This procedure carried out accordin

This procedure carried out according to the procedures of Lard et al. [32]. Briefly, ELISA plate was coated with 50 μl of the antigen was dispensed into the wells of ELISA microplates. After incubation at 4°C overnight, the microplate was washed with phosphate-buffered saline (PBS) containing 0.05% Tween 20 (PBS-T) (washing buffer) 3-4 time. 100 μl of diluted 1/100 sheep, goat and human serum samples were added to each well. Dilutions of negative and positive control sera were 1/100. After incubation for 60 min at 37°C after incubation wash the plate with washing buffer. 100 μl peroxidase-conjugated protein A or anti-human conjugated with horseradish peroxidase (Sigma, Aldrich, Germany) diluted with phosphate-buffered saline (PBS) containing 0.05% Tween 20. The plate was incubated further for 60 min at 37°C and then washed by washing buffer. A freshly prepared substrate solution100 μl of orthophenylenediamine (OPD), (Sigma Aldrich Germany) was added and the plates were left in the dark (10-15 min) at room temperature until color well developed in the positive control wells. The reaction was then stopped by adding 50 μl of 5% sodium dodecyl sulfate and the optical density (OD) of each well was determined with a micro-ELISA plate reader at a test wavelength of 414 nm.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ขั้นตอนนี้ดำเนินการตามขั้นตอนของมันหมู et al. [32] สั้น ๆ ELISA แผ่นถูกเคลือบ ด้วย 50 μl ของ antigen ถูกจ่ายลงหลุมของ ELISA microplates หลังจากบ่มที่อุณหภูมิ 4° C ค้างคืน microplate ถูกล้าง ด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ (PBS) ที่ประกอบด้วยเวลา 3-4 (ล้างบัฟเฟอร์) แต่ 20 (PBS T) 0.05% Μl 100 เจือจาง 1/100 แกะ แพะ และตัวอย่างซีรั่มที่มนุษย์ถูกเพิ่มไปอย่างละ เจือจางของควบคุมบวก และลบจะได้ 1/100 หลังจากบ่มสำหรับ 60 นาทีที่อุณหภูมิ 37° C หลังจากบ่มล้างจานซักบัฟเฟอร์ Μl ผันฮอสโปรตีน A 100 หรือต่อต้านมนุษย์ผันกับดิชฮอส (ซิกม่า Aldrich เยอรมนี) เจือจาง ด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ (PBS) 0.05% ที่ประกอบด้วยแต่ 20 แผ่น incubated เพิ่มเติมสำหรับ 60 นาทีที่อุณหภูมิ 37° C และจากนั้น ล้าง โดยล้างบัฟเฟอร์ Μl solution100 พื้นผิวที่เตรียมสดใหม่ของ orthophenylenediamine (OPD), เพิ่ม (Sigma Aldrich เยอรมนี) และแผ่นถูกทิ้งในมืด (10-15 นาที) ที่อุณหภูมิห้องจนกว่าสีพัฒนาดีในหลุมควบคุมบวก แล้วหยุดปฏิกิริยา โดยการเพิ่ม μl 50 5% โซเดียมซัลเฟต dodecyl และความหนาแน่นออปติคอล (OD) ของแต่ละอย่างถูกกำหนด ด้วยเครื่องอ่านแผ่นไมโคร ELISA ที่ความยาวคลื่นทดสอบ 414 nm

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ขั้นตอนนี้จะดำเนินการตามขั้นตอนของหมู et al, [32] สั้น ๆ , แผ่น ELISA ถูกเคลือบด้วย 50 ไมโครลิตรของแอนติเจนที่ถูกจ่ายเข้าไปในหลุมของ ELISA microplates หลังจากการบ่มที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสในชั่วข้ามคืน microplate ถูกล้างด้วยน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (พีบีเอส) ที่มี 0.05% Tween 20 (PBS-T) (บัฟเฟอร์ซักผ้า) 3-4 เวลา 100 ไมโครลิตรของเจือจาง 1/100 แกะแพะและซีรั่มของมนุษย์ตัวอย่างถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละดี เจือจางของบวกและลบซีรั่มควบคุมอยู่ 1/100 หลังจากการบ่มเป็นเวลา 60 นาทีที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสหลังจากการบ่มล้างจานซักผ้าที่มีบัฟเฟอร์ 100 ไมโครลิตร peroxidase-ผันโปรตีนหรือ Anti-Human ผันกับมะรุม peroxidase (ซิกม่าดิช, เยอรมนี) เจือจางด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ (พีบีเอส) ที่มี 0.05% Tween 20 แผ่นถูกบ่มต่อไปสำหรับ 60 นาทีที่ 37 องศาเซลเซียสและ แล้วล้างด้วยบัฟเฟอร์ซักผ้า จัดทำขึ้นอย่างสดใหม่ตั้งต้น solution100 ไมโครลิตรของ orthophenylenediamine (OPD), (Sigma Aldrich เยอรมนี) ถูกบันทึกและแผ่นถูกทิ้งไว้ในที่มืด (10-15 นาที) ที่อุณหภูมิห้องจนสีพัฒนาดีในหลุมควบคุมบวก ปฏิกิริยาก็หยุดแล้วโดยการเพิ่ม 50 ไมโครลิตร 5% โซเดียมโดเดซิลซัลเฟตและความหนาแน่นของแสง (OD) ของแต่ละดีถูกกำหนดด้วยการอ่านแผ่นไมโคร ELISA ที่ความยาวคลื่นทดสอบ 414 นาโนเมตร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กระบวนการนี้ได้ดำเนินการตามขั้นตอนของน้ำมันหมู et al . [ 32 ] สั้น , ELISA จานเคลือบด้วย 50 μ L ของแอนติเจนคือจ่ายลงในบ่อน้ำของ Elisa microplates . หลังจากบ่มที่อุณหภูมิ 4 องศา C ค้างคืน ล้างด้วยเกลือฟอสเฟตในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ( PBS ) ที่ 0.05 เปอร์เซ็นต์ Tween 20 ( pbs-t ) ( ล้างบัฟเฟอร์ ) 3-4 ครั้ง 100 μ L เมื่อแกะ 1 / 100 , แพะและตัวอย่างซีรัมของมนุษย์ที่ถูกละดี วิธีการลบและบวกค่าการควบคุมได้ 1 / 100 หลังจากบ่มเป็นเวลา 60 นาทีที่ 37 ° C หลังจากบ่มล้างจานล้างบัฟเฟอร์ 100 μ L มีโปรตีนคอนจูเกตหรือต่อต้านมนุษย์ conjugated กับพืชชนิดหนึ่ง peroxidase ( ซิกม่า Aldrich , เยอรมนี ) เจือจางด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( PBS ) ที่มีเกลือ 0.05% Tween 20 จานบ่มต่อ 60 นาที ที่ 37 ° C และจากนั้นล้างด้วยล้างบัฟเฟอร์ เตรียมพื้นผิวใหม่ solution100 μ l orthophenylenediamine ( OPD ) , ( ซิกม่า Aldrich เยอรมนี ) คือการเพิ่มและแผ่น ถูกทิ้งไว้ในที่มืด ( 10-15 นาที ) ที่อุณหภูมิห้องจนกว่าสีได้ดีขึ้นในบ่อควบคุมบวก ปฏิกิริยาที่ถูกหยุดโดยเพิ่ม 50 μ L 5 % โซเดียมโดเดซิลซัลเฟตและความหนาแน่นของแสง ( OD ) ของแต่ละคนก็ถูกกำหนดด้วย Micro ELISA plate reader ที่ทดสอบความยาวคลื่น 414 nm .