Extraction and Isolation. The air-d

Extraction and Isolation.

The air-dried leaves and stems of O.rigidum were ground in a Wiley mill.

A sample (70 g) of the dried, ground plant was extracted with a 1:1 mixture of CH2Cl2/MeOH overnight.

The extraction solvent was decanted from the plant material, which was then extracted with MeOH for 12 h.

The MeOH extract was combined with the CH2Cl2/MeOH, and the solvents were removed at reduced pressure (8 g).

A sample (1.16 g) of the crude organic extract was dissolved in 1:1 CH2Cl2/MeOH and placed on an LH-20 column (50 cm × 2.5 cm).

Samples (4 mL) were collected using a fraction collector (ISCO; Foxy 500, Lincoln, NB, USA).

The fractions were analyzed using TLC (bonded phase amino, Sorbent Technologies, Atlanta, GA, USA).

Similar fractions were combined and subjected to the inhibition assay and 1H NMR spectroscopy.

A fraction (eluting from 28 to 40 mL after the void volume; 187 mg) appeared to inhibit growth and showed signals that could be attributed to aromatic and carbohydrate compounds.

This fraction was then adsorbed onto C18 bonded flash silica gel (Sigma-Aldrich, Milwaukee, WI, USA) and eluted using 50% aqueous MeOH, 20% aqueous MeOH, 100% MeOH (30 mL of C-18 in a 50 mL glass syringe employed as the column).

The fraction that eluted with 20% aqueous MeOH was filtered, dissolved in a minimum amount of 80% CH3CN/ 20% H2O, and further separated with bonded phase amino HPLC (Varian Dynamax, Palo Alto, CA, USA; 25 cm × 1.0 cm; 70%CH3CN/30%H2O).

Two symmetrical peaks (suggesting pure compounds) were observed in the chromatogram (tR = 4.40 min; tR = 4.70 min).

The 1H NMR spectra of these two fractions were similar and also appeared to be a mixture of compounds.

Attempts at using other bonded phase HPLC columns (C18; C8; CN) still resulted in a single peak in the chromatogram but appeared as a mixture of compounds in the 1H NMR spectrum.

The individual peaks were subjected to LCMS-ESI-TOF (Agilent Technologies; Santa Clara, CA, USA).

Both compounds yielded [M − 1] ions in their negative ESIMS, which corresponded to a molecular formula of C52H65O33 (calculated m/z 1185.3509; tR = 4.40: m/z 1185.3568, tR = 4.70: m/z 1185.3470).

On the basis of the appearance of each 1H NMR spectrum it appeared that both compounds were inseparable mixtures of acetates and benzoates.

In an attempt to identify the glycosidic structure of the compounds, a mild base hydrolysis was performed to convert the esters to the free alcohols.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สกัดและแยก Air-dried ใบและลำต้นของ O.rigidum มีพื้นในโรงงานผลิต Wiley (70 กรัม) ตัวอย่างพืชแห้ง ดินถูกสกัด ด้วย 1:1 ทา นอ/CH2Cl2 ค้างคืน ตัวทำละลายสกัดถูก decanted วัสดุโรงงาน ซึ่งถูกสกัดแล้ว มีทานอสำหรับ 12 h สารสกัดจากทานอถูกรวมกับ CH2Cl2/ทา นอ และหรือสารทำละลายถูกเอาออกที่ความดันลดลง (8 กรัม) (1.16 g) ตัวอย่างของสารสกัดอินทรีย์น้ำมันละลายใน CH2Cl2/ทา นอ 1:1 และใส่ในคอลัมน์ที่มี LH 20 (50 cm × 2.5 ซม.) ตัวอย่าง (4 mL) ถูกเก็บรวบรวมใช้เก็บเศษ (ISCO เจ้าเล่ห์ 500 ลินคอล์น NB สหรัฐอเมริกา) เศษได้วิเคราะห์โดยใช้ TLC (ผูกขั้นตอนอะมิโน เทคโนโลยีดูดซับ แอตแลนตา GA สหรัฐอเมริกา) ส่วนที่คล้ายกันถูกรวม และต้องการยับยั้งการวิเคราะห์และ 1H NMR ก เศษส่วน (eluting จาก 28 40 mL จากปริมาตรโมฆะ 187 มิลลิกรัม) ปรากฏการ ยับยั้งการเจริญเติบโต และแสดงให้เห็นสัญญาณที่อาจเกิดจากหอมและคาร์โบไฮเดรตสารประกอบ เศษนี้ถูก แล้ว adsorbed ไปถูกผูกมัด C18 แฟลชซิลิก้าเจล (Aldrich ซิก มิลวอกี WI สหรัฐอเมริกา) และ eluted 50% ใช้ทานออควี 20% ทานออควี 100% ทานอ (30 mL ของ C-18 ในเข็มฉีดยาแก้ว 50 มล.ที่จ้างเป็นคอลัมน์) เศษส่วนที่ eluted 20% ทานออควีถูกกรอง ละลายในจำนวนขั้นต่ำ 80% CH3CN / 20% H2O และแยกต่อ กับผูกระยะ HPLC อะมิโน (แล้วแต่กำหนด Dynamax ดัลลัส CA, USA; 25 ซม. × 1.0 cm; 70%CH3CN/30%H2O) สองยอดสมมาตร (แนะนำสารประกอบบริสุทธิ์) สุภัค chromatogram (tR = 4.40 นาที tR = 4.70 min)แรมสเป็คตรา NMR 1H ของเศษส่วนทั้งสองนี้ได้เหมือนกัน และยังปรากฏเป็น ส่วนผสมของสาร ความพยายามที่ใช้คอลัมน์ HPLC ผูกระยะอื่น ๆ (C18 C8 CN) ยังส่งผลให้ยอดเดียวใน chromatogram ได้ปรากฏเป็นส่วนผสมของสารในสเปกตรัม NMR 1 H แต่ละแห่งถูกต้องนำเสนอในรูป-ESI-TOF (Agilent เทคโนโลยี ซานตาคลารา CA สหรัฐอเมริกา) ประจุทั้งสองสารผล [M − 1] ใน ESIMS ลบของพวกเขา ที่ corresponded กับสูตรโมเลกุลของ C52H65O33 (m คำนวณ z 1185.3509; tR = 4.40: m/z 1185.3568, tR = 4.70: m z 1185.3470) ตามลักษณะของแต่ละ 1 H NMR สเปกตรัม ซึ่งปรากฏว่า สารประกอบทั้งสองมีต่อผสม acetates และ benzoates ในความพยายามที่จะระบุโครงสร้างของสารประกอบ glycosidic ไฮโตรไลซ์พื้นฐานอ่อนได้ทำการแปลง esters alcohols ฟรี

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

. การสกัดและการแยก. ใบอากาศแห้งและลำต้นของ O.rigidum ถูกพื้นในโรงงานไวลีย์ตัวอย่าง(70 กรัม) แห้งพืชพื้นดินถูกสกัดด้วย 1: 1 ผสม CH2Cl2 / เมธานอลในชั่วข้ามคืน. การสกัด ตัวทำละลาย decanted จากวัสดุจากพืชซึ่งถูกสกัดด้วยเมธานอลเป็นเวลา 12 ชม. เมธานอลสารสกัดรวมกับ CH2Cl2 / เมธานอลและตัวทำละลายที่ถูกถอดออกที่ความดันลดลง (8 กรัม). ตัวอย่าง (1.16 กรัม) ของ สารสกัดอินทรีย์น้ำมันดิบถูกละลายใน 1: 1 CH2Cl2 / เมธานอลและวางไว้บนคอลัมน์ LH-20 (50 ซม× 2.5 ซม.) ตัวอย่าง (4 มิลลิลิตร) ที่ถูกเก็บรวบรวมใช้เก็บส่วน (ISCO; เจ้าเล่ห์ 500, ลิงคอล์น, NB, สหรัฐอเมริกา ). เศษส่วนถูกวิเคราะห์โดยใช้ TLC (อะมิโนเฟสผูกมัดดูดซับ Technologies, Atlanta, GA, USA). เศษส่วนที่คล้ายกันมารวมกันและอยู่ภายใต้การทดสอบการยับยั้งและสเปคโทร 1H NMR. เศษ (eluting 28-40 มิลลิลิตรหลังจากโมฆะ ปริมาณ. 187 มก.) ปรากฏในการยับยั้งการเจริญเติบโตและการแสดงให้เห็นสัญญาณที่สามารถนำมาประกอบกับมีกลิ่นหอมและสารประกอบคาร์โบไฮเดรตส่วนนี้ถูกดูดซับจากนั้นเข้าสู่ C18 ผูกมัดซิลิกาเจลแฟลช (Sigma-Aldrich, Milwaukee, WI, USA) และชะใช้ 50% น้ำ เมธานอล 20% น้ำเมธานอล 100% เมธานอล (30 มิลลิลิตร C-18 ใน 50 มลเข็มฉีดยาแก้วใช้เป็นคอลัมน์). ส่วนที่ชะ 20% น้ำเมธานอลถูกกรองที่ละลายในจำนวนเงินขั้นต่ำ 80% CH3CN / 20% H2O และแยกออกจากกันต่อไปด้วยขั้นตอนการผูกมัดอะมิโน HPLC (Varian Dynamax พาโลอัลโต, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา 25 ซม. × 1.0 ซม . 70% CH3CN / 30% H2O) สองยอดสมมาตร (แนะนำสารบริสุทธิ์) ถูกตั้งข้อสังเกตใน chromatogram นี้ (TR = 4.40 นาที. TR = 4.70 นาที) สเปกตรัม 1H NMR ของทั้งสองเศษส่วนมีความคล้ายคลึงกันและดูเหมือนจะเป็น . มีส่วนผสมของสารความพยายามที่ใช้อื่นๆ ถูกผูกมัดเฟสคอลัมน์ HPLC (C18; C8; CN) ยังคงส่งผลให้ยอดเดียวใน chromatogram แต่ดูเหมือนจะเป็นส่วนผสมของสารในสเปกตรัม 1H NMR. ยอดบุคคลที่ถูกยัดเยียดให้ LCMS-ESI . -TOF (Agilent Technologies; ซานตาคลารา, CA, USA) สารทั้งสองให้ผล [M - 1] ไอออนใน ESIMS เชิงลบของพวกเขาซึ่งตรงกับสูตรโมเลกุล C52H65O33 (คำนวณเมตร / z 1185.3509; TR = 4.40: ม. / z 1185.3568, TR = 4.70: ม. / z 1185.3470) บนพื้นฐานของการปรากฏตัวของแต่ละสเปกตรัม 1H NMR ที่ปรากฏว่าสารทั้งสองผสมแยกออกไม่ได้ของอะซีเตทและ benzoates. ในความพยายามที่จะระบุโครงสร้าง glycosidic ของสารที่อ่อน ฐานย่อยสลายได้ดำเนินการแปลงเอสเทอเพื่อแอลกอฮอล์ฟรี

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสกัดและการแยก .

อากาศแห้ง ใบและลำต้น o.rigidum มีพื้นในโรงงานนิ่ง .

ตัวอย่าง ( 70 กรัม ) ผลแห้ง พืช ดินถูกสกัดด้วยเมทิลแอลกอฮอล์ 1 : 1 ผสม ch2cl2 / ค้างคืน

ตัวทำละลายสกัด decanted จากวัสดุพืชซึ่งถูกสกัดด้วยเมทิลแอลกอฮอล์ 12 H .

มีปริมาณสารสกัดรวมกับ ch2cl2 / ปริมาณและตัวทำละลายออกที่ลดความดัน ( 8 G )

ตัวอย่าง ( 1.16 กรัม ) ของสารสกัดอินทรีย์ละลายได้ในอัตราส่วน 1 : 1 ch2cl2 / ปริมาณและวางไว้บน lh-20 คอลัมน์ ( 50 cm × 2.5 ซม. )

ตัวอย่าง ( 4 กรัม ) ที่ใช้ในการเก็บรวบรวมเศษสะสม ( isco ; เจ้าเล่ห์ 500 , ลินคอล์น , NB , USA )

ส่วนวิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้ TLC ( ผูกมัด ) กรดอะมิโน ดูดซับเทคโนโลยี , แอตแลนตา , GA , สหรัฐอเมริกา )

เศษส่วนที่คล้ายกันถูกรวมและถูกยับยั้งใน 1H NMR สเปกโทรสโกปี

ส่วน ( hexane จาก 28 40 ml หลังจากโมฆะปริมาณ ; 187 มิลลิกรัม ) ปรากฏในการยับยั้งการเจริญเติบโต และมีสัญญาณว่าอาจจะเกิดจากการหอมและคาร์โบไฮเดรตสารประกอบ

ส่วนนี้ถูกดูดซับบนซิลิกาเจล c18 ผูกมัด Flash ( ซิกม่า Aldrich Milwaukee , WI ,สหรัฐอเมริกา ) และตัวอย่างการใช้ 50% น้ำปริมาณน้ำ 20 % ปริมาณ 100 % ( ปริมาณ 30 มล. - 50 ml ในแก้วเข็มที่ใช้เป็นเสา )

ส่วนที่ 20% ปริมาณตัวอย่างน้ำถูกกรองละลายในยอดเงินขั้นต่ำ 80% ch3cn / 20 % H2O และเพิ่มเติม แยกด้วยเฟส HPLC ( Varian dynamax ผูกพันกรดอะมิโน , พาโลอัลโต , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา 25 cm × 1.0 ซม. 70 % ch3cn / 30 % H2O )

สองยอดสมมาตร ( แนะนำสารประกอบบริสุทธิ์ ) พบใน chromatogram ( TR = 4.40 นาที ; TR = 4.70 min ) .

1H NMR สเปกตรัมของทั้งสองส่วนใกล้เคียงกันและยังปรากฏเป็นส่วนผสมของสารประกอบที่ใช้อื่น ๆ .

พยายามผูกมัดเฟส HPLC คอลัมน์ ( c18 ดอง ; ;