as possible further sample preparation by solid phase extraction (SPE)
was required. For this purpose Chromabond C18 polypropylene
columns (500 mg adsorbent, 6 mL, Macherey–Nagel GmbH & Co. KG)
were pre-conditioned with methanol (6 mL) and equilibrated with
ddH2O (6 mL). The sample (5 mL) was slowly passed through the
column, whereby the saponins are retained by the adsorbent. The
cartridge was washed with a mixture of ddH2O and methanol (95:5,
v/v, 3 mL). The purification and fractionation of saponins was carried
out in five steps (fractions I–V, 3 mL) with a methanol–water gradient
with an alkaline pH by adding 17% ammonia solution. The different
fractions collected were evaporated under a stream of nitrogen and
brought to a defined volume depending on the saponin concentration
in each fraction and the type of sample (hulls or peeled seeds). Dissolving
the sample residues was performed with the corresponding eluent
as previously used for the SPE. In this regard, fractions I, II, and III
extracted from hulls were dissolved in 0.5 mL whereas fractions IV and
V were dissolved in 0.2 mL. In contrast, the first three fractions from the
peeled peas were resolved in 0.25 mL and the last two in 0.125 mL eluent,
respectively. In accordance with preliminary investigations only fractions
II, III, and IV contained the DDMP saponin and the saponin B
ที่สุดต่อการเตรียมตัวอย่างโดยการสกัดด้วยเฟสของแข็ง ( SPE )
ถูกต้อง สำหรับวัตถุประสงค์นี้ chromabond c18 Polypropylene
คอลัมน์ ( 500 มิลลิกรัม ตัวดูดซับ macherey –นาเกล GmbH & . กก. 6 ml )
) ก่อนปรับอากาศที่มีเมทานอล ( 6 กรัม ) และ equilibrated ด้วย
ddh2o ( 5 ml ) ตัวอย่าง ( 5 ml ) เป็นอย่างช้า ๆผ่าน
คอลัมน์ ซึ่งซาโปนินจะถูกเก็บไว้โดยตัวดูดซับ
ตลับหมึกได้รับการล้างด้วยส่วนผสมของ ddh2o และเมทานอล ( 95:5
, v / v , 3 ml ) การทำให้บริสุทธิ์และองค์ประกอบของซาโปนินได้ด
ออกมาใน 5 ขั้นตอน ( สำหรับผม ) V , 3 ml ) กับเมทานอลและน้ำลาด
ที่มีความเป็นกรดด่างโดยการเติมสารละลายแอมโมเนีย 17 % ความแตกต่าง
เศษส่วนแบบสอบถามระเหยภายใต้กระแสของไนโตรเจนและ
ทำให้กำหนดปริมาณขึ้นอยู่กับความเข้มข้นของซาโปนิน
ในแต่ละส่วน และชนิดของตัวอย่าง ( เปลือกหรือเมล็ดปอกเปลือก ) ละลาย
ตัวอย่างตกค้างได้ กับตัวที่เป็นก่อนหน้านี้
ใช้สำหรับเอสพีอี . ในเรื่องนี้ ส่วน I , II และ III
สกัดจากเปลือกถูกละลายใน 0.5 ml ในขณะที่เศษส่วน IV และ V
ถูกละลายใน 0.2 มิลลิลิตร ในทางตรงกันข้ามสามตัวแรกเศษส่วนจาก
ปอกเปลือกถั่วถูกแก้ไขใน 0.25 ml และสองคนสุดท้ายที่ 0.125 มล. ตัว
, ตามลำดับ สอดคล้องกับการสอบสวนเพียงเศษส่วน
II , III และ IV ซึ่งเบื้องต้นมี ddmp ซาโปนิน saponin B และ
การแปล กรุณารอสักครู่..
