Real-time detection was performed using a Realtime turbidimeter
LA-500 to measure the turbidity of the samples
during the reaction. The threshold time (Tt, min) is
recorded as the time when the measurement calculated by moving average differentiation of the turbidity exceeds the
threshold (0.1) according to manufacturer’s instructions.
Detection by gel electrophoresis was performed using an
aliquot (3 lL) of the LAMP products separated on a 2 %
agarose gel in 1X TBE buffer at 120 V and 400 mA for
40 min and then stained with the SYBR Green I (Invitrogen
TM, Paisley, UK). The gel image was then photographed
under UV transillumination (Syngene GBox,
MD, USA) using Genesnap from Syngene image acquisition
software (Vision-Capt version 14.2).
Fluorescence detection was performed using 1 lL calcein
(Eiken Chemical Co., Ltd., Tochigi, Japan) added to
the RT-LAMP preparations following the recommendation
of the manufacturer. The working concentration of calcein
in the LAMP reaction is approximately 2 mM. Fluorescence
could be observed by the naked eye using a handheld-
UV lamp (wavelength 365 nm).
ตรวจสอบเวลาจริงได้รับการดำเนินการโดยใช้เครื่องวัดความขุ่นเรียลไทม์
LA-500 ในการวัดความขุ่นของกลุ่มตัวอย่าง
ในระหว่างการเกิดปฏิกิริยา เวลาเกณฑ์ (TT, นาที) มีการ
บันทึกเป็นช่วงเวลาที่การวัดคำนวณโดยการย้ายความแตกต่างของค่าเฉลี่ยของความขุ่นเกินกว่าที่
เกณฑ์ (0.1) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต.
การตรวจสอบจากข่าวคราวที่ได้ดำเนินการโดยใช้
หาร (3 LL) ของ ผลิตภัณฑ์โคมไฟแยกจากกันบน 2%
เจล agarose ใน 1X TBE บัฟเฟอร์ที่ 120 V และ 400 มิลลิแอมป์สำหรับ
40 นาทีแล้วย้อมด้วย SYBR หรือไม่ กรีน I (Invitrogen
TM ลายสหราชอาณาจักร) ภาพที่ถูกถ่ายภาพเจลแล้ว
ภายใต้ transillumination UV (Syngene? GBox,
MD, USA) โดยใช้ Genesnap? จาก Syngene? การควบรวมภาพ
ซอฟแวร์ (วิสัยทัศน์ Capt รุ่น 14.2).
ตรวจสอบการเรืองแสงได้รับการดำเนินการโดยใช้ 1 LL calcein
(Eiken Chemical Co. , Ltd, โทจิกิ, ญี่ปุ่น) เพิ่มให้กับ
การเตรียม RT-โคมไฟดังต่อไปนี้ข้อเสนอแนะ
ของผู้ผลิต ความเข้มข้นในการทำงานของ calcein
ในปฏิกิริยาโคมไฟจะอยู่ที่ประมาณ 2 mm เรืองแสง
อาจจะสังเกตเห็นได้ด้วยตาเปล่าโดยใช้ handheld-
หลอด UV (ความยาวคลื่น 365 นาโนเมตร)
การแปล กรุณารอสักครู่..
