.2.7. Analysis methodsEnzyme from k

.2.7. Analysis methods

Enzyme from koji was extracted with 50 volumes of water at room temperature for 6 h and filtered. The enzyme extract was centrifuged at 4000 rpm for 10 min, and the clear supernatant was used for enzyme assay. Filter paper activity and cellobiase activity were determined according to standard International Union of Pure and Applied Chemistry (IUPAC) procedures (Ghose, 1987). Filter paper activity was assayed by incubating a reaction mixture containing a strip of Whatman no. 1 filter paper (1×6 cm) immersed in 1 ml of 0.05 M citrate buffer and 0.5 ml of appropriately diluted enzyme solution at 50 °C for 30 min. One unit of filter paper activity (FPU) is defined as the amount of enzyme that forms 1 μmol glucose (reducing sugar as glucose) per minute under the assay conditions. Cellobiase activity was assayed in a reaction mixture containing 1 ml of 15 mM cellobiose solution (prepared in 0.05 M citrate buffer, pH 4.8) and 1 ml of appropriately diluted enzyme solution at 50 °C for 30 min. One unit of cellobiase activity (CBU) is the amount of enzyme that forms 2 μmol glucose per minute from cellobiose.

The reducing sugar was determined using the 3,5-dinitrosalicylic acid (DNS) method (Ghose, 1987). Glucose, xylose, cellobiose, arabinose, ethanol and glycerol were analyzed by HPLC (Syltech model 500 pump, USA) with an organic acid column (TRANSGENOMIC ICSep ICE-COREGEL 87H3 Column). Purified water was used as the mobile phase at a flow rate of 0.5 ml/min. The column temperature was fixed at 60 °C. The eluate was detected by a refractive index detector (Spectra-Physics 6040 XR RI detector).

The yield of enzymatic hydrolysis was calculated as follows:

Hydrolysis yield (%)=reducing sugar×0.9×100/polysaccharide in substrate.

At least three parallel samples were used in all analytical determinations, and data are presented as the mean of three replicates.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

.2.7 วิธีการวิเคราะห์เอนไซม์จากจิถูกสกัด ด้วย 50 ปริมาณของน้ำที่อุณหภูมิห้องใน 6 h และกรอง สารสกัดจากเอนไซม์ถูก centrifuged ที่ 4000 rpm สำหรับ 10 นาที และ supernatant ชัดเจนถูกใช้สำหรับการวิเคราะห์เอนไซม์ กระดาษกรองกิจกรรมและกิจกรรม cellobiase ถูกกำหนดตามมาตรฐานนานาชาติสหภาพของบริสุทธิ์และเคมีที่ใช้ (ยิ่ง ๆ) กระบวนการ (Ghose, 1987) กระดาษกรองกิจกรรมถูก assayed โดย incubating ผสมปฏิกิริยาที่ประกอบด้วยแถบของ Whatman no. 1 กระดาษกรอง (1 × 6 ซม.) สัมผัส 1 ml 0.05 M ซิเตรตบัฟเฟอร์ และ 0.5 ml ของเอนไซม์ที่เหมาะสมแตกออกที่ 50 ° C สำหรับ 30 นาที หน่วยหนึ่งของกระดาษกรองกิจกรรม (FPU) ถูกกำหนดเป็นจำนวนเอนไซม์ที่กลูโคส μmol 1 (ลดน้ำตาลเป็นน้ำตาลกลูโคส) ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ Cellobiase กิจกรรมถูก assayed ในปฏิกิริยาส่วนผสมประกอบด้วย 1 ml ของโซลูชัน cellobiose 15 มม. (เตรียมใน 0.05 M ซิเตรตบัฟเฟอร์ pH 4.8) และ 1 ml ของเอนไซม์ที่เหมาะสมแตกออกที่ 50 ° C สำหรับ 30 นาที หน่วยของกิจกรรม cellobiase (CBU) คือ จำนวนของเอนไซม์ที่ใช้กลูโคส μmol 2 ต่อนาทีจาก cellobioseน้ำตาลลดลงถูกกำหนดโดยวิธีกรด (DNS) 3,5-dinitrosalicylic (Ghose, 1987) กลูโคส xylose, cellobiose, arabinose เอทานอล และกลีเซอรถูกวิเคราะห์ ด้วย HPLC (Syltech รุ่น 500 ปั๊ม สหรัฐอเมริกา) มีคอลัมน์เป็นกรดอินทรีย์ (น้ำแข็ง ICSep TRANSGENOMIC-COREGEL 87H 3 คอลัมน์) น้ำบริสุทธิ์ที่ใช้เป็นเฟสเคลื่อนที่อัตราการไหล 0.5 ml/นาที กำหนดคอลัมน์อุณหภูมิที่ 60 องศาเซลเซียส Eluate ตรวจพบ โดยจับดรรชนี (จับแรมสเป็คตราฟิสิกส์ 6040 XR RI)ผลผลิตของไฮโตรไลซ์เอนไซม์ในระบบคำนวณเป็นดังนี้:ไฮโตรไลซ์ผลตอบแทน (%) =ซื้อน้ำตาลลดลง 0.9 × 100/polysaccharide ในพื้นผิวใช้อย่างน้อย 3 ขนานใน determinations ทั้งหมดวิเคราะห์ และมีแสดงข้อมูลเป็นค่าเฉลี่ยของ 3 เหมือนกับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

.2.7 วิธีการวิเคราะห์เอนไซม์จากโคจิถูกสกัดด้วย 50 เล่มของน้ำที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 6 ชั่วโมงและกรอง สารสกัดจากเอนไซม์ที่ได้รับการหมุนเหวี่ยงที่ 4000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีและใสชัดเจนที่ใช้สำหรับการทดสอบการทำงานของเอนไซม์ กิจกรรมกระดาษกรองและกิจกรรม cellobiase ได้รับการพิจารณาเป็นไปตามมาตรฐานของสหภาพนานาชาติเคมีบริสุทธิ์และประยุกต์ (IUPAC) ขั้นตอน (Ghose, 1987) กิจกรรมกระดาษกรองได้รับการวิเคราะห์โดยการบ่มส่วนผสมปฏิกิริยาที่มีแถบเบอร์ไม่มี 1 กระดาษกรอง (1 × 6 เซนติเมตร) แช่ใน 1 มิลลิลิตร 0.05 M บัฟเฟอร์ซิเตรตและ 0.5 มิลลิลิตรของสารละลายเจือจางเอนไซม์ที่เหมาะสมที่ 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที หนึ่งหน่วยของกิจกรรมกระดาษกรอง (FPU) หมายถึงปริมาณของเอนไซม์ที่เป็นน้ำตาลกลูโคส 1 ไมโครโมล (ลดน้ำตาลกลูโคส) ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ กิจกรรม Cellobiase ได้รับการวิเคราะห์ในผสมปฏิกิริยาที่มี 1 มล. 15 มิลลิแก้ปัญหา cellobiose (จัดทำขึ้น 0.05 M บัฟเฟอร์ซิเตรตมีค่า pH 4.8) และ 1 มิลลิลิตรของสารละลายเจือจางเอนไซม์ที่เหมาะสมที่ 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที หนึ่งหน่วยของกิจกรรม cellobiase (CBU) คือปริมาณของเอนไซม์ที่เป็นน้ำตาลกลูโคสไมโครโมล 2 ต่อนาทีจาก cellobiose. ลดน้ำตาลถูกกำหนดโดยใช้กรด 3,5-dinitrosalicylic (DNS) วิธีการ (Ghose, 1987) กลูโคสไซโลส, cellobiose, อราบิโนเอทานอลและกลีเซอรีนถูกนำมาวิเคราะห์โดยวิธี HPLC (Syltech รุ่น 500 ปั๊มสหรัฐอเมริกา) กับคอลัมน์กรดอินทรีย์ (TRANSGENOMIC ICSep ICE-COREGEL 87H3 คอลัมน์) น้ำบริสุทธิ์ถูกใช้เป็นเฟสเคลื่อนที่ในอัตราการไหล 0.5 มล. / นาที อุณหภูมิคอลัมน์คงที่ 60 องศาเซลเซียส . โดย eluate ถูกตรวจพบโดยการตรวจจับดัชนีหักเห (Spectra-ฟิสิกส์ 6040 เครื่องตรวจจับ XR RI) ผลผลิตของการย่อยของเอนไซม์ที่ได้รับการคำนวณดังนี้ผลผลิตย่อย (%) = การลดน้ำตาล× 0.9 × 100 / polysaccharide ในพื้นผิว. อย่างน้อยสามขนาน กลุ่มตัวอย่างที่ใช้ในการวิเคราะห์หาความทั้งหมดและข้อมูลที่แสดงเป็นค่าเฉลี่ยของสามซ้ำ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

. ปี วิธีการวิเคราะห์

เอนไซม์สกัดจากโคจิกับ 50 ของปริมาณน้ำที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 6 ชั่วโมง และกรอง เอนไซม์สกัดเป็นระดับที่ 4000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 10 นาที และนำล้างใช้เอนไซม์ ( . . . กรองกระดาษเซลโลไบเ กิจกรรม กิจกรรม และวิเคราะห์ตามมาตรฐานสากลของสหภาพเคมีบริสุทธิ์และเคมีประยุกต์ ( สากล ) ( ghose ขั้นตอน ,1987 ) กิจกรรมกระดาษกรองถูก assayed โดยการแช่ปฏิกิริยาผสมที่ประกอบด้วยแถบของ whatman 1 ไส้กรองกระดาษ ( 1 × 6 ซม. ) แช่ใน 1 มิลลิลิตร 0.05 M ซิเตรตบัฟเฟอร์และ 0.5 มล. เจือจางสารละลายเอนไซม์ที่เหมาะสม 50 ° C เป็นเวลา 30 นาทีหน่วยหนึ่งของกิจกรรมกรองกระดาษ ( FPU ) หมายถึง ปริมาณของเอนไซม์ที่รูปแบบμกลูโคส 1 โมล ( ลดน้ำตาลเป็นกลูโคส ) ต่อนาที ภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ กิจกรรมเซลโลไบเซีรั่มใน 1 มิลลิลิตรของสารละลายผสมที่ประกอบด้วยปฏิกิริยาที่ 15 มม. ( ที่เตรียมไว้ใน 0.05 M ซิเตรตบัฟเฟอร์ pH 4.8 ) และ 1 มิลลิลิตรของสารละลายเอนไซม์ที่เหมาะสมลด 50 ° C เป็นเวลา 30 นาทีหน่วยหนึ่งของกิจกรรมเซลโลไบเ ( CBU ) คือปริมาณของเอนไซม์ที่ 2 รูปแบบμโมลต่อนาทีจากกลูโคสที่ .

ลดน้ำตาลถูกกำหนดโดยใช้กรด 3,5-dinitrosalicylic ( DNS ) วิธีการ ( ghose , 1987 ) กลูโคส , ไซโลส , ที่น้ำตาล เอทานอล และกลีเซอรอล วิเคราะห์โดย HPLC ( syltech รุ่น 500 ปั๊มสหรัฐอเมริกา ) กับกรดอินทรีย์คอลัมน์ ( คอลัมน์ transgenomic icsep ice-coregel 87h3 ) น้ำบริสุทธิ์ที่ใช้เฟสเคลื่อนที่ที่อัตราการ ไหลของ 0.5 มิลลิลิตร / นาที คอลัมน์มีอุณหภูมิคงที่ 60 ° C ในสารละลาย ( eluate ) ถูกตรวจพบโดยเครื่องตรวจจับดรรชนีหักเห ( แสงฟิสิกส์ 6040 9000 รีเครื่อง )

ผลผลิตเอนไซม์คำนวณได้ดังนี้

ไฮโดรไลซิส ( % ) = ผลผลิต ลด×น้ำตาล 09 × 100 / ไรด์สูง

อย่างน้อย 3 ขนาน กลุ่มตัวอย่างที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูลคือ ร้อยละ และนำเสนอเป็นค่าเฉลี่ยของทั้งสาม ได้แก่