[0182] The การเปิดเผยนี้ is also d

[0182] The การเปิดเผยนี้ is also directed to a peptide-containing fraction of a casein ไฮโดรไลเซต for use in activating อะดิโพเนคติน.
[0183] The present is also directed to peptides selected from a casein ไฮโดรไลเซต for use in maintaining healthy weight, by การให้ a composition ซึ่งประกอบรวมด้วย peptides selected from a casein ไฮโดรไลเซต.
[0184] The present is also directed to peptides selected from a casein ไฮโดรไลเซต for use in reducing the risk of heart attack by การให้ a composition ซึ่งประกอบรวมด้วย peptides selected from a casein ไฮโดรไลเซต.
[0185] ในรุรุที่ควรใช้ของ the การเปิดเผยนี้ และ/หรือ รุรุ ของมัน the plasma concentration of อะดิโพเนคติน is increased. Preferably the plasma concentration of
อะดิโพเนคติน is adjusted to between 5-10 mg/ml.
[0186] ในรุรุที่ควรใช้ของ the การเปิดเผยนี้ และ/หรือ รุรุ ของมัน the composition ซึ่งประกอบรวมด้วย peptides selected from a casein ไฮโดรไลเซต is a nutritional
composition.
[0187] ในรุรุที่ควรใช้ของ the การเปิดเผยนี้ และ/หรือ รุรุ ของมัน the casein ไฮโดรไลเซต is a cow's milk ไฮโดรไลเซต.
[0188] ในรุรุที่ควรใช้ของ the การเปิดเผยนี้ และ/หรือ รุรุ ของมัน the ไฮโดรไลเซต is an ไฮโดรไลเซตที่มีเปปไทด์นมวัวที่ผ่านการไฮโดรไลซ์อย่างสูง.
[0189] The preferred embodiments of the method of the การเปิดเผย และ/หรือ รุรุ ของมัน are also preferred embodiments of the casein ไฮโดรไลเซต for use in activating
อะดิโพเนคติน, for use in maintaining healthy weight, and/or for use in reducing the risk of heart attack.
[0190] The การเปิดเผย is now exemplified by the following non limiting examples.
EXAMPLES
Example 1:
Adipocyte isolation and culture
[0191] Subcutaneous adipose tissue was obtained from healthy lean or moderately
overweight women undergoing plastic surgery. The procedure was approved by the ethical committee of the Heinrich-Heine-University (Dusseldorf, Germany). Preอะดิโพไซต์ were
isolated by collagenase digestion. Isolated cell pellets were resuspended in DMEM/F12
medium supplemented with 10% FCS, seeded in six-well or 12-well culture dishes,
respectively, and maintained at 37°C with 5% CO2. After reaching confluence (day 0 of
differentiation), cell cultures were incubated incubated in an adipocyte differentiation medium (DMEM/F12, 33 mM biotin, 17 mmol/l d-panthothenic-acid, 66 nM insulin, 1 nM triiodo-L-
thyronine, 100 nM cortisol, 10 mg/ml apo-transferrin, 50 mg/ml gentamycin, 0.25 mg/ml
amphotericin B, 15 mM HEPES, 14 nM NaHCO3, pH 7.4) with troglitazone (5 pM) for 3 days. Once differentiation was started the cells were further incubated in adipocyte differentiation medium with medium changes every 2-3 days for a total differentiation period of 14 days.







24

[0192] After the differentiation period (14 days), the อะดิโพไซต์ were challenged with
extensive casein ไฮโดรไลเซต at different concentrations (0.01%, 0.1% and 1%, respectively) for
24 h. See figure 1 for a schematic overview of the in vitro human primary adipocyte cultures assay.
อะดิโพเนคติน release upon casein ไฮโดรไลเซต stimulation
[0193] The isolated human preอะดิโพไซต์ were carefully counted and the same cell number per well was plated. After the differentiation period, the cells are treated with casein ไฮโดรไลเซต at 0.01%, 0.1% and 1%. After 24 h, the supernatants were collected and stored at -20°C for analysis of อะดิโพไคน์ content with an ELISA kit.
[0194] The ELISA kits includes a plate with wells that are coated with a primary antibody against human อะดิโพเนคติน. The supernatants are added and after the appropriate incubation time, the sample is washed so that only the อะดิโพไคน์ bound to the antibody is left. Another buffer containing the secondary antibody conjugated with HRP is added to the wells. After the indicated incubation time, the excess of secondary antibody is removed by washing and the remaining HRP bound to the อะดิโพไคน์-antibody complex reacts when adding the TMB buffer. The reaction is stopped by adding an acidic solution and the reacting yellow colour is
measured. The absorbance is proportional to the yellow colour which indicates the presence of the อะดิโพไคน์ of interest. A standard curve is obtained by plotting the concentration of the
standards versus their absorbances, interpolating from the standard curve the concentration of อะดิโพไคน์ in the sample is calculated.
[0195] The kits included a standard of human recombinant อะดิโพเนคติน used to calculate the อะดิโพเนคติน concentration. Moreover, the kits include a Quality control high and low standards with known concentrations. The kit for อะดิโพเนคติน ELISA recognizes natural and recombinant human อะดิโพเนคติน (full length, mutation-modified trimer only forming and globular domain).
[0196] Once the incubation conditions were validated, and unspecific effects of the milk
fractions alone were discarded, we assessed the อะดิโพเนคติน secretion in the supernatants of the อะดิโพไซต์ previously stimulated with casein ไฮโดรไลเซต.
[0197] A casein ไฮโดรไลเซต of the การเปิดเผยนี้ (APZ1) triggered a significant
upregulation of อะดิโพเนคติน secretion at 1%. (290.6 ± 56.6% vs. control, see figure), following a dose-dependent trend. The effect of the APZ1 fraction is independent of an single amino acid mixture (APAA6), the latter did not exert any significant effect on อะดิโพเนคติน secretion. See figure 2 showing the results of อะดิโพเนคติน secretion of อะดิโพไซต์ upon stimulation of
hydrolasate (APZ1) or single acid amino acid mixture (APAA6).
Example 2
[0198] The effect of casein ไฮโดรไลเซต (APZ-1) on อะดิโพเนคติน secretion and intracellular expression was evaluated in primary human อะดิโพไซต์ was investigated. As depicted in Figure 3, APZ-1 (1%) combined with ARA:DHA (100 OM:50DM) does not appear to enhance อะดิโพเนคติน secretion by primary human อะดิโพไซต์ when compared to LCPUFA's in the
absence of APZ-1 when measured at 24 hours. However, Figure 4 shows that APZ-1







25

combined with ARA:DHA (100 ❑M:50❑M) does synergistically increase อะดิโพเนคติน
intracellular expression by human primary อะดิโพไซต์ compared to the effect of LC-PUFAs in the absence of APZ-1 at 24 hours. Since อะดิโพเนคติน expression is seen at 24 hours, it is therefore possible that อะดิโพเนคติน secretion by the อะดิโพไซต์ would be increased at a later time point.
[0199] The effect of a high fat diet (HFD) supplemented with a casein ไฮโดรไลเซต and
DHA/ARA, along with oral gavage การให้ of LGG on the development of risk factors for CVD and type 2 diabetes and the inflammatory state of adipose tissue was evaluated. Low fat diet (LFD) and high fat diet (HFD) fed mice were used as references. The effect of the above formulation was compared to a HFD + phosphate buffered saline (PBS) gavage control group to control for the repeated oral gavage treatment with LGG.
[0200] The treatment of mice with a high fat diet supplemented with a casein ไฮโดรไลเซต and DHA/ARA with LGG gavage (NHLL) showed beneficial effects compared to the HFD with PBS gavage control mice. As seen in Figure 5, mice given a high fat diet supplemented with NHLL demonstrated an increase in serum อะดิโพเนคติน levels. Additional specific beneficial effects included lower body weight gain despite an increased food intake, Lower body weight gain, despite an increased food intake, body adiposity was strongly reduced, lower fasting
insulin, lower plasma cholesterol, lower plasma triglycerides, lower Serum Amyloid A (SAA;
systemic inflammation marker), lower microalbuminurea (suggesting improved kidney function), lower mesenteric and inguinal fat mass, strongly diminished epididymal fat inflammation, lower liver mass and circulating alanine aminotransferase (ALT) levels, improved histopathology, and reduced inflammation.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ยังมีส่ง [0182] การเปิดเผยนี้จะไปเพปไทด์ที่ประกอบด้วยเศษเสี้ยวของไฮโดรไลเซตเคซีนเพื่อใช้ในการเรียกใช้อะดิโพเนคติน[0183] ปัจจุบันยังโดยตรงไปเลือกจากไฮโดรไลเซตเคซีนสำหรับใช้ในการรักษาน้ำหนักสุขภาพ โดยการให้เปปซึ่งประกอบรวมด้วยเป็นองค์ประกอบที่เลือกจากไฮโดรไลเซตเคซีนเปปไทด์[0184] ปัจจุบันยังโดยตรงไปเลือกจากไฮโดรไลเซตเคซีนสำหรับใช้ในการลดความเสี่ยงของหัวใจวายโดยการให้เปปซึ่งประกอบรวมด้วยเป็นองค์ประกอบที่เลือกจากไฮโดรไลเซตเคซีนเปปไทด์[0185] ในรุรุที่ควรใช้ของของมันรุรุและ/หรือการเปิดเผยนี้เป็นความเข้มข้นของพลาสมาของอะดิโพเนคตินจะเพิ่มขึ้น ควรพลาสม่าความเข้มข้นของ อะดิโพเนคตินมีการปรับเปลี่ยนไประหว่าง 5-10 mg/ml[0186] ในรุรุที่ควรใช้ของของมันรุรุและ/หรือการเปิดเผยนี้ที่เปปซึ่งประกอบรวมด้วยองค์ประกอบที่เลือกจากไฮโดรไลเซตเคซีนจะมีคุณค่าทางโภชนาการ บทประพันธ์ในรุรุที่ควรใช้ของ [0187] ของมันรุรุและ/หรือการเปิดเผยนี้ไฮโดรไลเซตเคซีนเป็นของวัวนมไฮโดรไลเซต[0188] ในรุรุที่ควรใช้ของของมันรุรุและ/หรือของการเปิดเผยนี้ไฮโดรไลเซตเป็นไฮโดรไลเซตที่มีเปปไทด์นมวัวที่ผ่านการไฮโดรไลซ์อย่างสูงการ [0189] embodiments ต้องวิธีการของมันรุรุและ/หรือการเปิดเผยก็ได้ต้อง embodiments ของไฮโดรไลเซตเคซีนเพื่อใช้ในการเปิดใช้งาน อะดิโพเนคติน สำหรับใช้ในการรักษาสุขภาพน้ำหนัก และ/หรือใช้ในการลดความเสี่ยงของหัวใจวาย[0190] การเปิดเผยเป็นตอนนี้ exemplified อย่างไม่จำกัดตัวอย่างตัวอย่างที่ 1:แยก adipocyte และวัฒนธรรม[0191] ใต้เปลวกล่าว จาก lean มีสุขภาพดี หรือปานกลางภาวะหญิงที่ผ่าตัดศัลยกรรม ขั้นตอนได้รับการอนุมัติ โดยคณะกรรมการจริยธรรมของไฮน์ริช-Heine-มหาวิทยาลัย (ดึสเซลดอร์ฟ เยอรมนี) Preอะดิโพไซต์ ได้ แยกต่างหาก โดยย่อยอาหาร collagenase แยกเซลล์ขี้ถูก resuspended ใน DMEM/F12 สื่อเสริม ด้วย 10% FCS, seeded ใน ทั้ง 6 หรือ 12 ดีวัฒนธรรมอาหาร ตามลำดับ และรักษาที่ 37° C กับ 5% CO2 หลังจากถึงบรรจบ (วัน 0 สร้างความแตกต่าง), เซลล์ที่วัฒนธรรมถูก incubated incubated ในตัว adipocyte สร้างความแตกต่าง (DMEM/F12 ไบโอติน 33 มม. 17 mmol/l d-panthothenic-กรด 66 nM อินซูลิน 1 nM triiodo - L-thyronine, 100 nM cortisol, 10 mg/ml อาโป transferrin, gentamycin 50 mg/ml, 0.25 mg/ml amphotericin B, 15 มม. HEPES, 14 nM NaHCO3, pH 7.4) กับ troglitazone (17.00 น) 3 วัน เมื่อเริ่มสร้างความแตกต่าง เซลล์ได้ต่อไป incubated ใน adipocyte ขนาดกลางสร้างความแตกต่างด้วยการเปลี่ยนแปลงขนาดทุก 2-3 วันเป็นเวลา 14 วันรวมสร้างความแตกต่าง 24[0192] หลังจากช่วงสร้างความแตกต่าง (14 วัน), อะดิโพไซต์ถูกท้าทายด้วยเคซีนอย่างละเอียดไฮโดรไลเซตที่ความเข้มข้นแตกต่างกัน (0.01%, 0.1% และ 1% ตามลำดับ) สำหรับ24 ชม ดูรูปที่ 1 ภาพรวมแผนผังตัวอย่างของการวิเคราะห์วัฒนธรรมใน adipocyte หลักมนุษย์อะดิโพเนคตินปล่อยเมื่อกระตุ้นไฮโดรไลเซตเคซีน[0193] preอะดิโพไซต์ มนุษย์แยกอย่างระมัดระวังนับได้ และจำนวนเซลล์เดียวต่อดีถูกชุบ หลังจากรอบระยะเวลาการสร้างความแตกต่าง เซลล์จะรักษา ด้วยไฮโดรไลเซตเคซีนที่ 0.01%, 0.1% และ 1% หลังจาก 24 ชม supernatants ถูกรวบรวม และจัดเก็บที่-20 ° C สำหรับการวิเคราะห์เนื้อหาที่อะดิโพไคน์มีชุดการ ELISA[0194] ELISA ชุดรวมจานกับบ่อที่เคลือบ ด้วยแอนติบอดีหลักกับมนุษย์อะดิโพเนคติน เพิ่ม supernatants และหลังจากการบ่มที่เหมาะสม ตัวอย่างคราบเพื่อให้เหลือเฉพาะอะดิโพไคน์กับแอนติบอดีที่ บัฟเฟอร์อื่นประกอบด้วยแอนติบอดีรองกลวง มี HRP จะถูกเพิ่มลงในบ่อ หลังจากบ่มระบุ เกินของแอนติบอดีรองจะถูกลบออก โดยการซักผ้า และ HRP ที่เหลือผูกไว้กับที่แอนติบอดีอะดิโพไคน์ซับซ้อนปฏิกิริยาเพิ่มบัฟเฟอร์ทหารไทย หยุดปฏิกิริยา โดยการเพิ่มในโซลูชันที่เปรี้ยว และมีสีเหลืองปฏิกิริยาวัด Absorbance ที่เป็นสัดส่วนกับสีเหลืองซึ่งบ่งชี้สถานะของอะดิโพไคน์น่าสนใจ เส้นโค้งมาตรฐานจะได้รับ โดยการพล็อตความเข้มข้นของการ มาตรฐานเทียบกับ absorbances ของพวกเขา interpolating จากเส้นโค้งมาตรฐานความเข้มข้นของอะดิโพไคน์ในตัวอย่างจะคำนวณ[0195] ชุดการรวมของอะดิโพเนคติน recombinant ที่มนุษย์ใช้ในการคำนวณความเข้มข้นอะดิโพเนคติน นอกจากนี้ ชุดรวมตัวควบคุมคุณภาพสูงและมาตรฐานต่ำ มีความเข้มข้นที่รู้จัก ชุดสำหรับอะดิโพเนคติน ELISA รู้จักธรรมชาติ และ recombinant มนุษย์อะดิโพเนคติน (แบบยาว ขึ้นรูปเฉพาะ trimer ปรับเปลี่ยนกลายพันธุ์ และโดเมน globular) [0196] เมื่อเงื่อนไขบ่มถูกตรวจ และ unspecific ลักษณะของน้ำนม เศษคนเดียวถูกละทิ้ง เราประเมินหลั่งอะดิโพเนคตินในการ supernatants ของอะดิโพไซต์ขาวกระตุ้นก่อนหน้านี้กับเคซีนไฮโดรไลเซตไฮโดรไลเซตเคซีน [0197] A ของการเปิดเผยนี้ (APZ1) ถูกทริกเกอร์เป็นสำคัญupregulation ของหลั่งอะดิโพเนคติน 1% (290.6 ± 56.6% เทียบกับควบคุม ดูรูป), ต่อไปนี้เป็นแนวโน้มขึ้นอยู่กับปริมาณ ผลของเศษส่วน APZ1 ไม่ขึ้นอยู่กับส่วนผสมกรดอะมิโนเดี่ยว (APAA6) จะได้ไม่แรงหลั่งอะดิโพเนคตินผลใด ๆ อย่างมีนัยสำคัญ ดูรูปที่ 2 แสดงผลจากการหลั่งอะดิโพเนคตินของอะดิโพไซต์เมื่อมีการกระตุ้นของ hydrolasate (APZ1) หรือกรดอะมิโนกรดเดี่ยวผสม (APAA6)ตัวอย่างที่ 2[0198] ผลของเคซีนไฮโดรไลเซต (APZ-1) หลั่งอะดิโพเนคตินและ intracellular นิพจน์ถูกประเมินในหลักอะดิโพไซต์มนุษย์ถูกสอบสวน ตามที่แสดงในรูปที่ 3, APZ-1 (1%) รวมกับ ARA: ดีเอชเอ (100 ออม: 50 DM) ไม่ เพิ่มการหลั่งอะดิโพเนคตินตามหลักมนุษย์อะดิโพไซต์เมื่อเทียบกับ LCPUFA ในการ ขาด APZ-1 เมื่อวัดที่ 24 ชั่วโมง อย่างไรก็ตาม รูปที่ 4 แสดง APZ-1 ที่ 25รวมกับ ARA: ดีเอชเอ (100 ❑M:50❑M) เป็นเพิ่มอะดิโพเนคตินนิพจน์ intracellular โดยมนุษย์อะดิโพไซต์หลักเปรียบเทียบกับผลของ LC PUFAs ของ APZ 1 ใน 24 ชั่วโมง เนื่องจากนิพจน์อะดิโพเนคตินจะเห็นได้ที่ตลอด 24 ชั่วโมง มันจึงเป็นไปได้ที่จะเพิ่มการหลั่งอะดิโพเนคติน โดยอะดิโพไซต์ที่ในเวลาภายหลัง[0199] ผลของอาหารไขมันสูง (HFD) เสริม ด้วยไฮโดรไลเซตเคซีน และดีเอ ชเอ/ARA กับการให้ gavage ปากของ LGG พัฒนาปัจจัยเสี่ยงผิว CVD และรัฐเปลวอักเสบโรคเบาหวานชนิดที่ 2 ที่ประเมิน อาหารไขมันต่ำ (LFD) และอาหารไขมันสูง (HFD) เลี้ยงหนูได้ใช้เป็นข้อมูลอ้างอิง ผลของการกำหนดข้างต้นถูกเปรียบเทียบกับการ HFD + ฟอสเฟต buffered saline (PBS) gavage ควบคุมกลุ่มควบคุมรักษา gavage ปากซ้ำกับ LGG[0200] หนูกับอาหารไขมันสูงการรักษาเสริม ด้วยไฮโดรไลเซตเคซีน และดีเอ ชเอ/ARA มี gavage LGG (NHLL) แสดงให้เห็นว่าผลประโยชน์ที่เปรียบเทียบกับ HFD ด้วย PBS gavage ควบคุมเมาส์ เท่าที่เห็นในรูปที่ 5 หนูให้อาหารไขมันสูงเสริม ด้วย NHLL แสดงให้เห็นว่าการเพิ่มขึ้นของระดับ serum อะดิโพเนคติน ผลประโยชน์เฉพาะเพิ่มเติมรวมต่ำกว่าร่างกายน้ำหนักแม้ มีการรับประทานอาหารเพิ่มขึ้น ลดลงร่างกายน้ำหนัก แม้ มีการรับประทานอาหารเพิ่มขึ้น ร่างกาย adiposity ถูกขอลด ลง ต่ำกว่าการถือศีลอดเซรั่มแอมีลอยด์ (SAA ลดอินซูลิน ไขมันพลาสม่าต่ำกว่า ต่ำกว่าพลาสม่าระดับไตรกลีเซอไรด์อักเสบระบบเครื่องหมาย), ล่าง microalbuminurea (แนะนำฟังก์ชันไตดีขึ้น), ลดมวลไขมัน mesenteric และ inguinal ขอลดลงไขมันอักเสบ epididymal ลดมวลตับและการหมุนเวียนระดับ aminotransferase (ALT) อะลานีน จุลพยาธิวิทยาปรับปรุง และลดการอักเสบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

[0182] การเปิดเผยนี้เป็นผู้กำกับยังเปปไทด์ที่มีส่วนของเคซีนไฮโดรไลเซตสำหรับใช้ในการเปิดใช้งานอะดิโพเนคติน.
[0183] ปัจจุบันเป็นผู้กำกับยังเปปไทด์เลือกจากเคซีนไฮ โดรไลเซตสำหรับการใช้งานในการรักษาน้ำหนักเพื่อสุขภาพโดยการให้องค์ประกอบซึ่งประกอบรวมด้วยเปปไทด์เลือกจากเคซีนไฮโดรไลเซต.
[0184] ปัจจุบันเป็นผู้กำกับยังเปปไทด์เลือกจากเคซีนไฮโดรไลเซตสำหรับใช้ในการ ช่วยลดความเสี่ยงของโรคหัวใจโดยการให้องค์ประกอบซึ่งประกอบรวมด้วยเปปไทด์เลือกจากเคซีนไฮโดรไลเซต.
[0185] ในรุรุที่ควรใช้ของการเปิดเผยนี้และ / หรือรุรุของมันเข้มข้นในพลาสมาของอะดิ โพเนคตินเพิ่มขึ้น โดยเฉพาะอย่างยิ่งความเข้มข้นในพลาสมาของ
อะดิโพเนคตินมีการปรับระหว่าง 5-10 มก. / มล.
[0186] ในรุรุที่ควรใช้ของการเปิดเผยนี้และ / หรือรุรุของมันองค์ประกอบซึ่งประกอบรวมด้วยเปปไทด์ที่เลือกจาก เคซีนไฮโดรไลเซตเป็นทางโภชนาการ
องค์ประกอบ.
[0187] ในรุรุที่ควรใช้ของการเปิดเผยนี้และ / หรือรุรุของมันเคซีนไฮโดรไลเซตเป็นนมวัวไฮโดรไลเซต.
[0188] ในรุรุ ที่ควรใช้ของการเปิดเผยนี้และ / หรือรุรุของมันไฮโดรไลเซตคือ
embodiments ที่ต้องการของวิธีการของการเปิดเผยและ / หรือรุรุของมันเป็นที่ต้องการ embodiments ยังเคซีนไฮโดรไลเซตสำหรับใช้ในการเปิดใช้งาน
อะดิโพเนคตินสำหรับการใช้งานในการรักษาน้ำหนักเพื่อสุขภาพและ / หรือสำหรับการใช้งาน . ในการลดความเสี่ยงของโรคหัวใจ
[0190] การเปิดเผยเป็นตัวอย่างในขณะนี้โดยไม่ จำกัด ตัวอย่างต่อไปนี้.
ตัวอย่าง
ตัวอย่างที่ 1:
การแยก adipocyte และวัฒนธรรม
[0191] เนื้อเยื่อไขมันใต้ผิวหนังที่ได้รับจากลีนที่ดีต่อสุขภาพในระดับปานกลางหรือ
ผู้หญิงที่มีน้ำหนักเกินในระหว่างการทำศัลยกรรมพลาสติก . ขั้นตอนที่ได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการจริยธรรมของเฮ็น Heine-มหาวิทยาลัย (Dusseldorf, เยอรมนี) ก่อนอะดิโพไซต์ที่ถูก
แยกออกจากการย่อยอาหารคอลลา เม็ดเซลล์ที่แยกถูก resuspended ใน DMEM / F12
เสริมขนาดกลางที่มี 10% FCS เมล็ดในหกดีหรือ 12 ดีอาหารวัฒนธรรม
ตามลำดับและเก็บรักษาไว้ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสมี CO2 5% หลังจากที่ไปถึงจุดบรรจบ (วันที่ 0 ของ
ความแตกต่าง) เซลล์ถูกบ่มฟักในกลางความแตกต่าง adipocyte (DMEM / F12, ไบโอติน 33 มิลลิ 17 มิลลิโมล / ลิตร D-panthothenic กรด 66 นาโนเมตรอินซูลิน 1 นาโนเมตร triiodo-L-
thyronine , คอร์ติซอ 100 นาโนเมตร 10 mg / ml APO-transferrin 50 mg / ml Gentamycin, 0.25 mg / ml
amphotericin B 15 มิลลิ HEPES 14 นาโนเมตร NaHCO3 ค่า pH 7.4) ที่มี troglitazone (17:00) เป็นเวลา 3 วัน เมื่อความแตกต่างเริ่มต้นเซลล์ถูกบ่มต่อไปในกลางความแตกต่างกับการเปลี่ยนแปลง adipocyte กลางทุก 2-3 วันในช่วงเวลาที่แตกต่างกันรวม 14 วัน. 24 [0192] หลังจากช่วงเวลาที่แตกต่างกัน (14 วัน), อะดิโพไซต์ถูกท้าทาย กับเคซีนที่กว้างขวางไฮโดรไลเซตที่ความเข้มข้นแตกต่างกัน (0.01%, 0.1% และ 1% ตามลำดับ) สำหรับ24 ชั่วโมง ดูรูปที่ 1 สำหรับภาพรวมของวงจรในหลอดทดลองมนุษย์ adipocyte ทดสอบวัฒนธรรมหลัก. อะดิโพเนคตินเปิดตัวเมื่อเคซีนไฮโดรไลเซตกระตุ้น[0193] ก่อนมนุษย์แยกอะดิโพไซต์นับอย่างระมัดระวังและจำนวนเซลล์เดียวกัน ต่อกันได้รับการชุบ หลังจากช่วงเวลาที่แตกต่างของเซลล์จะรับการรักษาด้วยเคซีนไฮโดรไลเซตที่ 0.01%, 0.1% และ 1% หลังจาก 24 ชั่วโมง, supernatants ถูกเก็บรวบรวมและเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียสสำหรับการวิเคราะห์อะดิโพไคน์เนื้อหาที่มีชุด ELISA. [0194] ชุด ELISA รวมถึงแผ่นที่มีหลุมที่มีการเคลือบด้วยแอนติบอดีหลักกับมนุษย์อะ ดิโพเนคติน supernatants มีการเพิ่มและหลังจากเวลาการบ่มที่เหมาะสมตัวอย่างล้างเพื่อให้เฉพาะอะดิโพไคน์ที่ถูกผูกไว้เพื่อแอนติบอดีที่เหลือ บัฟเฟอร์อีกที่มีแอนติบอดีรองผันกับ HRP ถูกเพิ่มลงในหลุม หลังจากที่เวลาบ่มระบุ, ส่วนที่เกินจากรองแอนติบอดีจะถูกลบออกโดยการล้างและ HRP เหลือผูกไว้กับอะดิโพไคน์ -antibody ปฏิกิริยาที่ซับซ้อนเมื่อมีการเพิ่มบัฟเฟอร์ทหารไทย ปฏิกิริยาที่จะหยุดการทำงานโดยการเพิ่มวิธีการแก้ปัญหาที่เป็นกรดและสีเหลืองเป็นปฏิกิริยาวัด การดูดกลืนแสงเป็นสัดส่วนกับสีเหลืองซึ่งแสดงให้เห็นการปรากฏตัวของอะดิโพไคน์ที่น่าสนใจ กราฟมาตรฐานจะได้รับโดยการวางแผนความเข้มข้นของมาตรฐานเมื่อเทียบกับ absorbances ของพวกเขา interpolating จากกราฟมาตรฐานความเข้มข้นของอะดิโพไคน์ในกลุ่มตัวอย่างที่มีการคำนวณ. [0195] รวมชุดมาตรฐานของ recombinant มนุษย์อะดิโพเน คตินที่ใช้ในการคำนวณอะดิโพเนคตินมีความเข้มข้น นอกจากนี้ชุดรวมถึงการควบคุมคุณภาพมาตรฐานสูงและต่ำที่มีความเข้มข้นที่รู้จักกัน ชุดสำหรับอะดิโพเนคติน ELISA ตระหนักถึงธรรมชาติของมนุษย์และ recombinant อะดิโพเนคติน (ความยาวเต็มรูปแบบ trimer การกลายพันธุ์ที่ปรับเปลี่ยนเพียงโดเมนการขึ้นรูปและทรงกลม). [0196] เมื่อเงื่อนไขการบ่มได้ผ่านการตรวจสอบและผลกระทบของ unspecific นมเศษส่วนคนเดียวถูกโยนทิ้งเราประเมินอะดิโพเนคตินหลั่งใน supernatants ของอะดิโพไซต์กระตุ้นก่อนหน้านี้กับเคซีนไฮโดรไลเซต. [0197] เคซีนไฮโดรไลเซตของการเปิดเผยนี้ ( APZ1) เรียกอย่างมีนัยสำคัญupregulation ของอะดิโพเนคตินหลั่งที่ 1% (290.6 ± 56.6% เทียบกับการควบคุมดูรูป) ดังต่อไปนี้แนวโน้มปริมาณขึ้นอยู่กับ ผลของส่วน APZ1 เป็นอิสระจากกรดอะมิโนส่วนผสมเดียว (APAA6) หลังไม่ได้ออกแรงใด ๆ ผลต่ออะดิโพเนคตินหลั่ง ดูรูปที่ 2 แสดงผลของอะดิโพเนคตินหลั่งของอะดิโพไซต์เมื่อการกระตุ้นของhydrolasate (APZ1) หรือกรดเดี่ยวผสมกรดอะมิโน (APAA6). ตัวอย่างที่ 2 [0198] ผลของเคซีนไฮโดรไลเซต ( APZ-1) ในอะดิโพเนคตินหลั่งและการแสดงออกในเซลล์ได้รับการประเมินในเบื้องต้นของมนุษย์อะดิโพไซต์ถูกตรวจสอบ ในฐานะที่เป็นที่ปรากฎในรูปที่ 3 APZ-1 (1%) รวมกับ ARA: ดีเอชเอ (100 OM: 50DM) ไม่ปรากฏขึ้นเพื่อเพิ่มอะดิโพเนคตินหลั่งโดยมนุษย์หลักอะดิโพไซต์เมื่อเทียบกับ LCPUFA ในกรณีที่ไม่มี ของ APZ-1 เมื่อวัดที่ 24 ชั่วโมง แต่รูปที่ 4 แสดงให้เห็นว่า APZ-1 25 รวมกับ ARA: ดีเอชเอ (100 ❑M: 50❑M) ไม่ร่วมเพิ่มอะดิโพเนคตินการแสดงออกในเซลล์ของมนุษย์โดยหลักอะดิโพไซต์เมื่อเทียบกับผลกระทบของ LC-PUFAs ในกรณีที่ไม่มี APZ-1 ที่ 24 ชั่วโมง ตั้งแต่อะดิโพเนคตินจะเห็นการแสดงออกที่ 24 ชั่วโมงมันจึงเป็นไปได้ว่าอะดิโพเนคตินหลั่งโดยอะดิโพไซต์จะเพิ่มขึ้นที่จุดเวลาต่อมา. [0199] ผลกระทบจากการที่มีไขมันสูง อาหาร (HFD) เสริมด้วยเคซีนไฮโดรไลเซตและDHA / ARA พร้อมกับติดชื้อนานในช่องปากของการให้ LGG ในการพัฒนาปัจจัยเสี่ยงต่อโรคหลอดเลือดหัวใจและโรคเบาหวานชนิดที่ 2 และรัฐอักเสบของเนื้อเยื่อไขมันถูกประเมิน อาหารที่มีไขมันต่ำ (LFD) และอาหารที่มีไขมันสูง (HFD) หนูที่เลี้ยงถูกนำมาใช้เป็นข้อมูลอ้างอิง ผลกระทบของการกำหนดดังกล่าวข้างต้นเมื่อเทียบกับเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ HFD + (พีบีเอส) กลุ่มควบคุมเพื่อควบคุมการติดชื้อนานสำหรับการรักษาติดชื้อนานซ้ำปากกับ LGG. [0200] การรักษาของหนูกับการรับประทานอาหารที่มีไขมันสูงเสริมด้วยเคซีนไฮโดร ไลเซตและ DHA / ARA กับติดชื้อนาน LGG (NHLL) แสดงให้เห็นว่าผลประโยชน์เมื่อเทียบกับ HFD กับการควบคุมหนูติดชื้อนานพีบีเอส เท่าที่เห็นในรูปที่ 5 หนูที่ได้รับอาหารที่มีไขมันสูงเสริมด้วย NHLL แสดงให้เห็นถึงการเพิ่มขึ้นของซีรั่มอะดิโพเนคตินระดับ ผลประโยชน์เพิ่มเติมที่เฉพาะเจาะจงรวมน้ำหนักตัวที่ลดลงแม้จะมีการรับประทานอาหารที่เพิ่มขึ้นน้ำหนักตัวลดลงแม้จะมีการรับประทานอาหารที่เพิ่มขึ้นร่างกายอ้วนก็ลดลงอย่างมากการอดอาหารลดลงอินซูลินคอเลสเตอรอลต่ำกว่าพลาสม่า, พลาสม่าไตรกลีเซอไรด์ลดลงต่ำกว่าเซรั่ม Amyloid (สมาคมนักวิเคราะห์หลักทรัพย์ ; เครื่องหมายการอักเสบของระบบ) microalbuminurea ที่ต่ำกว่า (แนะนำการปรับปรุงการทำงานของไต) mesenteric ลดลงและมวลไขมันขาหนีบลดลงอย่างมาก epididymal อักเสบไขมันมวลตับลดลงและการไหลเวียนของอะลานีน aminotransferase (ALT) ระดับพยาธิสภาพที่ดีขึ้นและการอักเสบลดลง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

0182 ] N [ การเปิดเผยนี้ก็เข้าสู่ส่วนของเคซีนเปปไทด์ที่มีไฮโดรไลเซตเพื่อใช้ในการเปิดใช้งานอะดิโพเนคติน .
[ 0183 ] ปัจจุบันยังมุ่งไปที่เลือกจากเคซีนเปปไทด์ไฮโดรไลเซตเพื่อใช้ในการรักษาน้ำหนักเพื่อสุขภาพ ,โดยการให้องค์ประกอบซึ่งประกอบรวมด้วยเปปไทด์ที่เลือกจากเคซีนไฮโดรไลเซต .
[ 0184 ] ปัจจุบันยังมุ่งไปที่เลือกจากเคซีนเปปไทด์ไฮโดรไลเซตเพื่อใช้ในการลดความเสี่ยงของโรคหัวใจโดยการให้องค์ประกอบซึ่งประกอบรวมด้วยเปปไทด์ที่เลือกจากเคซีนไฮโดรไลเซต .
[ 0185 ] ในรุรุที่ควรใช้ของที่การเปิดเผยนี้และ / ค็อครุรุของมันความเข้มข้นของพลาสมาอะดิโพเนคตินเพิ่มขึ้น โดยเฉพาะพลาสมาเข้มข้น
อะดิโพเนคตินปรับระหว่าง 5-10 มก. / มล.
[ 0186 ] ในรุรุที่ควรใช้ของที่การเปิดเผยนี้และ / ค็อครุรุของมันองค์ประกอบซึ่งประกอบรวมด้วยเปปไทด์ที่เลือกจากเคซีนไฮโดรไลเซตเป็นโภชนาการ

[ 0187 ] ในรุรุที่ควรใช้ของที่การเปิดเผยนี้และ / ค็อครุรุของมันเคซีนไฮโดรไลเซตเป็นไฮโดรไลเซตนมของวัว .
[ 0188 ] ในรุรุที่ควรใช้ของที่การเปิดเผยนี้และ / ค็อครุรุของมันที่ไฮโดรไลเซตเป็นไฮโดรไลเซตที่มีเปปไทด์นมวัวที่ผ่านการไฮโดรไลซ์อย่างสูง .
[ 0189 ] embodiments ที่ต้องการของวิธีการของการเปิดเผยและ / ค็อครุรุของมันยังต้องการ embodiments ของเคซีนไฮโดรไลเซตเพื่อใช้ในการเปิดใช้งาน
อะดิโพเนคติน สำหรับใช้ในการรักษาน้ำหนักเพื่อสุขภาพและ / หรือเพื่อใช้ในการลดความเสี่ยงของโรคหัวใจ .
[ 0190 ] การเปิดเผยตอนนี้ exemplified โดยไม่จำกัดตัวอย่างต่อไปนี้ ตัวอย่างที่ 1 :


ตัวอย่างแยกอะดิโปซัยท์และวัฒนธรรม
[ ] 0191 เนื้อเยื่อไขมันใต้ผิวหนังได้จากสุขภาพผอมหรืออ้วนปานกลาง
ผู้หญิงที่ได้รับการผ่าตัดพลาสติก ขั้นตอนที่ได้รับการอนุมัติโดยคณะกรรมการจริยธรรมของไฮน์ริช ไฮน์ มหาวิทยาลัยดึสเซลดอร์ฟ ประเทศเยอรมนี )ก่อนอะดิโพไซต์ถูก
แยกโดยการย่อยคอลลาเจน . แยกเซลล์เม็ดถูก resuspended ใน dmem / F12
เติม 10% FCS , เมล็ด 6 หรือ 12 ดี วัฒนธรรมอาหาร
ตามลำดับ และรักษาไว้ที่อุณหภูมิ 37 องศา C คาร์บอนไดออกไซด์ 5% หลังจากถึงบรรจบ ( วันที่ 0
ความแตกต่าง ) เซลล์วัฒนธรรมถูกบ่มเชื้อในการขนาดกลาง ( dmem / F12 อะดิโปซัยท์ ,ไบโอติน 33 มม. 17 มิลลิโมล / ลิตร d-panthothenic-acid 66 nm อินซูลิน 1 nm triiodo-l -
thyronine 100 nm cortisol , 10 mg / ml อาโปได้รับ 50 มก. / มล. เจนตาไมซิน , 0.25 มก. / มล.
amphotericin B , ฮีเปสโซเดี่ยม 15 มม. 14 nm , pH 7.4 ) กับโทรกลีทาโซน ( 5 ทุ่ม ) 3 วัน