2.4.3. PPO activityThe PPO activity

2.4.3. PPO activity
The PPO activity was determined according to the method
described by Gonzalez, de Ancos, and Cano (1999), with some
modifications.
2.4.3.1. Enzyme extraction. All steps of PPO extraction were carried
in ground ice, to avoid enzyme inactivation. Seven grams of peach
cubes were extracted with 20 ml of 0.1 mol/l phosphate buffer pH
7.3 containing 1 g/100 ml insoluble polyvinylpolypyrrolidone
(PVPP) and 0.5 mmol/l phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF), by
using a Homogenizer Power Gen 1000 (Fisher Scientific, Germany).
The homogenate was kept in agitation for 30 min, then centrifuged
at 10,000  g for 15 min at 4 C, and the supernatant used as the
PPO enzyme source in the following experiment.
2.4.3.2. Enzyme assay. PPO activity was determined by using a
spectrophotometric method based on the initial rate of increase in
absorbance at 420 nm. A volume of 2.55 ml of phosphate buffer
solution 0.01 mol/l pH 5.5 with 0.01 mol/l cathecol as a substrate
and 50 ml of the enzyme extract was pipetted into a test tube and
mixed thoroughly. Then, the mixturewas rapidly transferred to a 1-
cm path length cuvette. The absorbance at 420 nm was recorded
continuously at 30 C for 5 min by using an ultravioletevisible
spectrophotometer (Gilford, USA). The activity is expressed as units

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4.3 PPO กิจกรรมกิจกรรม PPO ได้กำหนดตามวิธีการอธิบาย โดย Gonzalez เด Ancos, Cano (1999), กับปรับเปลี่ยน2.4.3.1 เอนไซม์สกัด ได้ดำเนินการทุกขั้นตอนสกัด PPOพื้นน้ำแข็ง หลีกเลี่ยงการยกเลิกการเรียกเอนไซม์ 7 กรัมของพีชลูกบาศก์ถูกสกัด ด้วยของ 0.1 โมล/l ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 20 ml7.3 ประกอบด้วย 1 g/100 ml ละลาย polyvinylpolypyrrolidone(PVPP) และฟลูออไรด์ 0.5 mmol/l phenylmethylsulfonyl (PMSF), โดยใช้เป็น Homogenizer Power Gen 1000 (Fisher วิทยาศาสตร์ เยอรมนี)Homogenate ถูกเก็บไว้ในอาการกังวลต่อใน 30 นาที แล้ว centrifugedที่ g 10000 สำหรับ 15 นาทีที่ 4 C, supernatant ที่ใช้เป็นแหล่งเอนไซม์ PPO ในการทดลองต่อไปนี้2.4.3.2 เอนไซม์วิเคราะห์ PPO กิจกรรมถูกกำหนดโดยการวิธี spectrophotometric ตามอัตราเริ่มต้นเพิ่มขึ้นabsorbance ที่ 420 nm ปริมาณของมล 2.55 ฟอสเฟตบัฟเฟอร์โซลูชั่น 0.01 โมล/l ค่า pH 5.5 มี 0.01 โมล/l cathecol เป็นพื้นผิวและ 50 ml ของสารสกัดเอนไซม์ถูก pipetted ลงในหลอดทดสอบ และผสมอย่างละเอียด แล้ว mixturewas ที่โอนไป 1 แบบรวดเร็วซม.เส้นยาว cuvette Absorbance ที่ 420 nm มีการบันทึกที่ 30 C ใน 5 นาทีโดยใช้การ ultravioletevisible อย่างต่อเนื่องเครื่องทดสอบกรดด่าง (Gilford สหรัฐอเมริกา) กิจกรรมจะแสดงเป็นหน่วย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4.3 กิจกรรม PPO
กิจกรรม PPO
ถูกกำหนดตามวิธีการอธิบายโดยกอนซาเลเดอAncos และคาโน (1999)
มีบางส่วนปรับเปลี่ยน.
2.4.3.1 สกัดเอนไซม์ ขั้นตอนของการสกัด PPO
ทั้งหมดถูกดำเนินการในน้ำแข็งพื้นดินเพื่อหลีกเลี่ยงการใช้งานของเอนไซม์ เซเว่นกรัมของลูกพีชก้อนถูกสกัดด้วย 20 มล. 0.1 โมล / ลิตรค่า pH ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ 7.3 มี 1 กรัม / 100 มล. ที่ไม่ละลายน้ำ polyvinylpolypyrrolidone (PVPP) และ 0.5 มิลลิโมล / ลิตรฟลูออไร phenylmethylsulfonyl (PMSF) โดยใช้Homogenizer พลังงาน Gen 1000 (ฟิชเชอร์ วิทยาศาสตร์เยอรมนี). homogenate ถูกเก็บไว้ในการกวนเป็นเวลา 30 นาทีจากนั้นหมุนเหวี่ยงที่10,000? กรัมเป็นเวลา 15 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียสและใสใช้เป็นแหล่งที่มาของเอนไซม์PPO ในการทดลองต่อไป. 2.4.3.2 ทดสอบเอนไซม์ กิจกรรม PPO ถูกกำหนดโดยใช้วิธีสเปกตามอัตราเริ่มต้นของการเพิ่มขึ้นของการดูดกลืนแสงที่420 นาโนเมตร ปริมาณ 2.55 มล. ของบัฟเฟอร์ฟอสเฟตวิธีการแก้ปัญหา0.01 โมล / ลิตรค่า pH 5.5 0.01 โมล / ลิตร cathecol เป็นสารตั้งต้นและ50 มล. ของสารสกัดจากเอนไซม์ที่ถูกปิเปตลงในหลอดทดสอบและผสม จากนั้น mixturewas ที่โอนอย่างรวดเร็วไปยัง 1- cuvette ซม. ความยาวเส้นทาง การดูดกลืนแสงที่ 420 นาโนเมตรที่ถูกบันทึกไว้อย่างต่อเนื่องวันที่30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีโดยใช้ ultravioletevisible spectrophotometer (Gilford สหรัฐอเมริกา) กิจกรรมจะแสดงเป็นหน่วย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4.3 . กิจกรรมของเอนไซม์ PPO PPO กิจกรรม
ถูกกำหนดตามวิธีการ
อธิบายโดย กอนซาเลซ , ancos และคาโนะ ( 1999 ) มีการปรับเปลี่ยน
.
2.4.3.1 . การสกัดเอนไซม์ ทุกขั้นตอนของการสกัดสูงขึ้นโดยนำน้ำแข็ง
ในพื้นดินเพื่อหลีกเลี่ยงการยับยั้งเอนไซม์ . เจ็ดกรัมของพีช
ก้อนสกัด 20 ml 0.1 โมลต่อลิตรฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH
73 มี 1 กรัม / 100 มิลลิลิตรของน้ำ polyvinylpolypyrrolidone
( pvpp ) และ 0.5 มิลลิโมล / ลิตร phenylmethylsulfonyl ฟลูออไรด์ ( PMSF ) โดยใช้เครื่องปั่น Power Gen 1
( ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ , เยอรมนี )
อนที่ถูกเก็บไว้ในการกวน 30 นาที จากนั้นไฟฟ้า
ที่ 10 , 000  G สำหรับ 15 นาทีที่ 4  c และนำใช้เป็นแหล่งของเอนไซม์ PPO ในการทดลอง

2.4.3.2 ต่อไป . เอนไซม์ ( . . .กิจกรรมของเอนไซม์ PPO ได้ถูกกำหนดโดยใช้วิธี ) ตามอัตรา

ค่าเริ่มต้นเพิ่มขึ้นที่ 420 นาโนเมตร ปริมาณสารละลายฟอสเฟตบัฟเฟอร์
2.55 กรัม 0.01 โมลต่อลิตร pH 5.5 กับ 0.01 โมลต่อลิตร cathecol เป็นสับสเตรทของเอนไซม์และ 50 ml
g
pipetted เป็นหลอดทดสอบและผสมอย่างทั่วถึง แล้ว mixturewas อย่างรวดเร็วย้ายไป 1 -
ซม. ความยาวเส้นทางคิวเวตต์ .นที่ 420 nm บันทึก
อย่างต่อเนื่องใน 30  องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที โดยการใช้วัสดุ ultravioletevisible
( กิลฟอร์ด , สหรัฐอเมริกา ) กิจกรรมแสดงเป็นหน่วย