2.2. Ion beam bombardment and media

2.2. Ion beam bombardment and median lethal dose (LD50)
determination
For the median lethal dose (LD50) determination, one loop of
cells of B. licheniformis was transferred into 100 ml of LB medium
in a 500-ml flask. The cells of B. licheniformis were centrifuged to
precipitate the cells and then spread as a single-cell layer on a sterile
adhesive tape which was attached to a Petri dish and then
placed inside a sample holder, which also held a vacuum control.
Ion beam bombardment was carried out using the vertical bioengineering
ion beam facility at Chiang Mai University. In the experiment,
nitrogen (N) ions were used for ion irradiation with energy
of 30 keV and fluences in the range of 1014–1016 ions/cm2 at a normal
ion flux of an order of 1013 ions/cm2/sec. This flux level was
demonstrated to be low enough to maintain the cells survival [1].
After ion beam bombardment, the samples were separately
washed down with 10-ml LB solution and centrifuged for 1 min
at 9000 rpm. The precipitates were resuspended in 5 ml of LB medium
and incubated for 30 min at 37 C on a rotating shaker at a
speed of 220 rpm until the optical density at 600 nm (OD600)
reached 0.3–0.6. These cell suspensions were subsequently 10-fold
diluted to form samples at concentrations ranging from 101 to
1011 and grown on solid LB medium. All culture plates were then
incubated for 1 day at 37 C to ensure cell viability. Bacterial mutants
were screened for the phenotype which lost their antagonistic
ability against the fungi to be further tested. The mutant
screening was operated using the dual culture method as mentioned
above (Fig. 2).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 ระดมยิงลำแสงไอออนและเฉลี่ยตายยา (LD50)
มุ่งมั่นสำหรับเฉลี่ยตายยา (LD50) ความมุ่งมั่นหนึ่งวงเซลล์licheniformis บีถูกย้ายเป็น 100 มล. ของกลาง LB ในขวด 500 มล เซลล์ของ licheniformis บีถูกหมุนเหวี่ยงเพื่อตกตะกอนเซลล์และการแพร่กระจายจากนั้นเป็นชั้นเซลล์เดียวในการฆ่าเชื้อเทปกาวที่ติดอยู่กับจานเลี้ยงเชื้อและจากนั้นวางอยู่ภายในผู้ถือตัวอย่างซึ่งจัดขึ้นการควบคุมสูญญากาศ. ลำแสงไอออน การโจมตีได้ดำเนินการโดยใช้ชีววิศวกรรมแนวตั้งไอออนลำแสงสิ่งอำนวยความสะดวกที่มหาวิทยาลัยเชียงใหม่ ในการทดลองที่ไนโตรเจน (N) ไอออนถูกนำมาใช้สำหรับการฉายรังสีไอออนที่มีพลังงาน 30 keV และ fluences ในช่วง 1014-1016 ไอออน / cm2 ที่ปกติการไหลของไอออนของคำสั่งของไอออน1,013 / cm2 / วินาที ระดับฟลักซ์ได้รับการแสดงให้เห็นว่าต่ำพอที่จะรักษาความอยู่รอดของเซลล์ [1]. หลังจากการโจมตีลำแสงไอออนตัวอย่างที่ถูกแยกล้างลงด้วยวิธีการแก้ปัญหา LB 10 มล. และปั่นเป็นเวลา 1 นาทีที่9000 รอบต่อนาที ตกตะกอนถูก resuspended ใน 5 มล. ของกลาง LB และบ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่ 37 องศาเซลเซียสบนเครื่องปั่นหมุนที่ความเร็ว220 รอบต่อนาทีของจนความหนาแน่นของแสงที่ 600 นาโนเมตร (OD600) ถึง 0.3-0.6 สารแขวนลอยเซลล์เหล่านี้ถูกต่อมา 10 เท่าปรับลดในรูปแบบตัวอย่างที่ระดับความเข้มข้นตั้งแต่10 ไป 1 10 11 และปลูกที่สื่อ LB ของแข็ง แผ่นวัฒนธรรมทั้งหมดถูกแล้วบ่มเป็นเวลา 1 วันที่ 37 องศาเซลเซียสเพื่อให้แน่ใจว่าชีวิตของเซลล์ การกลายพันธุ์ของเชื้อแบคทีเรียที่ได้รับการคัดกรองฟีโนไทป์ที่หายไปของพวกเขาเป็นศัตรูความสามารถในการต่อต้านเชื้อราที่จะทดสอบต่อไป กลายพันธุ์การตรวจคัดกรองเป็นผู้ดำเนินการโดยวิธีการเพาะเลี้ยงคู่ตามที่กล่าวไว้ข้างต้น(รูปที่. 2)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . การโจมตีลำแสงไอออนและแอลดี 50 ( ld50 )

สำหรับปริมาณพิษของยา ( median ld50 ) ความมุ่งมั่นหนึ่งของห่วง
เซลล์ของ B . licheniformis ถูกส่งตัวไปเป็น 100 มิลลิลิตรของปอนด์ขนาดกลาง
ขวด 500 ml . เซลล์ B . licheniformis เป็นระดับ

ตกตะกอนเซลล์ และจากนั้นแพร่กระจายเป็นชั้นเซลล์เดียวบนเป็นหมัน
เทปกาวที่ติดจานเพาะเชื้อแล้ว
อยู่ภายในตัวอย่างผู้ซึ่งจัดขึ้นสูญญากาศควบคุม ยิงบีม
ไอออนโดยใช้แนวตั้งใช้
ลำแสงไอออนสิ่งอำนวยความสะดวกในมหาวิทยาลัยเชียงใหม่ ในการทดลอง
ไนโตรเจน ( N ) ใช้สำหรับการฉายรังสีไอออนไอออนที่มีพลังงาน
30 keV fluences และในช่วง 1 – 1184 ไอออน / cm2 ในฟลักซ์อิออนปกติ
ของคำสั่งของ 1013 ไอออน / cm2 / วินาที ระดับนี้
ฟลักซ์แสดงให้เห็นถึงต่ำเพียงพอที่จะรักษาเซลล์รอดชีวิต [ 1 ] .
หลังจากการโจมตีไอออนจำนวนต่างหาก
ล้างลงด้วยโซลูชั่นระดับ 10 ปอนด์ประมาณ 1 นาที
ที่ 9000 รอบต่อนาที มีตะกอนอยู่ resuspended 5 ml
กลางปอนด์และบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที  บนหมุนเครื่องปั่นที่ความเร็ว 220 รอบ
จนความหนาแน่นของแสงที่ 600 nm ( od600 )
ถึง 0.3 - 0.6แขวนลอยเซลล์เหล่านี้ต่อมา 10 เท่า
แบบฟอร์มตัวอย่างที่เจือจางในความเข้มข้นตั้งแต่ 10  1

10  11 และที่ปลูกในอาหาร LB ที่เป็นของแข็ง วัฒนธรรมแผ่นทั้งหมดแล้ว
บ่มเป็นเวลา 1 วัน ที่อุณหภูมิ 37  C เพื่อให้เซลล์ . แบคทีเรียสายพันธุ์
มีสำหรับการซึ่งสูญเสียความปฏิปักษ์ต่อเชื้อรา
ความสามารถเพื่อนำไปทดสอบ กลายพันธุ์
การคัดกรองการใช้วัฒนธรรมสองวิธีดังกล่าว
ข้างบน ( รูปที่ 2 )