Total genomic DNA was extracted fro

Total genomic DNA was extracted from immature leaves
using the CTAB method described by Dellaporta et al. (1983)
with minor modifications. Approximately, 250 mg of fresh
leaves were separately ground to fine powder in liquid nitrogen
using clean mortar and pestle. The ground powder was
transferred to a 25 ml tube containing 10 ml of CTAB (Cetyl
Trimethyl Ammonium Bromide) buffer consisting of 2% (w/
v) CTAB, 20 mM EDTA, 1.4 M NaCl, 100 mM Tris-HCl (pH
8.0), and 0.2% (v/v) β-mercaptoethanol. The homogenate was
incubated at 60°C for 2h, extracted with an equal volume of
chloroform : iso-amyl alcohol (24:1), and centrifuged at 10,000
rpm for 10 min. DNA was precipitated from the aqueous phase
by mixing with an equal volume of isopropanol. After
centrifugation at 10,000 rpm for 10 min., the DNA pellet was
washed with 70% ethanol; air dried, and resuspended in 10
mM Tris, pH 8.0, 0.1 mM EDTA buffers. The quantity of DNA
was estimated by measuring the absorbance at 260 nm using a
spectrophotometer. Genomic DNA was then checked on a
0.8% agarose gel for confirmation of quality and concentration
and final adjustments were made in 10 mM Tris-Cl buffer to
obtain the working concentration of 25 ng/ μl.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

รวม genomic DNA ที่สกัดจากใบ immatureโดยใช้วิธี CTAB อธิบายโดย Dellaporta et al. (1983)มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย สดประมาณ 250 มก.ใบไม้แยกต่างหากจะละอองในไนโตรเจนเหลวใช้โกร่งสะอาด ผงดินถูกโอนย้ายไปหลอด 25 ml ประกอบด้วย 10 ml ของ CTAB (Cetylประกอบด้วย 2% (พร้อมบัฟเฟอร์ Trimethyl แอมโมเนียโบรไมด์)v) CTAB, 20 mM EDTA, 1.4 M NaCl, 100 มม. (pH ของ HCl ในทริสเรทติ้ง8.0), และ 0.2% (v/v) β-mercaptoethanol Homogenate ถูกincubated ที่ 60° C สำหรับ 2h สกัด มีปริมาณเท่ากันคลอโรฟอร์ม: iso amyl แอลกอฮอล์ (24:1), และ centrifuged ที่ 10000rpm สำหรับ 10 นาทีดีเอ็นเอตกตะกอนจากระยะอควีโดยผสมกับตรา isopropanol ที่เท่ากัน หลังจากcentrifugation ที่ 10000 rpm สำหรับ 10 นาที เม็ดดีเอ็นเอได้ล้าง ด้วย 70% เอทานอล อากาศแห้ง และ resuspended ใน 10มม.ตรี pH 8.0, 0.1 mM EDTA บัฟเฟอร์ ปริมาณของดีเอ็นเอถูกประเมิน โดยการวัด absorbance ที่ 260 nm ใช้เป็นเครื่องทดสอบกรดด่าง Genomic DNA แล้วตรวจสอบในการ0.8% agarose เจลสำหรับการยืนยันคุณภาพและความเข้มข้นและปรับปรุงขั้นสุดท้ายที่เกิดขึ้นในบัฟเฟอร์ 10 มม.ตรี-Clรับทำความเข้มข้น 25 ng / μl

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ดีเอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดจากใบอ่อนโดยใช้วิธี CTAB อธิบายโดย Dellaporta et al,
(1983)
ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ประมาณ 250 มิลลิกรัมสดใบแยกพื้นผงละเอียดในไนโตรเจนเหลวโดยใช้ครกและสากสะอาด ผงพื้นดินได้รับการถ่ายโอนไปยังหลอด 25 มล. บรรจุ 10 มิลลิลิตร CTAB (Cetyl trimethyl แอมโมเนียมโบรไมด์) บัฟเฟอร์ประกอบด้วย 2% (w / v) มี CTAB, EDTA 20 มิลลิ 1.4 M NaCl 100 mM Tris-HCl (pH 8.0) และ 0.2% (v / v) β-mercaptoethanol homogenate ที่ได้รับการบ่มที่60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมง, สกัดด้วยปริมาณที่เท่ากันของคลอโรฟอร์ม: เครื่องดื่มแอลกอฮอล์ ISO-amyl (24: 1) และหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาที ดีเอ็นเอตกตะกอนจากเฟสน้ำโดยการผสมกับปริมาณที่เท่ากันของ isopropanol หลังจาก. หมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีเม็ดดีเอ็นเอที่ถูกล้างด้วยเอทานอล70%; อากาศแห้งและ resuspended 10 มิลลิทริสพีเอช 8.0, 0.1 มิลลิบัฟเฟอร์ EDTA ปริมาณของดีเอ็นเอเป็นที่คาดกันโดยการวัดการดูดกลืนแสงที่ 260 นาโนเมตรโดยใช้ที่ spectrophotometer ดีเอ็นเอถูกตรวจสอบแล้วใน0.8% agarose เจลสำหรับการยืนยันของคุณภาพและความเข้มข้นและการปรับครั้งสุดท้ายที่ได้ทำใน10 มิลลิบัฟเฟอร์ Tris-Cl เพื่อให้ได้ความเข้มข้นของการทำงานของ25 ng / ไมโครลิตร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

透明