PCR was performed in 25 ml reaction

PCR was performed in 25 ml reaction volume containing 20 ng
of DNA template, 5 mM MgCl2, 1 mM dNTPs, 0.2 mM of each
primer, 2.5 ml 10X buffer and 1.5 U of Taq polymerase (Invitrogen
Life Technologies, Brazil) on GeneAmp1 PCR system 9700 (Applied
Biosystems). The PCR conditions were: initial denaturation at 94 8C
for 5 min followed by 35 cycles of denaturation (94 8C for 30 s),
annealing (57 8C for 30 s for primer set I and 54 8C for 30 s for
primer set II) and extension (72 8C for 30 s) with a final extension of
72 8C for 5 min followed by 4 8C hold. The amplified fragments
were visualized on 2% agarose gel using ethidium bromide stain
(0.5 mg/ml). The generated amplicons were cycle sequenced using
BigDye1 Terminator v3.1 cycle sequencing kit (Applied Biosystems,
Foster City, CA). DNA sequencing was performed on 3100
Avant Genetic Analyzer (Applied Biosystems).
Validation studies: The technique was validated with respect to
the following points.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทำ PCR ปริมาณปฏิกิริยา 25 ml ประกอบด้วย 20 ngของดีเอ็นเอต้นแบบ 5 มม. MgCl2, dNTPs มม. 1, 0.2 mM ของแต่ละรองพื้น 2.5 ml 10 X 1.5 U Taq พอลิเมอเรส (Invitrogen และบัฟเฟอร์เทคโนโลยีชีวิต บราซิล) ระบบ GeneAmp1 PCR 9700 (ประยุกต์Biosystems) เงื่อนไข PCR ได้: denaturation เริ่มต้นที่ 94 8Cสำหรับ 5 นาทีตาม ด้วยรอบ 35 ของ denaturation (8C 94 สำหรับ 30 s),การอบเหนียว (8C 57 สำหรับ 30 s สำหรับรองพื้นตั้งฉันและ 8C 54 สำหรับ 30 s สำหรับรองพื้นตั้ง II) และส่วนขยาย (8C 72 สำหรับ 30 s) ขยายสุดท้ายของ72 8C สำหรับ 5 นาทีตาม ด้วย 4 8C ค้างไว้ ชิ้นส่วนเอาต์มี visualized ในเจ 2% agarose ใช้คราบโบรไมด์ ethidium(0.5 mg/ml) Amplicons สร้างขึ้นถูกเรียงลำดับโดยใช้วงจรเทอร์มิเนเตอร์ BigDye1 v3.1 วงจรลำดับชุด (Biosystems ใช้ฟอสเตอร์เมือง CA) ลำดับดีเอ็นเอทำตาม 3100จัดการทางพันธุกรรมวิเคราะห์ (Biosystems ใช้)ตรวจสอบศึกษา: เทคนิคการถูกตรวจสอบด้วย respect เพื่อจุดต่อไปนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

PCR ได้ดำเนินการใน 25 มล. ปฏิกิริยาปริมาณที่มี 20
นาโนกรัมแม่แบบดีเอ็นเอ5 มิลลิ MgCl2 1 มิลลิ dNTPs 0.2
มิลลิของแต่ละไพรเมอร์2.5 มล. บัฟเฟอร์ 10X และ 1.5 U ของโพลิเมอร์ Taq (Invitrogen
เทคโนโลยีชีวิตบราซิล) ในระบบ GeneAmp1 PCR 9700 (Applied
Biosystems) เงื่อนไข PCR คือ denaturation เริ่มต้นที่ 94 8C
เป็นเวลา 5 นาทีตามด้วย 35 รอบของการสูญเสียสภาพธรรมชาติ (94 8C 30 s),
การอบ (57 8C 30 สำหรับชุดไพรเมอร์ผมและ 54 8C 30
สำหรับชุดไพรเมอร์ครั้งที่สอง) และ ส่วนขยาย (72 8C 30 s) ที่มีนามสกุลสุดท้ายของ
72 8C เป็นเวลา 5 นาทีตามด้วย 4 8C ถือ ชิ้นส่วนที่ขยายได้รับการมองเห็นเมื่อวันที่ 2% โดยใช้เจล agarose คราบ ethidium bromide (0.5 mg / ml) amplicons สร้างเป็นวงจรติดใจใช้BigDye1 Terminator ชุด v3.1 ลำดับวงจร (Applied Biosystems, ฟอสเตอร์ซิตี, แคลิฟอร์เนีย) ลำดับดีเอ็นเอที่ได้ดำเนินการใน 3100 Avant วิเคราะห์ทางพันธุกรรม (Applied Biosystems). การศึกษาการตรวจสอบ: เทคนิคที่ถูกตรวจสอบเกี่ยวกับการจุดต่อไปนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เทคนิคในการปฏิบัติ 25 มล. ปริมาตร 20 นาโน
ปฏิกิริยาที่มีแม่แบบดีเอ็นเอ ชุด 5 มิล 1 มิล dntps 0.2 มม. ของแต่ละ
รองพื้น บัฟเฟอร์ 10 x 2.5 มล. และ 1.5 U ของทัค พอลิเมอเรส ( Invitrogen
ชีวิตเทคโนโลยี บราซิล ) ในระบบ PCR geneamp1 9700 ( ประยุกต์
Biosystems ) เงื่อนไข : เริ่มต้นที่ 94 ( PCR ) 8C
5 นาที ตามด้วย 3 รอบ ( ( 94 8C 30 S )
การอบอ่อน ( 57 8C 30 สำหรับไพรเมอร์ชุด 54 8C 30 s
primer ชุดที่ 2 ) และนามสกุล ( 72 8C 30 S ) กับนามสกุลสุดท้าย
72 8C เป็นเวลา 5 นาทีตามด้วย 4 8C ถือ ที่เป็นชิ้นส่วนของภาพบนเจล ( 2
% ใช้คู่โบรไมด์คราบ
( 0.5 mg / ml ) สร้าง amplicons เป็นวงจรนี้ใช้
bigdye1 Terminator v3.1 รอบลำดับชุด ( Applied Biosystems
,ฟอสเตอร์ ซิตี้ , แคลิฟอร์เนีย ) การจัดลำดับดีเอ็นเอคือใช้ 3100
วิเคราะห์พันธุกรรม Avant ( Applied Biosystems ) .
ตรวจสอบการศึกษา : เทคนิคตรวจสอบด้วยความเคารพ
จุดต่อไปนี้