The double IRES cassette system was

The double IRES cassette system was used to examine suppression of RNA silencing mediated by siRNAs. Constructs were generated that contained one Venus gene at the 5′ end followed by one or two IRES cassettes with the p19 gene, a Tombusvirus suppressor of RNA silencing (VIp19 and V2Ip19) (Figure 1B). The dsVenus construct was made enabling transcription of doublestranded RNAs from a 256nt Venus sequence to induce RNA silencing of Venus, allowing us to examine whether IRES-mediated p19 protein protects its own mRNA
(VIp19 or V2Ip19) from Venus siRNAs. Controls for VIp19 and V2Ip19 were generated by replacing the start codon (ATG) of the p19 gene with a TTG codon to depress p19 translation (VI⊿p19 and V2I⊿p19). As a result of this modification, the longer V2Ip19 and V2I⊿p19 mRNAs were accumulated at lower amounts than the shorter VIp19 and VI⊿p19 mRNAs (Figure 3A). Western blot analysis of these constructs in the Nicotiana
benthamiana transient expression assay indicated that the amount of p19 protein from V2Ip19 was much higher than that from VIp19.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ระบบเทป IRES คู่ถูกนำมาใช้ในการตรวจสอบการปราบปรามของอาร์เอ็นเอ silencing ไกล่เกลี่ยโดย siRNAs โครงสร้างถูกสร้างขึ้นที่มียีนศุกร์ที่ปลาย 5 'ตามด้วยหนึ่งหรือสองเทป IRES กับยีน p19 การต้าน Tombusvirus ของสมรอาร์เอ็นเอ (VIp19 และ V2Ip19) (รูปที่ 1B) สร้าง dsVenus ถูกสร้างขึ้นมาช่วยให้การถอดความจาก RNAs doublestranded จาก 256nt วีนัสลำดับที่จะทำให้เกิดสมรอาร์เอ็นเอของวีนัสทำให้เราสามารถตรวจสอบว่าโปรตีน p19 IRES พึ่งปกป้อง mRNA ของตัวเอง
(VIp19 หรือ V2Ip19) มาจากดาวศุกร์ siRNAs สำหรับการควบคุมและ VIp19 V2Ip19 ถูกสร้างขึ้นโดยการเปลี่ยน codon เริ่มต้น (ATG) ของยีน p19 กับ codon TTG กดดันแปล P19 (VI⊿p19และV2I⊿p19) อันเป็นผลมาจากการปรับเปลี่ยนนี้อีกต่อไปและ V2Ip19 V2I⊿p19 mRNAs สะสมในปริมาณที่ต่ำกว่า VIp19 สั้นและVI⊿p19 mRNAs (รูปที่ 3A) การวิเคราะห์ดวงตะวันของโครงสร้างเหล่านี้ใน Nicotiana
ทดสอบการแสดงออก benthamiana ชั่วคราวชี้ให้เห็นว่าปริมาณของโปรตีน p19 จาก V2Ip19 สูงกว่าจาก VIp19

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สอง IRES เทประบบถูกใช้เพื่อตรวจสอบการปราบปรามของ RNA silencing ) โดย sirnas . ที่สร้างขึ้นมีดาวศุกร์ยีนที่ 5 นั้นจบลงตามด้วยหนึ่งหรือสอง IRES เทปกับ p19 ยีน , เครื่องห้าม tombusvirus ของอาร์เอ็นเอ ( vip19 ปิดปาก และ v2ip19 ) ( รูปที่ 1A )การ dsvenus สร้างขึ้นให้ถอดของ doublestranded RNAs จาก 256nt ดาวศุกร์ลำดับทำให้ RNA ของดาวศุกร์สามารถช่วยให้เราเพื่อตรวจสอบว่าระดับโปรตีน p19 IRES ปกป้อง
การแสดงออกของตัวเอง ( vip19 หรือ v2ip19 ) จาก sirnas ดาวศุกร์และการควบคุม vip19 v2ip19 ถูกสร้างขึ้นโดยการเปลี่ยนรหัสพันธุกรรมเริ่มต้น ( ATG ) ของ p19 ยีนกับทีทีจีโคดอนที่จะกดแปล p19 ( 6 ⊿ p19 วีทูไอ⊿และ p19 ) ผลของการเปลี่ยนแปลงนี้ และอีก v2ip19 วีทูไอ⊿ p19 รหัสสะสมในปริมาณที่น้อยกว่าที่สั้นกว่า vip19 และ 6 ⊿ p19 รหัส ( รูปที่ 3 ) การวิเคราะห์ Western blot ของโครงสร้างเหล่านี้ในขนะ
benthamiana การแสดงออก assay พบว่ามีปริมาณของโปรตีนจาก v2ip19 p19 สูงกว่าที่ได้จาก vip19 .