2.1. Heterotrophic cultivationThe d

2.1. Heterotrophic cultivation
The diatom Nitzschia laevis (UTEX 2047) was used in this study. The cells were cultured in 250 ml Erlenmeyer flasks, each containing 100 ml of modified Lewin’s marine diatom medium (LDM) which was optimized for N. laevis UTEX 2047 by Wen and Chen (2001b). The flasks were incubated in an orbital shaker (at 160 rpm) at 23 °C in darkness. The initial medium pH was adjusted to 8.5 prior to autoclave.

2.2. Determination of cell dry weight
A 3 ml aliquot of the fermentation broth was sampled aseptically to determine the cell dry weight. The sample was centrifuged at 2040g for 5 min, and the cell pellet was washed with distilled water, twice. Cell dry weight was determined by filtering the fluid through a preweighed filter paper (Whatman GF/C) and dried at 80 °C in a vacuum oven to constant weight.

2.3. Determination of glucose concentration
Residual glucose concentration of the medium was determined by the 3,5-dinitrosalicylic acid method (Miller, 1959).

2.4. Lipid extraction and analysis
Cells were harvested in the early stationary phase for lipid and fatty acid analysis. Total lipids were extracted from 200 mg of lyophilized biomass according to the modified Folch procedure (Christie, 2003). The extract was dried in a rotary evaporator, and then weighed, resuspended in chloroform, and finally stored at −20 °C under nitrogen gas to prevent lipid oxidation.

Total lipids extracted were separated into neutral lipids (NLs), glycolipids (GLs) and phospholipids (PLs) using solid-phase extraction (Christie, 2003). A 500 mg Sep-Pak™ cartridge of silica gel (Waters) was first conditioned by elution with 5 ml of chloroform, and about 50 mg of lipid were then applied to it. Elution with 10 ml of chloroform yielded the NLs, 10 ml of acetone gave the GLs, and 10 ml of methanol yielded the PLs. Each fraction was concentrated under a stream of nitrogen gas, resuspended in 0.1 ml of chloroform.

The aforementioned lipid fractions were subjected to one-dimensional thin-layer chromatography (TLC) for lipid class separation and identification, using TLC plates (20 × 20 cm) coated with silica gel 60 (Merck). Plates were activated in an oven at 10 °C for 2 h before use. Solvents used were hexane/diethyl ether/acetic acid (70:30:1, v/v) for neutral lipids and chloroform/acetone/methanol/acetic acid/water (50:20:10:10:5 v/v) for both GLs and PLs (Touchstone, 1995). Two-dimensional TLC was performed to confirm the identification of both polar lipid classes, using chloroform/methanol/28% aqueous ammonia (65:35:5 v/v) as the first solvent, a mixture of chloroform/acetone/methanol/acetic acid/water (50:20:10:10:5 v/v) as the second solvent, and the same type of TLC plates (Christie, 2003).

A 0.1% (w/v) solution of 2,7-dichlorofluorescein in 95% methanol was used as general stain, which caused lipids to show up as yellow spots under UV light. Bands were identified by co-chromatography with pure standards (Sigma) and by (as specific as possible) staining when necessary: α-naphthol for GLs, molybdenum blue spray reagent for PLs, Dragendorff’s reagent for phosphatidylcholine (PC), ninhydrin for phosphatidylethanolamine (PE) and phosphatidylserine (PS), cresyl violet for sulphoquinovosyldiacylglycerol (SQDG) (Christie, 2003 and Williams, 1978).

2.5. Fatty acid analysis
After visualization and identification, lipid bands were immediately and carefully scraped out, and fatty acids were analyzed by gas chromatography (GC) after direct transmethylation with sulphuric acid in methanol (Christie, 2003). The fatty acid methanol esters (FAMEs) were extracted with hexane and analyzed by HP-6890 gas chromatography (Hewlett-Packard) equipped with HP7673 injector, a flame-ionization detector and a HP-INNOWAX™ capillary column (HP 19091N-133, 30 m × 0.25 mm × 0.25 μm). Two microliters of the sample were injected in the splitless injection mode. The inlet and detector temperatures were kept at 250 °C and 270 °C, respectively, and the oven temperature was programmed from 170 °C to 230 °C increasing at 1 °C/min. High purity nitrogen gas was used as the carrier gas. FAMEs were identified by comparison of their retention times with those of the authentic standards (Sigma), and were quantified by comparing their peak areas with that of the internal standard (C17:0).

3. Results and discussion
3.1. Heterotrophic growth characteristics
The kinetics of the cell growth and glucose consumption of N. laevis in heterotrophic batch culture are shown in Table 1. The alga grew well with a specific growth rate of 0.580 d−1. The growth yield coefficient, based on glucose, Yx/glu, was 0.479 g/g. The highest biomass concentration, Xmax of 10.10 g/l was obtained in the early stationary phase (day 5). The kinetic growth parameters obtained in this study were comparable to those reported by Wen and Chen (2003).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.1. heterotrophic ปลูกไดอะตอม Nitzschia laevis (UTEX 2047) ถูกใช้ในการศึกษานี้ เซลล์มีอ่างในน้ำ 250 ml Erlenmeyer, 100 มลละมีของ Lewin แก้ไขทะเลไดอะตอมกลาง (ตา LDM) ซึ่งเหมาะสำหรับ laevis ตอนเหนือ UTEX 2047 ทางเหวินเฉิน (2001b) น้ำถูก incubated ในเชคเกอร์ของวงโคจร (ที่ 160 รอบต่อนาที) ที่ 23 ° C ในที่มืด ปรับปรุง pH ปานกลางเริ่มต้น 8.5 ก่อนด้วย2.2 การกำหนดเซลล์แห้งน้ำหนักส่วนลงตัว 3 ml ของซุปหมักมีความ aseptically เพื่อกำหนดน้ำหนักเซลล์แห้ง ตัวอย่างถูก centrifuged ที่ 2040g สำหรับ 5 นาที และเม็ดเซลล์ถูกล้าง ด้วยน้ำกลั่น สอง น้ำหนักแห้งของเซลล์ถูกกำหนด โดยการกรองน้ำโดยใช้กระดาษกรอง preweighed (Whatman GF/C) และแห้งที่ 80 ° C ในเตาสูญญากาศน้ำหนักคง2.3 การกำหนดความเข้มข้นของน้ำตาลกลูโคสความเข้มข้นกลูโคสส่วนที่เหลือของกลางถูกกำหนด โดยวิธีกรดของ 3,5-dinitrosalicylic (มิลเลอร์ 1959)2.4. กระบวนการสกัดและวิเคราะห์เซลล์เก็บเกี่ยวในระยะแรก ๆ เครื่องเขียนสำหรับการวิเคราะห์ไขมันและกรดไขมัน โครงการทั้งหมดถูกสกัดจาก 200 มิลลิกรัมของชีวมวล lyophilized ตามขั้นตอน Folch แก้ไข (คริสตี้ 2003) สารสกัดที่แห้งใน evaporator โรตารี่ และชั่งน้ำหนักแล้ว resuspended ในคลอโรฟอร์ม และสุดท้าย เก็บไว้ที่ −20 ° C ภายใต้ก๊าซไนโตรเจนเพื่อป้องกันการเกิดออกซิเดชันของไขมันรวมโครงการที่สกัดถูกแบ่งออกเป็นกลางโครงการ (NLs), glycolipids (GLs) และ phospholipids (กรุณา) โดยใช้การแยกเฟสของแข็ง (คริสตี้ 2003) ตลับหมึกปาก Sep ™ 500 มิลลิกรัมของซิลิก้าเจล (น้ำ) ก่อนถูกปรับ โดย elution ด้วย 5 ml ของคลอโรฟอร์ม และจากนั้นใช้ไขมันประมาณ 50 มิลลิกรัมจะ Elution กับ 10 ml ของคลอโรฟอร์มผล NLs, 10 ml ของอะซิโตนให้ GLs และ 10 ml ของเมทานอลเต็มกรุณา ทุกฝ่ายเข้มข้นภายใต้กระแสของก๊าซไนโตรเจน resuspended ใน 0.1 ml ของคลอโรฟอร์มส่วนไขมันดังกล่าวถูกต้อง one-dimensional ชั้นบาง chromatography (TLC) แยกชั้นไขมันและรหัส ใช้แผ่น TLC (20 × 20 เซนติเมตร) เคลือบ ด้วยซิลิก้าเจล 60 (เมอร์ค) แผ่นที่ใช้ในเตาอบที่ 10 ° C สำหรับ h 2 ก่อนใช้ หรือสารทำละลายที่ใช้มีอีเทอร์เฮก เซน/diethyl/กรด อะซิติก (70:30:1, v/v) สำหรับโครงการที่เป็นกลางและกรดคลอโรฟอร์ม/อะซีโตน/เมทานอล/อะซิติก/น้ำ (v 50:20:10:10:5 v) GLs และกรุณา (เกิดประโยชน์ 1995) TLC ที่สองทำการยืนยันรหัสทั้งชั้นไขมันขั้วโลก ใช้ chloroform/methanol/28% อควีแอมโมเนีย (65:35:5 v/v) เป็นตัวทำละลายแรก ส่วนผสมของกรดคลอโรฟอร์ม/อะซีโตน/เมทานอล/อะซิติก/น้ำ (v 50:20:10:10:5 v) เป็นตัวทำละลายที่สอง และชนิดเดียวกันของแผ่น TLC (คริสตี้ 2003)มีใช้โซลูชั่น 0.1% (w/v) ของ 2,7 dichlorofluorescein ในเมทานอล 95% เป็นคราบทั่วไป ที่เกิดจากโครงการเพื่อแสดงให้เห็นเป็นจุดสีเหลืองภายใต้รังสียูวีแสง ระบุ โดย chromatography ร่วม กับมาตรฐานบริสุทธิ์ (ซิกมา) และโดยวง (เป็นกฎ) ย้อมสีเมื่อจำเป็น: α-naphthol สำหรับ GLs โมลิบดีนัมรีเอเจนต์สเปรย์สีน้ำเงินสำหรับกรุณา รีเอเจนต์ของ Dragendorff สำหรับสำคัญ (พีซี), ninhydrin สำหรับ phosphatidylethanolamine (PE) และ phosphatidylserine (PS), cresyl อมม่วงสำหรับ sulphoquinovosyldiacylglycerol (SQDG) (คริสตี้ 2003 และวิลเลียมส์ 1978)2.5 การวิเคราะห์กรดไขมันหลังจากการแสดงภาพประกอบเพลงและรหัส วงไขมันได้ทันที และอย่างขูดออก และกรดไขมันที่ถูกวิเคราะห์ โดยก๊าซ chromatography (GC) หลังจาก transmethylation โดยตรงกับกรดซัลฟุริกในเมทานอล (คริสตี้ 2003) Esters เมทานอลของกรดไขมัน (FAMEs) ที่สกัด ด้วยเฮกเซน และวิเคราะห์ โดย HP-6890 chromatography ก๊าซ (Hewlett-Packard) พร้อมหัวฉีด HP7673 จับเปลวไฟ ionization และ HP INNOWAX ™คอลัมน์เส้นเลือดฝอย (HP 19091N-133, 30 m × 0.25 มม.× 0.25 μm) Microliters 2 ของตัวอย่างที่ฉีดในโหมดฉีด splitless อุณหภูมิทางเข้าของและจับถูกเก็บไว้ที่ 250 ° C และ 270 ° C ตามลำดับ และอุณหภูมิเตาอบโปรแกรม 170 ° c การเพิ่ม 230 ° C ที่ 1 ° C ความบริสุทธิ์สูงต่ำ ใช้ก๊าซไนโตรเจนเป็นก๊าซผู้ขนส่ง FAMEs ด้วยเวลาเก็บรักษาของพวกเขาเปรียบเทียบกับมาตรฐานแท้จริง (ซิกมา), และถูก quantified โดยการเปรียบเทียบพื้นที่ของพวกเขาสูงสุดกับมาตรฐานภายใน (C17:0)3. ผลลัพธ์ และสนทนา3.1. ลักษณะการเจริญเติบโต heterotrophicจลนพลศาสตร์ของการเจริญเติบโตของเซลล์และการใช้กลูโคสของ laevis ตอนเหนือในวัฒนธรรมชุด heterotrophic จะแสดงในตารางที่ 1 Alga เติบโตดีอัตราการเจริญเติบโตของ 0.580 d−1 สัมประสิทธิ์ของผลตอบแทนเติบโต ขึ้นอยู่กับการน้ำตาลกลูโคส Yx/glu ถูก 0.479 g/g ชีวมวลสูงสุดเข้มข้น Xmax 10.10 g/l ได้รับในช่วงระยะเครื่องเขียน (5 วัน) พารามิเตอร์การเจริญเติบโตเคลื่อนไหวได้ในการศึกษานี้ได้เปรียบเทียบได้กับรายงานทางเหวินเฉิน (2003)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.1 การเพาะปลูก heterotrophic
ไดอะตอม Nitzschia laevis (UTEX 2047) ถูกนำมาใช้ในการศึกษานี้ เซลล์เพาะเลี้ยงใน 250 มลขวดรูปกรวยแต่ละที่มีขนาด 100 ml ของกลางไดอะตอมทะเล Lewin แก้ไข (LDM) ซึ่งได้รับการปรับให้เหมาะสมกับ N. Laevis Utex 2047 โดยเหวินและเฉิน (2001b) ขวดถูกบ่มในเครื่องปั่นโคจร (ที่ 160 รอบต่อนาที) ที่อุณหภูมิ 23 ° C ในความมืด พีเอชเริ่มต้นขนาดกลางมีการปรับถึง 8.5 ก่อนที่จะ Autoclave. 2.2 การกำหนดน้ำหนักเซลล์แห้ง3 มลลงตัวของน้ำหมักเป็นตัวอย่างปลอดเชื้อเพื่อตรวจสอบมือถือของน้ำหนักแห้ง ตัวอย่างหมุนเหวี่ยงที่ 2040g เป็นเวลา 5 นาทีและตะกอนเซลล์ถูกล้างด้วยน้ำกลั่นสองครั้ง น้ำหนักเซลล์แห้งถูกกำหนดโดยการกรองของเหลวผ่านกระดาษกรอง preweighed (Whatman GF / C) และอบแห้งที่อุณหภูมิ 80 ° C ในเตาอบสูญญากาศให้น้ำหนักคงที่. 2.3 การกำหนดความเข้มข้นของกลูโคสความเข้มข้นของกลูโคสที่เหลือของกลางถูกกำหนดโดยวิธีการที่กรด 3,5-dinitrosalicylic (มิลเลอร์, 1959). 2.4 การสกัดไขมันและการวิเคราะห์เซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวในระยะ stationary ต้นสำหรับไขมันและการวิเคราะห์กรดไขมัน ไขมันทั้งหมดถูกสกัดจาก 200 มิลลิกรัมของชีวมวลแห้งตามขั้นตอน Folch แก้ไข (คริสตี้ 2003) สารสกัดแห้งในเครื่องระเหยแบบหมุนและชั่งน้ำหนักแล้ว resuspended ในคลอโรฟอร์มและเก็บไว้ในที่สุดที่ -20 ° C ภายใต้ก๊าซไนโตรเจนเพื่อป้องกันการเกิดออกซิเดชันของไขมัน. ไขมันรวมสกัดถูกแยกออกเป็นไขมันที่เป็นกลาง (NLS) glycolipids (แอลเอส) และ phospholipids (PLs) โดยใช้การสกัดของแข็งเฟส (คริสตี้ 2003) 500 มิลลิกรัมตลับ ก.ย. ปาก™ของซิลิกาเจล (น้ำ) เป็นเงื่อนไขเป็นครั้งแรกโดยการชะ 5 มิลลิลิตรคลอโรฟอร์มและประมาณ 50 มิลลิกรัมของไขมันจากนั้นก็นำไปใช้กับมัน elution กับ 10 มิลลิลิตรคลอโรฟอร์ม yielded NLS, 10 มิลลิลิตรของอะซิโตนให้แอลเอส, และ 10 มิลลิลิตรของเมทานอลให้ผล PLs ส่วนแต่ละคนก็มีความเข้มข้นภายใต้กระแสของก๊าซไนโตรเจน resuspended ใน 0.1 มิลลิลิตรคลอโรฟอร์ม. เศษส่วนไขมันดังกล่าวถูกยัดเยียดให้หนึ่งมิติโคบางชั้น (TLC) สำหรับการแยกชั้นของไขมันและการตรวจสอบโดยใช้แผ่น TLC (20 × 20 ซม ) เคลือบด้วยซิลิกาเจล 60 (เมอร์) แผ่นถูกเปิดใช้งานในเตาอบที่อุณหภูมิ 10 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมงก่อนการใช้งาน ตัวทำละลายใช้คือเฮกเซน / อีเทอร์ / กรดอะซิติก (70: 30: 1, v / v) สำหรับไขมันที่เป็นกลางและคลอโรฟอร์ม / อะซิโตน / เมทานอล / กรดอะซิติก / น้ำ (50: 20: 10: 10: 5 v / v) สำหรับ ทั้งแอลเอสและ PLs (มาตรฐาน, 1995) สองมิติ TLC ได้ดำเนินการเพื่อยืนยันบัตรประจำตัวของทั้งสองเรียนไขมันขั้วโลกใช้คลอโรฟอร์ม / เมทานอล / 28% แอมโมเนียในน้ำ (65: 35: 5 v / v) เป็นตัวทำละลายแรกส่วนผสมของคลอโรฟอร์ม / อะซิโตน / เมทานอล / อะซิติก กรด / น้ำ (50: 20: 10: 10: 5 v / v) เป็นตัวทำละลายที่สองและประเภทเดียวกันของเพลต TLC (คริสตี้ 2003). 0.1% (w / v) การแก้ปัญหาของ 2,7-dichlorofluorescein ในเมทานอล 95% ถูกใช้เป็นคราบทั่วไปซึ่งก่อให้เกิดไขมันที่จะแสดงเป็นจุดสีเหลืองภายใต้แสงยูวี คลื่นที่ถูกระบุโดยร่วมโคกับมาตรฐานบริสุทธิ์ (Sigma) และ (เฉพาะที่เป็นไปได้) การย้อมสีเมื่อจำเป็น: α-naphthol สำหรับแอโมลิบดีนัมน้ำยาสเปรย์สีฟ้าสำหรับ PLs, น้ำยา Dragendorff สำหรับ phosphatidylcholine (PC), Ninhydrin สำหรับ phosphatidylethanolamine ( PE) และ phosphatidylserine (PS), สีม่วง cresyl สำหรับ sulphoquinovosyldiacylglycerol (SQDG) (คริสตี้ 2003 และวิลเลียมส์, 1978). 2.5 การวิเคราะห์กรดไขมันหลังจากการสร้างภาพและบัตรประจำตัววงไขมันถูกคัดลอกมาทันทีและอย่างออก, และกรดไขมันที่ได้มาวิเคราะห์โดยแก๊สโครมา (GC) หลังจาก transmethylation โดยตรงกับกรดซัลฟูริกในเมทานอล (คริสตี้ 2003) เอสเทอเมทานอลกรดไขมัน (FAMEs) ถูกสกัดด้วยเฮกเซนและวิเคราะห์โดยแก๊สโครมา HP-6890 (Hewlett-Packard) พร้อมกับหัวฉีด HP7673, เครื่องตรวจจับเปลวไฟไอออนไนซ์และคอลัมน์ฝอย HP-INNOWAX ™ (HP 19091N-133, 30 ม. × 0.25 มม× 0.25 ไมครอน) สอง microliters ของกลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการฉีดในโหมดการฉีด Splitless ขาเข้าและตรวจจับอุณหภูมิที่ถูกเก็บไว้ที่ 250 องศาเซลเซียสและ 270 องศาเซลเซียสตามลำดับและอุณหภูมิเตาอบเป็นโปรแกรมจาก 170 ° C ถึง 230 ° C ที่เพิ่มขึ้น ณ วันที่ 1 ° C / นาที ความบริสุทธิ์สูงก๊าซไนโตรเจนที่ใช้เป็นก๊าซ FAMEs ถูกระบุโดยเปรียบเทียบครั้งการเก็บรักษาของพวกเขากับคนของมาตรฐานที่แท้จริง (Sigma) และได้รับการวัดโดยการเปรียบเทียบพื้นที่สูงสุดของพวกเขากับที่ของมาตรฐานภายใน (C17: 0). 3 และอภิปรายผล3.1 ลักษณะการเจริญเติบโต heterotrophic จลนศาสตร์ของการเจริญเติบโตของเซลล์และการบริโภคน้ำตาลกลูโคสของ laevis N. ในวัฒนธรรมชุด heterotrophic จะแสดงในตารางที่ 1 สาหร่ายเติบโตได้ดีมีอัตราการเติบโตที่เฉพาะเจาะจงของ 0.580 D-1 ค่าสัมประสิทธิ์การเจริญเติบโตผลผลิตขึ้นอยู่กับกลูโคส Yx / Glu เป็น 0.479 g / g ความเข้มข้นของชีวมวลที่สูงที่สุดของ Xmax 10.10 กรัม / ลิตรที่ได้รับในระยะ stationary ต้น (วันที่ 5) การเจริญเติบโตการเคลื่อนไหวที่ได้รับในการศึกษาครั้งนี้ถูกเปรียบเทียบกับผู้ที่รายงานโดยเหวินและเฉิน (2003)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.1 . แบบการเพาะ
ไดอะตอม nitzschia laevis ( utex 2047 ) เป็นเครื่องมือที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ เซลล์เพาะเลี้ยงหมักในฟลาสก์ขนาด 250 มิลลิลิตรขวดแต่ละที่มี 100 ml ของไดอะตอมทะเลปานกลางดัด เลวิน ( ldm ) ซึ่งเหมาะสำหรับ utex 2690 . laevis โดยเหวิน และ เฉิน ( 2001b ) ขวดถูกบ่มในเครื่องปั่นโคจร ( ที่ 160 รอบต่อนาที ) ที่ 23 ° C ในความมืดพีเอชเริ่มต้นปรับขนาดกลางถึง 8.5 ก่อนนึ่ง

2.2 . การหาน้ำหนักเซลล์แห้ง
3 ml ส่วนลงตัวของน้ำหมักตัวอย่าง aseptically เพื่อหาน้ำหนักแห้งเซลล์ จำนวนระดับที่ 2040g เป็นเวลา 5 นาที และเซลล์เม็ดถูกล้างด้วยน้ำกลั่น 2 ครั้งน้ำหนักเซลล์แห้งถูกกำหนดโดยการกรองของเหลวผ่าน preweighed กรองกระดาษ ( whatman GF / C ) อบแห้งที่อุณหภูมิ 80 องศา C ในเตาอบสุญญากาศ น้ำหนักคงที่

2.3 การหาปริมาณน้ำตาลกลูโคสกลูโคสความเข้มข้น
ตกค้างของสื่อถูกหาโดยวิธีกรด 3,5-dinitrosalicylic ( มิลเลอร์ , 1959 ) .

2.4 . การสกัดและวิเคราะห์ไขมัน
เซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวในช่วงต้นระยะเครื่องเขียนไขมัน และกรดไขมัน ไขมันทั้งหมดสกัดจาก 200 มิลลิกรัมของมวลชีวภาพแห้ง ตามขั้นตอนการฟอล์ช ( คริสตี้ , 2003 ) สารสกัดแห้งในเครื่องระเหยแบบหมุน แล้วชั่งน้ำหนัก resuspended ในคลอโรฟอร์ม และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 20 ° C −ในที่สุดภายใต้ก๊าซไนโตรเจน เพื่อป้องกันปฏิกิริยาออกซิเดชันของลิพิด .

รวมไขมันที่สกัดได้แยกออกเป็นไขมันที่เป็นกลาง ( NLS ) , ไกลโคลิพิด ( GLS ) และฟอสโฟลิพิด ( PLS ) การสกัดส่วน ( คริสตี้ , 2003 ) 500 มิลลิกรัมก.ย. ปาก™ตลับของซิลิกาเจล ( น้ำ ) เป็นครั้งแรกโดยปรับอากาศ ( 5 มิลลิลิตร ( ประมาณ 50 มิลลิกรัม ต่อ แล้วใช้มัน ( 10 ml ของคลอโรฟอร์มให้ผล NLS , 10 ml ของ GLS ) ให้ ,และ 10 ml ของเมทานอลและ pls แต่ละส่วนข้น ภายใต้กระแสของแก๊สไนโตรเจน resuspended 0.1 มิลลิลิตร คลอโรฟอร์ม

เศษส่วนไขมันดังกล่าวถูกพบใน chromatography ( TLC ) สำหรับการแยกชั้นไขมันและการจำแนกโดยใช้ TLC แผ่น ( 20 × 20 ซม. ) ที่เคลือบด้วยซิลิกาเจล 60 ( Merck )แผ่นก็เปิดเตาอบที่ 10 ° C เป็นเวลา 2 ชั่วโมง ก่อนที่จะใช้ ใช้เป็นตัวทำละลายเฮกเซน / อีเทอร์ / กรดน้ำส้ม ( 70:30:1 , V / V ) สำหรับไขมันที่เป็นกลางและคลอโรฟอร์ม / อะซิโตน / เมทานอลกรดอะซิติก / น้ำ ( 50:20:10:10:5 v / v ) และกรุณา ( ทั้งสองด้านของ , 1995 ) สองมิติ TLC ได้ยืนยันตัวของขั้วโลกทั้ง 2 ชั้นการใช้เมทานอลคลอโรฟอร์ม / แอมโมเนียน้ำ ( 65:35:5 28 % v / v ) เป็นตัวทำละลายก่อน ส่วนผสมของคลอโรฟอร์ม / อะซิโตน / เมทานอลกรดอะซิติก / น้ำ ( 50:20:10:10:5 v / v ) เป็นตัวทำละลายที่สองและประเภทเดียวกันของ TLC แผ่น ( คริสตี้ , 2003 ) .

0.1% ( w ปริมาตรสารละลายเมทานอล 2,7-dichlorofluorescein 95% ใช้เป็นคราบทั่วไป ซึ่งเป็นสาเหตุของไขมันที่จะแสดงเป็นจุดสีเหลืองภายใต้แสงยูวีวงดนตรีกลุ่ม Co โครมกับมาตรฐานบริสุทธิ์ ( Sigma ) และโดยเฉพาะเท่าที่เป็นไปได้ ) staining เมื่อจำเป็น : แอลฟา naphthol สำหรับ GLS , Molybdenum สเปรย์สารเคมีสีฟ้าสำหรับกรุณา รีเอเจนต์ dragendorff สำหรับฟอสฟาติดิลโคลีน ( PC ) , ninhydrin สำหรับ phosphatidylethanolamine ( PE ) และฟอสฟาไทดิลเซอรีน ( PS ) , คริซิลไวโอเลตเพื่อ sulphoquinovosyldiacylglycerol ( sqdg ) ( คริสตี้2003 และวิลเลียมส์ , 1978 ) .

2.5 การวิเคราะห์กรดไขมัน
หลังจากการแสดงภาพประกอบเพลง และตัวรัดทันที และรอบคอบขูดไขมันออก และกรดไขมัน วิเคราะห์โดยแก๊สโครมาโทกราฟี ( GC ) หลังจากโดยตรง transmethylation กับกรดในเมทานอล ( คริสตี้ , 2003 )กรดไขมันเอสเทอร์ ( FAMEs ) สารสกัดด้วยเฮกเซนและวิเคราะห์ด้วยแก๊สโครมาโตกราฟี hp-6890 ( Hewlett Packard ) พร้อมกับ hp7673 หัวฉีด , เฟลมไอออไนเซชันตรวจจับและ hp-innowax ™แคพิลลารีคอลัมน์ ( HP 19091n-133 30 m × 0.25 มม. × 0.25 μ M ) สองตัวเลขของจำนวนการฉีดในโหมดการฉีด splitless .ปากน้ำและเครื่องตรวจจับอุณหภูมิไว้ที่ 250 องศา C และ 270 องศาองศาเซลเซียส ตามลำดับ และเตาอบอุณหภูมิ 170 องศา C โปรแกรมจาก 230 องศา C เพิ่มขึ้นในแก๊สไนโตรเจน 1 ° C ต่อนาทีสูงบริสุทธิ์ถูกใช้เป็นแก๊สตัวพา ดีถูกระบุโดยการเปรียบเทียบความคงทนของพวกเขาที่มีเวลามาตรฐานของแท้ ( Sigma )และมีปริมาณพื้นที่สูงสุดของพวกเขาโดยการเปรียบเทียบกับที่ของมาตรฐานภายใน ( c17:0 ) .

3 ผลและการอภิปราย
3.1 . ลักษณะการเจริญเติบโตแบบ
จลนศาสตร์การเจริญและการใช้กลูโคส . laevis ในวัฒนธรรมแบบเป็นชุด แสดงดังตารางที่ 1 Alga เติบโตดี มีอัตราการเจริญเติบโตจำเพาะของ 0.580 D − 1 ผลผลิตของสัมประสิทธิ์จากกลูโคสyx / ซึ่งเป็น 0.479 กรัม / กรัมมวลชีวภาพสูงสุด ความเข้มข้น xmax ของ 10.10 กรัม / ลิตรได้ในขั้นตอนแรกของการเกิด ( 5 วัน ) พารามิเตอร์จลน์ที่ได้ในการศึกษานี้คือการเปรียบเทียบกับรายงานโดย เหวิน และ เฉิน ( 2003 )