้อนยีสต์