Figure 1 e Sensitivity of the KRAS

Figure 1 e Sensitivity of the KRAS multiplex assay by droplet digital PCR. A. Protocol. DNA was extracted from 100 PANC1 cells bearing a
heterozygous mutation c.35G > A in KRAS codon 12 (Gly12Asp) and 100 MCF7 cell lines (wild-type for KRAS codon 12e13). After whole
genome amplification, DNA from the two cell lines was mixed and droplet digital PCR was performed using a multiplex KRAS assay. B. KRAS
screening assay. This TaqMan assay is designed to detect the seven most frequent mutations in codon 12 and codon 13 of KRAS. C. Experimental
validation. 1D-Dot plot. The blue histogram indicates the number of droplets considered as positive for mutant KRAS according to the
fluorescence threshold. The green histogram corresponds to the number of wild-type droplets. Mutant control, DNA containing a 1:1 mix of
mutant and wildtype KRAS. WT control, DNA containing only KRAS wild-type. Blank, water. D. Mutant ratio threshold determination (mutant
copies/total copies in %) according to theoretical mutant ratio obtained by serial dilution. The red line indicates the detection threshold.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

รูปที่ 1 e ความไวของการทดสอบมัลติเพล็กซ์คราสโดยหยด PCR ดิจิตอล A. โพรโทคอล ดีเอ็นเอที่ถูกแยกจากเซลล์ PANC1 100 แบริ่งแบบc.35G heterozygous กลายพันธุ์ > A ในรหัสพันธุกรรม 12 (Gly12Asp) และ 100 MCF7 คราสเซลล์เส้น (ป่าชนิดสำหรับคราส 12e13 รหัสพันธุกรรม) หลังจากทั้งหมดขยายกลุ่ม ดีเอ็นเอจากเซลล์สองเส้นถูกผสม และ assay หยดทำ PCR ดิจิตอลใช้คราสการมัลติเพล็กซ์ ข.คราสตรวจวิเคราะห์ ทดสอบ TaqMan นี้ถูกออกแบบมาเพื่อตรวจหาการกลายพันธุ์ที่พบบ่อยที่สุดเจ็ดในรหัสพันธุกรรม 12 และ 13 รหัสพันธุกรรมของคราส ค.ทดลองการตรวจสอบ พล็อตจุด 1D กราฟสีฟ้าบ่งชี้ว่า จำนวนหยดที่ถือว่าเป็นบวกสำหรับ mutant คราสตามขีดจำกัดการเรืองแสง กราฟสีเขียวตรงกับหมายเลขของป่าชนิดหยด ควบคุมกลายพันธุ์ ดีเอ็นเอที่ประกอบด้วยส่วนผสม 1:1 ของกลายพันธุ์และ wildtype คราส ควบคุมน้ำหนัก ดีเอ็นเอที่ประกอบด้วยเฉพาะคราสป่าชนิด น้ำเปล่า D. กำหนดเกณฑ์อัตราส่วนกลายพันธุ์ (mutantชุด/รวมทั้งหมดสำเนา%) ตามทฤษฎีอัตราการกลายพันธุ์ได้ โดยการเจือจางอนุกรม เส้นสีแดงบ่งชี้ขีดจำกัดการตรวจจับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

รูปที่ 1 E ไวของการทดสอบ multiplex PCR โดย KRAS ดิจิตอลหยด A. พิธีสาร ดีเอ็นเอที่สกัดจากเซลล์ 100 PANC1 แบก
กลายพันธุ์ c.35G> เอ heterozygous ใน KRAS codon 12 (Gly12Asp) และ 100 เซลล์ MCF7 (ป่าชนิด KRAS codon 12e13) หลังจากที่ทั้ง
ขยายจีโนมดีเอ็นเอจากทั้งสองสายพันธุ์เซลล์เป็นหยดผสมและดิจิตอล PCR ได้ดำเนินการโดยใช้การทดสอบ KRAS multiplex บี KRAS
การตรวจคัดกรองการทดสอบ ทดสอบ TaqMan นี้ถูกออกแบบมาเพื่อตรวจจับเจ็ดการกลายพันธุ์ที่พบบ่อยที่สุดใน codon 12 และ codon 13 KRAS C. การทดลอง
การตรวจสอบ พล็อต 1D จุด ค่าแสงสีฟ้าแสดงถึงจำนวนของหยดถือว่าเป็นบวกสำหรับ KRAS กลายพันธุ์ให้เป็นไปตาม
เกณฑ์การเรืองแสง ค่าแสงสีเขียวสอดคล้องกับจำนวนของชนิดป่าหยด การควบคุมการกลายพันธุ์ของดีเอ็นเอที่มี 1: 1 ผสมของ
มนุษย์กลายพันธุ์และ wildtype KRAS ควบคุม WT ดีเอ็นเอที่มีเพียง KRAS ชนิดป่า ว่างเปล่าน้ำ D. Mutant การกำหนดอัตราส่วนเกณฑ์ (กลายพันธุ์
สำเนา / สำเนารวมใน%) ตามอัตราการกลายพันธุ์ทฤษฎีที่ได้รับจากการเจือจางอนุกรม เส้นสีแดงแสดงเกณฑ์การตรวจสอบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

รูปที่ 1 และความไวของการทดสอบ โดยหยดดิจิตอล kras multiplex PCR 1 . โปรโตคอล ดีเอ็นเอจากเซลล์ เป็น 100 panc1 แบริ่งการสร้าง c.35g > ใน kras codon 12 ( gly12asp ) และ 100 mcf7 เซลล์ ( ยาสำหรับ kras codon 12e13 ) หลังจากทั้งหมดจีโนม ( DNA จากเซลล์ 2 เส้น ก็ผสมและหยดดิจิตอลการใช้วิธี multiplex PCR kras . kras Bการคัดกรองแบคทีเรีย นี้ taqman ) ถูกออกแบบมาเพื่อตรวจจับเจ็ดที่พบบ่อยที่สุดในรหัสพันธุกรรมการกลายพันธุ์ 12 และ 13 ของ codon kras . C . ทดลองการตรวจสอบ 1D จุดพล็อต ส่วนสีฟ้าที่ระบุหมายเลขของหยดถือว่าเป็นบวกสำหรับ kras กลายพันธุ์ ไปตามโดยเริ่มจาก ส่วนสีเขียว สอดคล้องกับจำนวนของอนุภาค การควบคุมที่กลายพันธุ์ดีเอ็นเอที่มีอัตราส่วนผสมของกลายพันธุ์ และ wildtype kras . ควบคุมน้ำหนัก , ดีเอ็นเอที่มีเพียง kras ของ . ว่าง , น้ำ เกณฑ์การกำหนดอัตราส่วน D . กลายพันธุ์ ( กลายพันธุ์ฉบับรวมเล่ม % ) ตามอัตราส่วนที่ได้จากทฤษฎีกลายพันธุ์ซีเรียลเจือจาง เส้นสีแดงแสดงการตรวจสอบเกณฑ์