2.7. Extraction and assay of defens

2.7. Extraction and assay of defense-related enzymes
One gram of frozen exocarp tissue was ground with various pre-cooled buffers (4 ◦C) using a FSH-2A homogenizer (Jiangsu Jintan Corp., Nanjing, China) to prepare extracts for assay of the following enzymes: 5 mL of 100 mM boric acid buffer (pH 8.8) containing 4% (w/v) polyvinylpyrrolidone (PVP), 1 mM ethylene diamine tetraacetic acid (EDTA) and 50 mM -mercaptoethanol for phenylalanine ammonia lyase (PAL, EC 4.3.1.5); 5 mL of 50 mM Tris–HCl buffer (pH 8.9) containing 15 mM -mercaptoethanol, 4 mM MgCl2, 5 mM ascorbate acid, 10 M leupeptin, 1 mM phenylmethanesulfonyl fluoride, 0.15% (w/v) PVP and 10% glycerin for cinnamate-hydroxylase (C4H, EC 1.14.13.11); 5 mL of 0.2 M Tris–HCl buffer (pH 8.0) containing 0.1 M DTT for 4-coumarate: CoA ligase (4CL, EC 6.2.1.12); 5 mL of 50 mM sodium phosphate buffer (pH 7.0) for peroxidase (POD, EC 1.11.1.7); 5 mL of 50 mM sodium acetate buffer (pH 5.2) containing 1 mM EDTA, 5 mM - mercaptoethanol and 5 mM ascorbic acid for -1,3-glucanase (GLU, EC 3.2.1.39) and chitinase (CHT, EC 3.2.1.14). The extracts were then centrifuged at 12,000 × g for 20 min at 4 ◦C. The supernatants were used for the enzyme assays.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.7 การสกัดและทดสอบเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องกับการป้องกัน หนึ่งกรัมของเนื้อเยื่อแช่แข็ง exocarp มีพื้นดินที่ มีต่าง ๆ ก่อนเย็น ๆ บัฟเฟอร์ (4 ◦C) ใช้ homogenizer FSH 2A (มณฑลเจียงซู Jintan Corp. นานกิง จีน) การเตรียมสารสกัดจากทดสอบเอนไซม์ต่อไปนี้: mL 5 มม. 100 กรด boric บัฟเฟอร์ (pH 8.8) มี 4% (w/v) polyvinylpyrrolidone (PVP), กรด tetraacetic diamine เอทิลีน 1 มม. (EDTA) และ 50 มม. - mercaptoethanol สำหรับ phenylalanine แอมโมเนีย lyase (PAL , EC 4.3.1.5); 5 mL ของทริสเรทติ้ง – HCl 50 มม.บัฟเฟอร์ (pH 8.9 นอก) มี 15 มม. - mercaptoethanol, 4 มม. MgCl2 กรด ascorbate มม. 5, 10 เมตร leupeptin ฟลูออไรด์ phenylmethanesulfonyl มม. 1 กลีเซอรีน PVP และ 10% 0.15% (w/v) สำหรับ cinnamate-hydroxylase (C4H, EC 1.14.13.11); 5 mL 0.2 M ตรี – HCl บัฟเฟอร์ (pH 8.0) ประกอบด้วย 0.1 M DTT สำหรับ 4 coumarate: ligase CoA (4CL, EC 6.2.1.12); 5 mL 50 mM โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) สำหรับ peroxidase (POD, EC 1.11.1.7); 5 mL ของ acetate โซเดียม 50 มม.มีบัฟเฟอร์ (pH 5.2) มี 1 mM EDTA, 5 มม. - mercaptoethanol และกรดแอสคอร์บิค 5 มม.สำหรับ - 1,3-คัด (GLU, EC 3.2.1.39) และ chitinase (CHT, EC 3.2.1.14) สารสกัดได้จากนั้น centrifuged ที่ 12000 × g สำหรับ 20 นาทีที่ 4 ◦C Supernatants ถูกใช้สำหรับ assays เอนไซม์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.7 การสกัดและการทดสอบของเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องกับการป้องกันตัวหนึ่งกรัม exocarp ถูกแช่แข็งพื้นดินที่มีบัฟเฟอร์ก่อนระบายความร้อนต่างๆ (4 ◦C) โดยใช้ homogenizer FSH-2A (มณฑลเจียงซู Jintan คอร์ปหนานจิงประเทศจีน) เพื่อเตรียมความพร้อมสำหรับการทดสอบสารสกัดของ ต่อไปนี้เอนไซม์: 5 มิลลิลิตร 100 มิลลิบัฟเฟอร์กรด (pH 8.8) ที่มี 4% (w / v) polyvinylpyrrolidone (PVP) 1 มิลลิ diamine เอทิลีนกรด tetraacetic (EDTA) และ 50 มิลลิ -mercaptoethanol แอมโมเนีย phenylalanine ไอเลส (PAL, EC 4.3.1.5);
5 มิลลิลิตร 50 มิลลิบัฟเฟอร์ Tris-HCl (pH 8.9) ที่มี 15 มิลลิ -mercaptoethanol 4 มิลลิ MgCl2 กรด 5 มิลลิ ascorbate, 10 M leupeptin 1 มิลลิฟลูออไร phenylmethanesulfonyl 0.15% (w / v) PVP และกลีเซอรี 10% cinnamate-hydroxylase (C4H, EC 1.14.13.11); 5 มิลลิลิตร 0.2 M บัฟเฟอร์ Tris-HCl (pH 8.0) ที่มี 0.1 M DTT สำหรับ 4 coumarate: ลิกาเซ CoA (4CL, EC 6.2.1.12); 5 มิลลิลิตร 50 มิลลิโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) สำหรับ peroxidase (POD, EC 1.11.1.7); 5 มิลลิลิตร 50 มิลลิโซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ (pH 5.2) ที่มี 1 มิลลิ EDTA 5 มิลลิ - mercaptoethanol และ 5 มิลลิวิตามินซีสำหรับ -1,3-glucanase (GLU, EC 3.2.1.39) และไคติเนส (CHT, EC 3.2.1.14 ) สารสกัดถูกปั่นแล้วที่ 12,000 ×กรัมเป็นเวลา 20 นาทีที่ 4 ◦C supernatants ถูกนำมาใช้สำหรับการตรวจเอนไซม์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.7 . การสกัดและวิเคราะห์ของการป้องกันที่เกี่ยวข้องกับเอนไซม์
หนึ่งกรัมเนื้อเยื่อโซคาร์ปแช่แข็งเป็นพื้นดินต่างๆก่อนลงบัฟเฟอร์ ( 4 ◦ C ) ใช้ fsh-2a โฮโมจิไนซ์ ( Jiangsu ยินตัน คอร์ป , หนานจิง , จีน ) เพื่อเตรียมสารสกัดจากเอนไซม์ที่ใช้ต่อไปนี้ : 5 มล. 100 mM กรดบอริกบัฟเฟอร์ ( พีเอช 8.8 ที่มี 4 % ( w / v ) พอลิวินิลไพร์โรลิโดน ( PVP )1 มิลลิเมตรเอทิลีนไดอะ tetraacetic acid ( EDTA ) และ 50 มม. - mercaptoethanol สำหรับฟีนีแอมโมเนีย lyase ( PAL , EC 4.3.1.5 ) ; 5 มิลลิลิตร ( 50 มม. โดยไฮโดรคลอไรด์บัฟเฟอร์ pH 8.9 ) ประกอบด้วย 15 มม. - mercaptoethanol ชุด , 4 มม. 5 มม. จากกรด , 10 M ลูเพปติน , ฟลูออไรด์ phenylmethanesulfonyl 0.15 % 1 มิลลิเมตร ( w / v ) PVP และกลีเซอรีน 10 % ซินนาเมต hydroxylase ( c4h EC 1.14.13.11 ) ; 5 ml ของ 02 M จากบัฟเฟอร์ pH 8.0 ( HCL ) ที่มีความเข้มข้น 0.1 M ส่วนสำหรับ 4-coumarate : COA ไลเกส ( 4cl EC 6.2.1.12 ) ; 5 ml 50 มิลลิเมตรโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 ) สำหรับ peroxidase ( ฝัก , EC 1.11.1.7 ) ; 5 ml 50 มิลลิเมตรโซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ pH 5.2 ) มี 1 mM EDTA , 5 มม. และ 5 มม. - mercaptoethanol วิตามินซีสำหรับ - 1 ( GLU , EC 3.2.1.39 ) และไคติเนส ( CHT EC 3.2.1.14 )สารสกัด ( 2 ) ระดับที่ 12 × G สำหรับ 20 นาทีที่ 4 ◦ C supernatants ถูกใช้เพื่อตรวจเอนไซม์ .