3.4. EHP PCRWe selected primers EHP

3.4. EHP PCR
We selected primers EHP-510F/R from the 18S rRNA gene of the
EHP genome and PCR was performed with DNA extracted from
EHP-infected shrimp. The results showed that this PCR can detect
EHP-infected P. vannamei (from Vietnam in 2014 and 2015,
Fig. 2, lanes 1 & 2; from Thailand in 2014, lane 3); the feces and
water samples collected from infected shrimp tanks were also
detected with EHP (Fig. 2, lanes 4 & 5). These EHP-primers did
not cross react with the Pleistophora-like microsporidium associated
with cotton shrimp disease (Fig. 2, lane 6), nor to an amoeba
which infected shrimp gills (Fig. 2, lane 7).
This pair of 18S rRNA gene primers did not react to genomic
DNA of P. vannamei (Fig. 2, lane 8), P. monodon, P. indicus,
P. stylirostris and M. rosenbergii (data not shown). During the
broodstock maturation, polychaetes, squids and Artemia biomass
are often added to the shrimp diets, these organisms have been
suspected to be carriers of EHP and are being frequently tested
for the presence of EHP. Our PCR results showed that the
EHP-primers did not reacted to genomic DNA of polychaetes,
squids and Artemia biomass. We also tested DNA from crabs which
were collected from the shrimp ponds, the results showed the EHP
primers did not cross react with these crustaceans.
Unexpectedly, we detected EHP in 4 out of 9 samples of frozen
Artemia biomass (Fig. 2, lane 9, a representative sample). From
EHP-positive Artemia biomass, its 18S rRNA gene was amplified
and sequenced, and the 1.1 kb fragment was 99.9% identical
(different in 2 nucleotides) to that of EHP from Vietnam, suggesting
the EHP present in Artemia biomass may have originated from SE
Asia. All 4 EHP-positive Artemia biomass samples came from one
individual provider, and it is possible that they were all harvested
from the same location.Concerns of EHP infections in farmed
shrimp populations are likely to continue, creating a need to
reduce risk through the establishment of effective means to control
and monitor this parasite. In this regard, the use of specific and
sensitive molecular methods for the detection of EHP in shrimp,
live feeds, and the pond environments will likely prove to be very
important. EHP-infected shrimp cannot be determined by simple visual inspection; there are no obvious clinical signs of infection.
This inability to detect EHP-infected individuals can result in the
rapid spread of this parasite throughout the shrimp stocks.
Diagnostic protocols, based on ISH and PCR, developed in the
present study have proven to be both specific and sensitive, thus
providing valuable tools for routine diagnosis and monitoring of
shrimp stocks, pond environments and aquaculture commodities.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3.4. EHP PCRเราเลือกไพรเมอร์ EHP-510F/R จากยีนใน rRNA 18S ของEHP จีโนมและ PCR ทำกับดีเอ็นเอที่สกัดจากกุ้งที่ติดเชื้อ EHP ผลพบว่า PCR นี้สามารถตรวจพบติดเชื้อ EHP กุลา P. (จากเวียดนามในปี 2014 และ 2015Fig. 2 ถนนหนทาง 1 และ 2 จากประเทศไทยในปี 2557 เลน 3); ในอุจจาระ และตัวอย่างน้ำที่เก็บจากถังกุ้งติดเชื้อได้ยังพบกับ EHP (Fig. 2 ถนนหนทาง 4 และ 5) EHP-ไพรเมอร์เหล่านี้ได้ตอบสนองไม่ไขว้กับ microsporidium เช่น Pleistophora ที่เกี่ยวข้องกับโรคกุ้งฝ้าย (2 Fig. เลน 6), ไม่ ให้เป็นอะมีบาที่ติดเชื้อกุ้ง gills (2 Fig. เลน 7)ไพรเมอร์ 18S rRNA ยีนคู่นี้ไม่ได้ไม่ตอบสนอง genomicดีเอ็นเอของ P. vannamei (Fig. 2 เลน 8), P. monodon, P. หม้อP. stylirostris และก้ามกรามเมตร (ข้อมูลไม่แสดง) ในระหว่างพ่อแม่พันธุ์ของพ่อแม่ polychaetes ปลาหมึก และอาร์ทีเมียมักจะเพิ่มอาหารกุ้ง สิ่งมีชีวิตเหล่านี้ได้สงสัยว่าเป็นพาหะของ EHP และกำลังทดสอบบ่อยสำหรับสถานะของ EHP ผล PCR ของเราพบว่าการไพรเมอร์ EHP ได้ไม่ปฏิกิริยาที่เกิดขึ้น genomic DNA ของ polychaetesปลาหมึกและอาร์ทีเมีย นอกจากนี้เรายังทดสอบดีเอ็นเอจาก crabs ซึ่งได้รวบรวมจากบ่อกุ้ง EHP ที่แสดงผลไพรเมอร์ได้ไม่ข้ามทำปฏิกิริยากับเหล่านี้พบโดยไม่คาดคิด เราพบ EHP ในตัวอย่าง 4 จาก 9 ของแช่แข็งเมีย (Fig. 2 เลน 9 ตัวอย่างตัวแทน) จากEHP-positive Artemia biomass, its 18S rRNA gene was amplifiedand sequenced, and the 1.1 kb fragment was 99.9% identical(different in 2 nucleotides) to that of EHP from Vietnam, suggestingthe EHP present in Artemia biomass may have originated from SEAsia. All 4 EHP-positive Artemia biomass samples came from oneindividual provider, and it is possible that they were all harvestedfrom the same location.Concerns of EHP infections in farmedshrimp populations are likely to continue, creating a need toreduce risk through the establishment of effective means to controland monitor this parasite. In this regard, the use of specific andsensitive molecular methods for the detection of EHP in shrimp,live feeds, and the pond environments will likely prove to be veryimportant. EHP-infected shrimp cannot be determined by simple visual inspection; there are no obvious clinical signs of infection.This inability to detect EHP-infected individuals can result in therapid spread of this parasite throughout the shrimp stocks.Diagnostic protocols, based on ISH and PCR, developed in thepresent study have proven to be both specific and sensitive, thusproviding valuable tools for routine diagnosis and monitoring ofshrimp stocks, pond environments and aquaculture commodities.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.4 PCR EHP
เราเลือกไพรเมอร์ EHP-510F / R จากยีน 18S rRNA
ของจีโนมEHP และ PCR
ได้ดำเนินการกับดีเอ็นเอที่สกัดจากกุ้งที่ติดเชื้อEHP ผลการศึกษาพบว่าวิธี PCR นี้สามารถตรวจจับ
EHP เชื้อ P. vannamei (จากเวียดนามในปี 2014 และในปี 2015
รูปที่ 2 เลนที่ 1 และ 2. จากประเทศไทยในปี 2014 ช่อง 3) อุจจาระและเก็บตัวอย่างน้ำจากถังกุ้งที่ติดเชื้อนอกจากนี้ยังตรวจพบกับEHP (รูป. 2 เลนที่ 4 และ 5) เหล่านี้ EHP-ไพรเมอร์ไม่ได้ข้ามทำปฏิกิริยากับmicrosporidium Pleistophora เหมือนที่เกี่ยวข้องกับการเกิดโรคกุ้งฝ้าย(รูป. 2 เลนที่ 6) หรือจะอะมีบาซึ่งติดเชื้อเหงือกกุ้ง (รูป. 2 ช่อง 7). คู่นี้ของ 18S rRNA ไพรเมอร์ยีนที่ไม่ตอบสนองต่อจีโนมดีเอ็นเอของพีกุ้งขาว(รูป. 2 เลน 8), กุ้งกุลาดำ, ประดู่กิ่งอ่อน, พี stylirostris และเอ็ม rosenbergii (ไม่ได้แสดงข้อมูล) ในช่วงการเจริญเติบโตพ่อแม่พันธุ์, polychaetes ปลาหมึกและชีวมวลอาร์ทีเมียมักจะเพิ่มไปที่อาหารกุ้งมีชีวิตเหล่านี้ได้รับการสงสัยว่าจะเป็นพาหะของEHP และกำลังมีการทดสอบบ่อยการปรากฏตัวของEHP ผล PCR ของเราแสดงให้เห็นว่าEHP-ไพรเมอร์ไม่ได้มีปฏิกิริยากับดีเอ็นเอของไส้เดือน, ปลาหมึกและชีวมวลอาร์ทีเมีย นอกจากนี้เรายังได้รับการทดสอบดีเอ็นเอจากปูที่ถูกเก็บรวบรวมจากบ่อเลี้ยงกุ้งผลลัพธ์ที่แสดงให้เห็นว่า EHP ไพรเมอร์ไม่ได้ข้ามทำปฏิกิริยากับกุ้งเหล่านี้. โดยไม่คาดคิดเราตรวจพบ EHP ใน 4 จาก 9 ตัวอย่างแช่แข็งชีวมวลอาร์ทีเมีย(รูป. 2 ช่อง 9 เป็นตัวอย่างที่เป็นตัวแทน) จากEHP บวกชีวมวลอาร์ทีเมีย 18S rRNA ยีนถูกขยายและลำดับขั้นตอนและชิ้นส่วน1.1 กิโลเป็น 99.9% เหมือนกัน(แตกต่างกันใน 2 นิวคลีโอ) กับที่ของ EHP จากเวียดนามบอกEHP อยู่ในชีวมวลอาร์ทีเมียอาจมีต้นตอมาจากทางทิศตะวันออกเอเชีย. ทั้งหมด 4 EHP บวกตัวอย่างชีวมวลอาร์ทีเมียมาจากหนึ่งในผู้ให้บริการแต่ละรายและเป็นไปได้ว่าพวกเขาทุกคนเก็บเกี่ยวจากlocation.Concerns เดียวกันของการติดเชื้อใน EHP ทำไร่ไถนาประชากรกุ้งมีแนวโน้มที่จะยังคงสร้างความต้องการที่จะลดความเสี่ยงผ่านการจัดตั้งของวิธีที่มีประสิทธิภาพในการควบคุมและตรวจสอบพยาธินี้ ในการนี้การใช้งานที่เฉพาะเจาะจงและวิธีการที่มีความสำคัญในระดับโมเลกุลในการตรวจหา EHP ในกุ้งฟีดข้อมูลสดและสภาพแวดล้อมบ่อมีแนวโน้มที่จะพิสูจน์ให้เป็นมากที่สำคัญ EHP กุ้งที่ติดเชื้อไม่สามารถพิจารณาได้จากการตรวจสอบภาพง่าย ไม่มีอาการที่เห็นได้ชัดของการติดเชื้อ. ไร้ความสามารถนี้ในการตรวจสอบบุคคลที่ EHP ที่ติดเชื้อจะส่งผลในการแพร่กระจายอย่างรวดเร็วของพยาธินี้ตลอดทั้งหุ้นกุ้ง. โปรโตคอลการวิเคราะห์บนพื้นฐานของ ISH และ PCR การพัฒนาในการศึกษาครั้งนี้ได้พิสูจน์แล้วว่าทั้งสองที่เฉพาะเจาะจงและมีความสำคัญจึงให้เครื่องมือที่มีคุณค่าสำหรับการวินิจฉัยและการตรวจสอบประจำของหุ้นกุ้งสภาพแวดล้อมบ่อเพาะเลี้ยงสัตว์น้ำและสินค้าโภคภัณฑ์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3.4 . โดยอันดับเครดิตที่เราเลือกไพรเมอร์ ehp-510f /
r จาก 18S rRNA ยีนของอันดับเครดิตและการทำ PCR

กับดีเอ็นเอที่สกัดจากกุ้งอันดับเครดิตที่ติดเชื้อ ผลการศึกษาพบว่า เชื้อนี้สามารถตรวจพบเชื้อ P . vannamei
อันดับเครดิต ( จากเวียดนามในปี 2014 และ 2015 ,
รูปที่ 2 เลน 1 & 2 จากประเทศไทย ในปี 2014 ซอย 3 ) ; อุจจาระและน้ำตัวอย่างที่เก็บจากกุ้งติดเชื้อ

ถังยัง3.4 . โดยอันดับเครดิตที่เราเลือกไพรเมอร์ ehp-510f /
r จาก 18S rRNA ยีนของอันดับเครดิตและการทำ PCR

กับดีเอ็นเอที่สกัดจากกุ้งอันดับเครดิตที่ติดเชื้อ ผลการศึกษาพบว่า เชื้อนี้สามารถตรวจพบเชื้อ P . vannamei
อันดับเครดิต ( จากเวียดนามในปี 2014 และ 2015 ,
รูปที่ 2 เลน 1 & 2 จากประเทศไทย ในปี 2014 ซอย 3 ) ; อุจจาระและน้ำตัวอย่างที่เก็บจากกุ้งติดเชื้อ

ถังยัง3.4 . โดยอันดับเครดิตที่เราเลือกไพรเมอร์ ehp-510f /
r จาก 18S rRNA ยีนของอันดับเครดิตและการทำ PCR

กับดีเอ็นเอที่สกัดจากกุ้งอันดับเครดิตที่ติดเชื้อ ผลการศึกษาพบว่า เชื้อนี้สามารถตรวจพบเชื้อ P . vannamei
อันดับเครดิต ( จากเวียดนามในปี 2014 และ 2015 ,
รูปที่ 2 เลน 1 & 2 จากประเทศไทย ในปี 2014 ซอย 3 ) ; อุจจาระและน้ำตัวอย่างที่เก็บจากกุ้งติดเชื้อ

ถังยัง3.4 . โดยอันดับเครดิตที่เราเลือกไพรเมอร์ ehp-510f /
r จาก 18S rRNA ยีนของอันดับเครดิตและการทำ PCR

กับดีเอ็นเอที่สกัดจากกุ้งอันดับเครดิตที่ติดเชื้อ ผลการศึกษาพบว่า เชื้อนี้สามารถตรวจพบเชื้อ P . vannamei
อันดับเครดิต ( จากเวียดนามในปี 2014 และ 2015 ,
รูปที่ 2 เลน 1 & 2 จากประเทศไทย ในปี 2014 ซอย 3 ) ; อุจจาระและน้ำตัวอย่างที่เก็บจากกุ้งติดเชื้อ

ถังยัง3.4 . โดยอันดับเครดิตที่เราเลือกไพรเมอร์ ehp-510f /
r จาก 18S rRNA ยีนของอันดับเครดิตและการทำ PCR

กับดีเอ็นเอที่สกัดจากกุ้งอันดับเครดิตที่ติดเชื้อ ผลการศึกษาพบว่า เชื้อนี้สามารถตรวจพบเชื้อ P . vannamei
อันดับเครดิต ( จากเวียดนามในปี 2014 และ 2015 ,
รูปที่ 2 เลน 1 & 2 จากประเทศไทย ในปี 2014 ซอย 3 ) ; อุจจาระและน้ำตัวอย่างที่เก็บจากกุ้งติดเชื้อ

ถังยัง3.4 . โดยอันดับเครดิตที่เราเลือกไพรเมอร์ ehp-510f /
r จาก 18S rRNA ยีนของอันดับเครดิตและการทำ PCR

กับดีเอ็นเอที่สกัดจากกุ้งอันดับเครดิตที่ติดเชื้อ ผลการศึกษาพบว่า เชื้อนี้สามารถตรวจพบเชื้อ P . vannamei
อันดับเครดิต ( จากเวียดนามในปี 2014 และ 2015 ,
รูปที่ 2 เลน 1 & 2 จากประเทศไทย ในปี 2014 ซอย 3 ) ; อุจจาระและน้ำตัวอย่างที่เก็บจากกุ้งติดเชื้อ

ถังยัง3.4 . โดยอันดับเครดิตที่เราเลือกไพรเมอร์ ehp-510f /
r จาก 18S rRNA ยีนของอันดับเครดิตและการทำ PCR

กับดีเอ็นเอที่สกัดจากกุ้งอันดับเครดิตที่ติดเชื้อ ผลการศึกษาพบว่า เชื้อนี้สามารถตรวจพบเชื้อ P . vannamei
อันดับเครดิต ( จากเวียดนามในปี 2014 และ 2015 ,
รูปที่ 2 เลน 1 & 2 จากประเทศไทย ในปี 2014 ซอย 3 ) ; อุจจาระและน้ำตัวอย่างที่เก็บจากกุ้งติดเชื้อ

ถังยัง