3. Results3.1. Water samples3.1.1.

3. Results
3.1. Water samples
3.1.1. Detection of ISA virus RNA in water containing decomposing ISA positive fish
ISA virus RNA could be detected by real-time RT-PCR in all water samples taken from the glass containers with fish F1, F2, F4, F5, F8, F9 and F10 throughout the experiment (

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3 ผล
3.1 ตัวอย่างน้ำ
3.1.1 การตรวจสอบของอาร์เอ็นเอไวรัส ISA ในน้ำที่มีปลาเน่าเฟะ ISA บวก
ไวรัส RNA ISA สามารถตรวจพบโดยเรียลไทม์ RT-PCR ในตัวอย่างน้ำทั้งหมดนำมาจากบรรจุภัณฑ์แก้วด้วย f1 ปลา f2, f4, f5, f8 f9 และ f10 ตลอดการทดลอง (<96/120 ชั่วโมง) ดูมะเดื่อ 1 และ 2ตัวอย่างน้ำจากปลาในภาชนะที่มี f6 ไม่ได้บวกที่จุดใดก็ได้ในขณะที่แนวโน้มที่มีต่อการเพิ่มขึ้นของภาระ RNA ที่สำคัญอาจจะเห็นในน้ำที่เก็บมาจาก f3 จาก 48 ชั่วโมงเป็นต้นไป ตัวอย่างน้ำจาก f7 เป็นเพียงไวรัสบวกจาก 48 ชั่วโมงเป็นต้นไป ISA
ไวรัส ISA ระดับอาร์เอ็นเอที่สูงที่สุดในตัวอย่างน้ำสามารถตรวจพบในน้ำจากภาชนะที่มีปลาสอง (f1 และ f2) ที่เสียชีวิตจากไอซาก่อนที่จะเริ่มต้นขึ้นจากการทดลองการสลายตัว (รูปที่ 1)
3.2 การตรวจสอบของอาร์เอ็นเอไวรัส ISA ในเหงือกและเนื้อเยื่อในหัวใจของการย่อยสลาย ISA ปลาบวก
เหงือกทำการเก็บตัวอย่างปลาก่อนที่จะถูกทิ้งไว้ในการย่อยสลายในขณะที่เนื้อเยื่อหัวใจเป็นตัวอย่างเมื่อสิ้นสุดการทดลองจากปลาทั้งหมด (f1-f10) ตัวอย่างที่ถูกประมวลผลเวลาจริงการวิเคราะห์ RT-PCR และตรวจสอบสำหรับการแสดงของไวรัส ISA ที่ได้รับไวรัส ISA กะรัตค่าแสดงเป็นค่าปกติการแสดงออกกับการควบคุมจากภายนอก (sav) ในรูปที่ 3ปลาสองตัว (f1 และ f2) ที่เสียชีวิตจาก ISA มีระดับสูงสุดของอาร์เอ็นเอไวรัส ISA เมื่อเทียบกับส่วนที่เหลือของปลา ระดับของไวรัส ISA ในเหงือกและหัวใจมีความสัมพันธ์กับระดับการปล่อยลงไปในน้ำ (ดูรูปที่ 1. และ 2) เป็นตัวอย่างน้ำสูงสุดโหลดอาร์เอ็นเอไวรัสที่ถูกพรากไปจากภาชนะที่มีปลาที่เสียชีวิตจากการติดเชื้อไวรัสอิ
. 3.3การติดเชื้อไวรัสของตัวอย่างน้ำในระหว่างกระบวนการย่อยสลาย
3.3.1 การเพาะเลี้ยงเซลล์
น้ำจากภาชนะแก้วที่มีการย่อยสลายไวรัส ISA ปลาที่ติดเชื้อถูกกรองผ่านตัวกรอง 1 electropositive MDS ตัวอย่างน้ำทั้งหมดจากทุกจุดเวลาของการสุ่มตัวอย่าง (t0, t1, T3, t6, T24,T48 และ t96/20) ที่ได้รับเชื้อไปถามเซลล์ที่ล้มเหลวในการผลิต cpe ใด ๆ หลังจากที่เดิน 3 แสดงให้เห็นว่าไม่มีไวรัส ISA ปัจจุบัน (แม้ว่าการควบคุมเชิงบวกให้ cpe)

3.3.2 ปลาท้าทายกับกรองตัวอย่างน้ำชะ
เพื่อตรวจสอบการแสดงศักยภาพของการติดเชื้อไวรัสในน้ำตัวอย่างจาก f1, f2, f3,f4 f8 และถูกเลือกให้เป็นที่พวกเขามีจำนวนเงินสูงสุดของ ISAv
อาร์เอ็นเอ (รูปที่ 1 และ 2) ปลา (n = 150) เป็น i.p. ฉีดกรองชะตัวอย่างน้ำจากทุกจุดเวลาชันสูตร (ดูตาราง 1) แต่มันเป็นไปไม่ได้ที่จะแสดงให้เห็นถึงการปรากฏตัวของอาร์เอ็นเอ ISAv ใด ๆ ในหัวใจหรือเหงือกเนื้อเยื่อตัวอย่างจากปลาท้าทายเหล่านี้ในทั้ง 7 หรือ 14 dpiตัวอย่างการใช้เรียลไทม์ RT-PCR.
3.3.3 ifat ถามของเซลล์เชื้อไวรัส ISA ย่อยสลายหัวใจปลาแซลมอนบวกเนื้อเยื่อ
เนื้อเยื่อหัวใจจากปลาทั้งหมด (f1-f10) ที่ถูกทิ้งไว้ในการย่อยสลายได้เมื่อสิ้นสุดการทดลองเชื้อเพื่อขอเซลล์และตรวจสอบการใช้ ifat เนื้อเยื่อหัวใจจาก f1 f2 และ f4 พบว่ามีไวรัส ISA บวกโดย ifat,แต่เนื้อเยื่อหัวใจจากปลาทั้งหมดที่เหลือในการย่อยสลายที่ 18 º C ถูกลบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3. ผลลัพธ์
3.1 น้ำตัวอย่าง
3.1.1 ตรวจจับไวรัส ISA อาร์เอ็นเอในน้ำประกอบด้วยปลาบวก ISA decomposing
ISA ไวรัสอาร์เอ็นเอสามารถตรวจพบ โดย RT-PCR แบบเรียลไทม์ในตัวอย่างน้ำทั้งหมดที่นำมาจากภาชนะแก้วปลา F1, F2, F4, F5, F8, F9 และ F10 ทดลอง (< h 96/120), ดู Figs. 1 และ 2 ได้ ตัวอย่างน้ำจากปลาในภาชนะกับ F6 ไม่บวกตลอดเวลา ในขณะที่แนวโน้มต่อการเพิ่มขึ้นของโหลดอาร์เอ็นเอสำคัญสามารถเห็นได้ในน้ำที่รวบรวมจาก F3 จาก h 48 เป็นต้นไป ตัวอย่างน้ำจาก F7 ดีเท่า ISA ไวรัสบวกจาก h 48 เป็นต้นไป
พบสูงสุดซ่าไวรัสระดับอาร์เอ็นเอในตัวอย่างน้ำในน้ำบรรจุภัณฑ์กับปลาสอง (F1 และ F2) ที่เสียชีวิตจาก ISA ก่อนเริ่มทดลองแยกส่วนประกอบ (Fig. 1)
3.2 ของ ISA ไวรัสอาร์เอ็นเอ ใน gills และ ในเนื้อเยื่อหัวใจของพืชพันธุ์ ISA ค่าบวกปลา
Gills ได้ความก่อนปลาถูกปล่อยให้เปื่อยในขณะที่เนื้อเยื่อหัวใจมีความจบทดลองจากปลาทั้งหมด (F1-F10) ตัวอย่างถูกประมวลผลแบบเรียลไทม์ RT-PCR วิเคราะห์ และตรวจสอบสำหรับสถานะของไวรัส ISA ไวรัส ISA ได้รับ Ct ค่าจะแสดงเป็นค่านิพจน์มาตรฐานกับควบคุมการบ่อย (SAV) ใน Fig.3 ปลาสอง (F1 และ F2) ที่ตายของ ISA ISA ไวรัสอาร์เอ็นเอเปรียบเทียบกับส่วนเหลือของปลาในระดับสูงสุดได้ ระดับของไวรัสใน ISA gills และหัวใจที่เชื่อมโยงกับระดับปล่อยน้ำ (ดู Fig. 1 และ 2), เป็นตัวอย่างน้ำที่ มีโหลดอาร์เอ็นเอไวรัสสูงสุดที่ได้มาจากเก็บปลาที่ตายของเชื้อไวรัส ISA.
3.3 ไวรัส infectivity น้ำตัวอย่างในระหว่างกระบวนการแยกส่วนประกอบ
3.3.1 เซลล์วัฒนธรรม
น้ำจากภาชนะแก้วกับพืชพันธุ์ปลาที่ติดเชื้อไวรัส ISA ถูกกรองผ่านตัวกรองติด 1 electropositive ตัวอย่างน้ำทั้งหมดจากการสุ่มตัวอย่างทั้งหมดเวลาจุด (T0, T1, T3, T6, T24 T48 และ T96/20) ที่ได้ inoculated ไปถามเซลล์ไม่สามารถผลิต CPE ใด ๆ หลังจากทางเดินที่ 3 บ่งชี้ว่า ไวรัส ISA ไม่มี (แม้ว่าตัวควบคุมบวกให้ CPE)

3.3.2 ปลาที่ท้าทายกับกรอง eluted ตัวอย่างน้ำ
ต่อไป ตรวจสอบก็อาจติดเชื้อไวรัสในน้ำ ตัวอย่างจาก F1, F2, F3 ที่ F4 และ F8 ถูกเลือกจะมีจำนวนสูงสุดของ ISAV
กิน 1 และ 2) อาร์เอ็นเอ ปลา (n = 150) มี i.p. ฉีดกับกรอง eluted น้ำตัวอย่างจากจุดเวลา mortem ไปรษณีย์ (ดูตารางที่ 1) อย่างไรก็ตาม ไม่สามารถแสดงให้เห็นถึงสถานะของอาร์เอ็นเอ ISAV ใด ๆ ใน หรือ gill เนื้อเยื่อตัวอย่างจากปลาเหล่านี้สนุก ๆ ใน 7 หรือ 14 d.p.i. ตัวอย่างการใช้จริง RT-PCR
3.3.3 IFAT inoculated กับเซลล์ถามแยกเนื้อเยื่อหัวใจบวกแซลมอนไวรัส ISA
เนื้อเยื่อหัวใจจากปลาทั้งหมด (F1-F10) ที่ถูกปล่อยให้เปื่อยถูกที่สุดทดลอง inoculated ไปถามเซลล์ และตรวจสอบการใช้ IFAT เนื้อเยื่อหัวใจจาก F1, F2 และ F4 พบจะ บวกไวรัส ISA โดย IFAT แต่เนื้อเยื่อหัวใจจากทั้งหมดปลาซ้ายเปื่อยที่ 18 ºC มีค่าลบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3 . ผลการค้นหา
3.1 . น้ำตัวอย่าง
3.1.1 . การตรวจจับ, ISA , rna ไวรัสในน้ำที่มีปฎิบัติ ISA บวกปลา
ISA rna ไวรัสจะถูกตรวจพบโดยแบบ real - time Rt - pcr ในน้ำตัวอย่างจากกระจกตู้คอนเทนเนอร์พร้อมด้วยปลา F 1 , F 2 , f4 , F 5 , F 8 f 9 F 10 ตลอดทั่วทั้งพื้นที่และการทดสอบ(< 96/120 h ),ดูมะเดื่อ. 1 และ 2 .ตัวอย่างน้ำจากปลาในคอนเทนเนอร์ด้วย F 6 เป็นบวกไม่ได้ที่จุดเวลาใดๆในขณะที่แนวโน้มที่เพิ่มขึ้นในการโหลด rna สำคัญที่จะเห็นได้ในน้ำเก็บรวบรวมจาก F 3 จาก 48 ชั่วโมงเป็นต้นไป ตัวอย่างน้ำจาก F 7 เป็นเพียงไวรัส ISA ในเชิงบวกจาก 48 ชั่วโมงเป็นต้นไป
ISA rna ไวรัสระดับสูงสุดในตัวอย่างน้ำไม่สามารถถูกตรวจพบในน้ำจาก ภาชนะ พร้อมด้วยสองปลา( F 1 และ F 2 )ที่ได้เสียชีวิตลงจาก ISA ก่อนที่จะเริ่มต้นการทำงานของการทดลองแยกออกเป็นส่วนๆ(รูปที่ 1 )
3.2 . การตรวจจับไวรัส ISA rna ในหน้าซีดและอยู่ในเนื้อเยื่อบริเวณใจกลางของปลาปฎิบัติในเชิงบวก ISA
หน้าซีดเป็นตัวอย่างก่อนปลาที่ยังเหลืออยู่แยกออกเป็นส่วนๆในขณะที่เนื้อเยื่อบริเวณใจกลางเป็นตัวอย่างที่สิ้นสุดการทดลองจากปลาทั้งหมด( F 1 - F 10 ) ตัวอย่างที่ได้ดำเนินการสำหรับการวิเคราะห์ Rt - pcr แบบเรียลไทม์และตรวจสอบสำหรับการมีอยู่ของไวรัส ISA ได้รับไวรัส, ISA , CT - ค่าที่จะแสดงเป็นค่าปรับให้สอดคล้องกับการแสดงออกการควบคุม exogenous ( sav )ในรูปที่ 3สองปลา( F 1 และ F 2 )ที่เสียชีวิตของ ISA มีระดับสูงสุดของ ISA rna ไวรัสเมื่อเทียบกับส่วนที่เหลือของปลา ระดับของไวรัส ISA ในใจกลางและหน้าซีดสัมพันธ์กับระดับที่ออกไปในน้ำที่มีอยู่(ดูรูปที่ 1 และ 2 )เป็นตัวอย่างน้ำที่มีร่องรอยของไวรัส rna โหลดสูงสุดได้ถูกนำตัวมาจากคอนเทนเนอร์พร้อมด้วยปลาที่ตายด้วยของการติดไวรัส ISA .
3.3 .infectivity ไวรัสของตัวอย่างน้ำในระหว่างกระบวนการแยกออกเป็นส่วนๆที่
3.3.1 . คอนเทนเนอร์เซลล์วัฒนธรรม
น้ำจากแก้วมีไวรัส, ISA ,ปฎิบัติที่ติดปลาเป็นที่กรองแล้วส่งข้อมูลจากระบบ MDS ผ่าน 1 แผ่นกรอง electropositive ตัวอย่างน้ำทั้งหมดออกจากจุดเวลาการสุ่มตัวอย่างทั้งหมด( T 0 t 1 T 3 T 6 T 24T 48 และ T 96/20 )ที่ inoculated เพื่อขอให้ - เซลล์ล้มเหลวในการผลิต - CPE ใดๆที่ทำขึ้นหลังจาก 3 ทางเดินเพื่อแสดงให้ทราบว่าไม่มีไวรัส, ISA ,ได้รับการนำเสนอ(แม้ว่าจะควบคุมในเชิงบวกที่ทำให้ - CPE )

3.3.2 . ปลาเผชิญกับ eluted ตัวอย่างน้ำที่กรองแล้ว
ตามมาตรฐานในการตรวจสอบการมีอยู่ ศักยภาพ ของไวรัสการติดเชื้อในน้ำที่เพิ่มเติมตัวอย่างจาก F 1 F 2 F 3F 4 และ F 8 ได้รับเลือกก็มีอยู่จำนวนมากที่สุดของ isav
rna (รูปที่ 1 และ 2 ) ปลา( N = 150 )เป็น i.p. ฉีดด้วยตัวอย่างน้ำ eluted ถูกกรองออกไปจากจุดตายทุกครั้งหลัง(ดูตารางที่ 1 ) แต่ถึงอย่างไรก็ตามยังเป็นเรื่องที่เป็นไปได้ไม่ได้เพื่อแสดงให้เห็นถึงการมีอยู่ของ isav rna ใดๆในเนื้อเยื่อเหงือกปลาหรือใจกลางสุ่มตัวอย่างจากปลาท้าทายเหล่านี้ใน 7 หรือ 14 d.p.i.ตัวอย่างการใช้แบบ real - time Rt - pcr .
3.3.3 . Analytica ซึ่งสะดวกสบายต่อการถาม - เซลล์ inoculated ด้วยเน่าปลาแซลมอน, ISA ,ไวรัสในเชิงบวกใจเนื้อเยื่อ
ใจกลางเนื้อเยื่อจากทั้งหมดปลา( F 1 - F 10 )ที่เหลืออยู่ในการแยกเป็นในช่วงปลายของการทดลอง inoculated ในเซลล์เพื่อสอบถามและตรวจสอบการใช้ Analytica ซึ่งสะดวกสบายต่อ. เนื้อเยื่อบริเวณใจกลางจาก F 1 F 2 F 4 และพบว่ามีไวรัส, ISA ,ในเชิงบวกโดย Analytica ซึ่งสะดวกสบายต่อแต่เนื้อเยื่อบริเวณใจกลางจากปลาทั้งหมดทางด้านซ้ายเพื่อแยกออกเป็นส่วนๆใน C 18 ºC ติดลบ