Bacillus subtilis (Alcalase, activity 6.22 U/mL) and A. oryzae
(Flavourzyme, activity 0.69 U/mL) were kindly provided
by AB Enzymes (Barueri, SP, Brazil) and Novozymes
(Araucária, PR, Brazil), respectively. In this paper, one unit
of activity is defined as the amount of enzyme that releases
1 mg of tyrosine per minute at 37C.
ACE (E.C. 3.4.15.1, 0.25 U/mg), hippuryl-histidyl-leucine
(HHL) and hippuric acid (HA) were purchased from Sigma
(St. Louis, MO). Trifluoroacetic acid and acetic acid, both of
high-performance liquid chromatography (HPLC) grade,
were obtained from Vetec (Duque de Caxias, RJ, Brazil).
Acetonitrile, HPLC grade, was supplied by JT Baker (Phillipsburg,
NJ). The polyvinylidene fluoride membranes used
for the filtration of samples (0.22 mm) and solvents
(0.45 mm), as well as a tangential flow system with a 10 kDa
cut-off membrane, were purchased from Millipore (São
Paulo, SP, Brazil). All other reagents used in this study were
of analytical grade.
The reverse-phase high-performance liquid chromatography
system (RP-HPLC) comprised the following: a GraceSmart
RP-18 chromatography column, 150 ¥ 4.6 mm,
5 mm and 120 Å (Grace Davison, Deerfield, IL); an isocratic
pump and a UV-Vis spectrophotometric detector (1,200
series, Agilent, Santa Clara, CA) connected to a computer
with Chem Station software for LC Systems (Agilent). The
water used to prepare the mobile phase was purified with
the MilliQ system (Millipore, Billerica, MA).
คัด subtilis (Alcalase กิจกรรม 6.22 U/mL) และอ.แห้งระดับต่าง ๆ(Flavourzyme กิจกรรม 0.69 U/mL) ได้กรุณาโดยเอนไซม์ AB (Barueri, SP บราซิล) และ Novozymes(Araucária, PR บราซิล), ตามลำดับ ในเอกสารนี้ หนึ่งหน่วยกิจกรรมถูกกำหนดให้เป็นจำนวนเอนไซม์ที่นำออกใช้1 มก.ต่อนาทีที่ 37C. tyrosineเอซ (E.C. 3.4.15.1, U 0.25 mg), hippuryl-histidyl-leucine(HHL) และซื้อจากซิก hippuric กรด (ฮา)(St. Louis ด) กรด Trifluoroacetic และกรดอะซิติก ทั้งสองที่ระดับประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC)ได้รับจาก Vetec (Duque de Caxias, RJ บราซิล)Acetonitrile, HPLC เกรด ถูกกำหนด โดย JT เบเกอร์ (PhillipsburgNJ) สารฟลูออไรด์ polyvinylidene ที่ใช้สำหรับการกรองของตัวอย่าง (0.22 มิลลิเมตร) และหรือสารทำละลาย(0.45 mm), และระบบกระแส tangential กับ 10 kDaตัดเยื่อ ซื้อจากมาก (เซาเซาเปาโล SP บราซิล) Reagents อื่น ๆ ใช้ในการศึกษานี้ได้เกรดวิเคราะห์Chromatography กลับเฟสของเหลวของประสิทธิภาพสูงต่อไปนี้ประกอบด้วยระบบ (RP-HPLC): เป็น GraceSmartคอลัมน์ chromatography RP-18, 150 ¥ 4.6 มม.5 มม.และ 120 Å (Davison เกรซ บางนาตราด IL); isocratic คิดเป็นปั๊มและการจับ spectrophotometric UV-Vis (1200ชุด Agilent ซานตาคลารา CA) เชื่อมต่อกับคอมพิวเตอร์ด้วยซอฟต์แวร์สถานีเคมีสำหรับระบบ LC (Agilent) ที่น้ำที่ใช้ในการเตรียมระยะเคลื่อนที่บริสุทธิ์ที่มีระบบ MilliQ (มาก Billerica, MA)
การแปล กรุณารอสักครู่..

เชื้อ Bacillus subtilis (เอนไซม์อัลคากิจกรรม 6.22 U / มิลลิลิตร) และ A. oryzae
(Flavourzyme กิจกรรม 0.69 U / มิลลิลิตร)
ได้ให้ความกรุณาโดยAB เอนไซม์ (บารูเอรี, SP, บราซิล) และ Novozymes
(Araucaria, PR, บราซิล), ตามลำดับ ในบทความนี้หน่วยหนึ่งของกิจกรรมที่ถูกกำหนดให้เป็นปริมาณของเอนไซม์ที่ออก1 mg ของซายน์ต่อนาทีที่ 37C. ACE (EC 3.4.15.1, 0.25 U / มก.) hippuryl-histidyl-leucine (HHL) และกรด hippuric (HA) ที่ซื้อมาจากซิกม่า(เซนต์หลุยส์) TRIFLUOROACETIC กรดอะซิติกและกรดทั้งสองที่มีประสิทธิภาพสูงของเหลวchromatography (HPLC) ชั้นประถมศึกษาปีที่ได้รับจาก Vetec (Duque de Caxias, RJ, บราซิล). Acetonitrile เกรด HPLC ถูกจัดทำโดย JT เบเคอร์ (ลิฟส์, นิวเจอร์ซีย์) เยื่อฟลูออไร Polyvinylidene ใช้สำหรับการกรองของกลุ่มตัวอย่าง(0.22 มิลลิเมตร) และตัวทำละลาย(0.45 มิลลิเมตร) เช่นเดียวกับระบบการไหลเวียนของวงกับ 10 กิโลดาลตันเมมเบรนตัดที่ซื้อมาจากค(เซาเปาโล, SP, บราซิล) ทั้งหมดสารเคมีอื่น ๆ ที่ใช้ในการศึกษาอยู่นี้เกรดวิเคราะห์. ขั้นตอนย้อนกลับที่มีประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography ระบบ (RP-HPLC) ประกอบด้วยดังต่อไปนี้ GraceSmart RP-18 คอลัมน์โครมา 150 ¥ 4.6 มิลลิเมตร5 มิลลิเมตรและ 120 A ( เกรซเดวิสัน, เดียร์ฟิลด์, อิลลินอยส์); isocratic ปั๊มและ UV-Vis สเปกเครื่องตรวจจับ (1,200 ชุด Agilent, ซานตาคลารา, แคลิฟอร์เนีย) เชื่อมต่อกับคอมพิวเตอร์ที่มีซอฟแวร์สถานีเคมีสำหรับระบบLC (Agilent) น้ำที่ใช้ในการเตรียมความพร้อมขั้นตอนการมือถือบริสุทธิ์ด้วยระบบ MilliQ (คบิลเลริกา, แมสซาชูเซต)
การแปล กรุณารอสักครู่..

Bacillus subtilis ( ประสบการณ์ กิจกรรม : U / ml ) และ A . oryzae
( flavourzyme กิจกรรม 0.69 U / ml ) กรุณาให้
โดย AB เอนไซม์ ( Barueri , SP , ประเทศบราซิล ) และกุ้ง
( arauc . kgm RIA , พีอาร์ , บราซิล ) , ตามลำดับ ในกระดาษนี้
หน่วยหนึ่งของกิจกรรม หมายถึง ปริมาณของเอนไซม์ที่ปล่อย
1 มิลลิกรัมต่อนาทีที่ซีน 37c .
เอซ ( อีซี 3.4.15.1 0.25 U / mg ) hippuryl
histidyl ลูซีน( hhl ) และกรดฮิพ ( ฮา ) ซื้อจาก Sigma
( St . Louis , MO ) กรด trifluoroacetic และกรดอะซิติก ทั้งคู่
วิธีโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง ( HPLC ) เกรด
ได้จาก vetec ( Duque de Caxias , RJ , บราซิล ) .
ไนเกรด HPLC ที่ถูกจัดโดย JT เบเกอร์ ( phillipsburg
, NJ ) การใช้เมมเบรนีนฟลูออไรด์
สำหรับการกรองตัวอย่าง ( 0.22 มม. ) และสารละลาย
( 045 มม. ) รวมทั้งระบบการไหลสัมผัสกับ 10 kDa
ตัดเยื่อ ซื้อมาจาก MILLIPORE ( S O
ฮัล เปาโล , SP , ประเทศบราซิล ) อื่น ๆทั้งหมดที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ เพื่อวิเคราะห์
เกรด ระบบโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง
กลับเฟส ( ๆ ) ประกอบด้วยต่อไปนี้ : gracesmart
rp-18 คอลัมน์ chromatography , 150 ¥ 4.6 มม.
5 มม. และ 120 กริพเพน ( เกรซ เดวิสัน เดียร์ฟิลด์ , อิลลินอยส์ , )ปั๊มและเครื่องตรวจจับยูวีวิส Isocratic
i (
1 ชุด , Agilent , ซานตา คลาร่า , แคลิฟอร์เนีย ) เชื่อมต่อกับคอมพิวเตอร์ด้วยซอฟต์แวร์สำหรับระบบสถานี
LC ( ด้านเคมี )
ใช้น้ำเพื่อเตรียมขั้นตอนโทรศัพท์มือถือบริสุทธิ์ ด้วยระบบ milliq
( มิลลิ , โตเกียว , MA )
การแปล กรุณารอสักครู่..
