ResultsOutline of the R-PCR methodT

Results
Outline of the R-PCR method
The R-PCR method is essentially divided into three main sections (Fig. 1 and Supplementary Fig. 1) and includes specifically designed testers, drivers, a single primer, a thermostable restriction enzyme (ApeKI), a thermostable Taq DNA polymerase and dNTPs. A brief description of the R-PCR method is as follows: 1) Section 1, tester and driver preparation. The preparation of tester and driver starts from samples digestion with ApeKI and MseI. The tester is made by ligation with an adaptor containing a polyA tail and then oligo-dT column purification. The driver is made by ligation of different adaptors, PCR amplification, and digestion with MseI. 2) Section 2, R-PCR reactions. The tester and driver are mixed and subjected to R-PCR with a single primer in the presence of ApeKI, which results in linear amplification of the desired fragments without ApeKI digestion due to design of a mismatch in the adaptor. In contrast, common undesired fragments are extended from the 3′ end of the driver to create the ApeKI site, which is cut, removing those fragments from further amplification. 3) Section 3, recovery of the desired fragments and the products are cloned. Recovery of the desired fragments from linear amplification in the previous step is carried out using selective PCR primers, and the products are cloned by Invitrogen's TOPO TA cloning system. Detailed procedure refers to Figure 1 and Supplementary Figure 1.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ผลลัพธ์เค้าร่างของวิธี R PCRวิธี R PCR เป็นหลักแบ่งสามหลัก (Fig. 1 และ 1 Fig. เสริม) และโดยเฉพาะออกแบบทดสอบ โปรแกรมควบคุม พื้นเดียว เป็นเอนไซม์จำกัด thermostable (ApeKI), thermostable Taq DNA พอลิเมอเรส และ dNTPs คำอธิบายโดยย่อของวิธี R PCR จะเป็นดังนี้: 1) เตรียมส่วน 1 เครื่องวัด และควบคุม เตรียมเครื่องทดสอบและโปรแกรมควบคุมเริ่มต้นจากตัวอย่างการย่อยอาหาร ApeKI และ MseI เครื่องวัดที่ถูกตั้งขึ้น โดยไข่กับอะแดปเตอร์ที่ประกอบด้วย polyA หางแล้วฟอกคอลัมน์ oligo dT โปรแกรมควบคุมที่ถูกตั้งขึ้น โดยไข่ ของอะแดปเตอร์ต่าง ๆ ขยาย PCR ย่อยอาหารกับ MseI 2 ส่วน 2 ปฏิกิริยา R PCR เครื่องวัดและควบคุมที่ผสม และ R-PCR ต้อง มีพื้นเดียวในต่อหน้าของ ApeKI มีผลขยายเชิงเส้นของการกระจายตัวที่ระบุโดยไม่ต้องย่อยอาหาร ApeKI ครบกำหนดในการออกแบบของอะแดปเตอร์ที่ไม่ตรงกัน ในทางตรงกันข้าม การกระจายตัวไม่ทั่วจะขยายจากท้าย 3′ โปรแกรมควบคุมที่จะสร้างเว็บไซต์ ApeKI ซึ่งถูกตัด เอาชิ้นส่วนเหล่านั้นจากการขยาย 3) ส่วน 3 กู้คืนข้อมูลของผลิตภัณฑ์และชิ้นส่วนต้องมีโคลน ชิ้นส่วนต้องกู้คืนจากขยายเส้นที่ดำเนินโดยใช้ไพรเมอร์ใช้ PCR และผลิตภัณฑ์เป็นโคลน โดยตาเดินของ Invitrogen โคลนระบบ ขั้นตอนโดยละเอียดอ้างถึงรูปที่ 1 และรูปที่ 1 ส่งเสริมการขาย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผล
โครงร่างของวิธี R-PCR
วิธี R-PCR จะแบ่งออกเป็นหลักออกเป็นสามส่วนหลัก (รูปที่. 1 และเสริมรูป. 1) และรวมถึงการออกแบบมาโดยเฉพาะการทดสอบขับรถไพรเมอร์เดียวเอนไซม์ จำกัด อุณหภูมิ (ApeKI) Taq ดีเอ็นเอโพลิเมอร์อุณหภูมิและ dNTPs คำอธิบายสั้น ๆ ของวิธี R-PCR มีดังนี้ 1) ส่วนที่ 1 ทดสอบและการเตรียมการขับรถ การเตรียมการทดสอบและคนขับรถเริ่มจากตัวอย่างการย่อยอาหารที่มี ApeKI และ MseI การทดสอบจะทำโดย ligation กับอะแดปเตอร์ที่มีหางPólyaแล้วฟอกคอลัมน์ Oligo-dT คนขับจะทำโดย ligation ของอะแดปเตอร์ที่แตกต่างกันขยาย PCR และการย่อยอาหารที่มี MseI 2) ส่วนที่ 2 ปฏิกิริยา R-PCR การทดสอบและคนขับรถจะผสมและเป็นไป R-PCR ด้วยไพรเมอร์เดียวในการปรากฏตัวของ ApeKI ซึ่งส่งผลให้การขยายเชิงเส้นของชิ้นส่วนที่ต้องการโดยไม่ต้องย่อยอาหาร ApeKI เนื่องจากการออกแบบที่ไม่ตรงกันของอะแดปเตอร์ ในทางตรงกันข้ามที่ไม่พึงประสงค์ที่พบชิ้นส่วนจะยื่นออกมาจากปลาย 3 'ของผู้ขับขี่ในการสร้างเว็บไซต์ ApeKI ซึ่งถูกตัดเอาชิ้นส่วนที่มาจากการขยายเพิ่มเติม 3) ส่วนที่ 3 การฟื้นตัวของชิ้นส่วนที่ต้องการและผลิตภัณฑ์ที่มีการโคลน การฟื้นตัวของชิ้นส่วนที่ต้องการจากการขยายเชิงเส้นในขั้นตอนก่อนหน้านี้จะดำเนินการโดยใช้ไพรเมอร์ PCR เลือกและผลิตภัณฑ์ที่มีการโคลนโดย Invitrogen ของระบบ TOPO TA โคลน ขั้นตอนโดยละเอียดหมายถึงรูปที่ 1 และรูปที่ 1 เสริม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เค้าร่างของวิธีการ r-pcr ผล

r-pcr วิธีเป็นหลัก แบ่งออกเป็นสามส่วนหลัก ( รูปที่ 1 และรูปที่ 1 ประกอบ ) รวมถึงผู้ที่ออกแบบเฉพาะไดรเวอร์รองพื้นเดี่ยว เอนไซม์ thermostable จำกัด ( apeki ) , ความร้อนได้ดีและ DNA polymerase dntps . คำอธิบายสั้น ๆของ r-pcr วิธีมีดังนี้ : 1 ) ส่วนที่ 1 , ทดสอบและเตรียมขับเตรียมทดสอบและคนขับรถเริ่มจากตัวอย่างที่ตัดด้วย apeki และ msei . ทดสอบทำโดย Ligation กับอะแดปเตอร์ที่มีขั้นตอนของโพลยา หางแล้ว โอลิโก DT คอลัมน์บริสุทธิ์ ไดรเวอร์ที่ถูกสร้างขึ้นโดย Ligation ของอะแดปเตอร์ที่แตกต่างกันเพื่อขยายและตัดด้วย msei . 2 ) มาตรา 2 ปฏิกิริยา r-pcr .ทดสอบโปรแกรม และต้อง r-pcr ผสมกับรองพื้นเดี่ยวในการแสดงตนของ apeki , ซึ่งผลในการเพิ่มเชิงเส้นของชิ้นส่วนที่ต้องการโดยไม่ apeki การย่อยอาหารเนื่องจากการออกแบบที่ไม่ตรงกันในอะแดปเตอร์ ในทางตรงกันข้าม ชิ้นส่วนที่ไม่พึงประสงค์ทั่วไปจะขยายจาก 3 ’จบของไดรเวอร์ เพื่อสร้าง apeki เว็บไซต์ซึ่งถูกตัดเอาเศษที่ขยายเพิ่มเติม 3 ) มาตรา 3 , การฟื้นตัวของที่ต้องการชิ้นส่วนและผลิตภัณฑ์โคลน การกู้คืนของที่ต้องการชิ้นส่วนจากแบบเชิงเส้นในขั้นตอนก่อนหน้า โดยใช้ selective PCR ไพรเมอร์ และผลิตภัณฑ์โคลนโดย Invitrogen เป็นสถานที่ทาโคลนระบบ . ขั้นตอนรายละเอียด หมายถึง รูปที่ 1 และเสริมรูปที่ 1