Histological staining and counting

Histological staining and counting of blastocyst inner cell mass icM) and trophectderm(TE) cells differentially with chromatin-specific dyes is a more accurate indicator of cultured blastocyst quality and normality than total cell number assessment. The aim of this study was to test the encctiveness of a simplified method of chemically defined differential blastosyst staining. The TE of cultured mouse and bovine blastocysts of different developmental stages was stained when blastocysts were treated with a permeabiluing solution containing the ionie detergent Triton X-100 and the fluorochrome propidium iodide. Blastocysts were then incubated in a second solution containing 100% cthanol(for fixation) and the secondary fluorochrome bisbenzimide. Fixed and stained whole blastocysts were mounted and assessed for cell number using ultraviolet fluorescent m roscopy. Using this method, in-vitro cultured mouse blastocysts(day 4.5) were shown to have an ICM:TE ratio ol 12.63 with an average total cell count of 753 t 3. While day 7 and 8 in-vitro produced bovine blastocysts were shown to have an ICM TE ratio of 13.42 and 13.36 with an average total cell count of 151.3 t 5.48 and 217.8 8.75 respectively. Blastocyst staining pattems indicate that this modified technique represents a simple and reliable altemative to current bishromatic blastocyst staining techniques for the differential assessment of cell numbers and may be useful for the assessment of blastocysts derived from in vitro maturation. novel culture systems and advanced reproductive technologies such as cloning.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ย้อมสี และการนับภายในบลาสโตซิสท์สรีรวิทยาเซลล์มวล icM) และเซลล์ trophectderm(TE) differentially ด้วยสีเฉพาะโครมาตินเป็นตัวบ่งชี้ที่แม่นยำมากขึ้นคุณภาพอดีตอ่างและ normality กว่าเซลล์ผลรวมเลขประเมิน จุดมุ่งหมายของการศึกษานี้คือการ ทดสอบ encctiveness ของวิธีการง่ายของ blastosyst ส่วนกำหนดสารเคมีย้อมสี ติของเมาส์อ่างและ blastocysts วัวของขั้นตอนการพัฒนาที่แตกต่างกันที่สีเมื่อ blastocysts ได้รับการรักษา ด้วยโซลูชั่น permeabiluing ที่ประกอบด้วยผงซักฟอก ionie ไตรตั้น X 100 และไอโอไดด์ propidium fluorochrome Blastocysts มีแล้ว incubated ในโซลูชันที่สองประกอบด้วย 100% cthanol(for fixation) และ bisbenzimide fluorochrome รอง Blastocysts ทั้งถาวร และทิ้งคราบติดตั้ง และประเมินเลขเซลล์โดยใช้รังสีอัลตราไวโอเลตฟลูออเรส m roscopy ใช้วิธีนี้ blastocysts เมาส์เครื่องอ่าง (วัน 4.5) ได้แสดงให้เป็น ICM:TE อัตรา ol 12.63 มีการนับเซลล์ผลรวมเฉลี่ยของ 753 t 3 ในขณะที่วันที่ 7 และ 8 เครื่องผลิตวัว blastocysts ได้แสดงมีอัตราการติ ICM 13.42 และ 13.36 กับการตรวจนับเซลล์ผลรวมเฉลี่ยของ 151.3 t 5.48 และ 217.8 8.75 ตามลำดับ อดีตย้อมสี pattems บ่งชี้ว่า เทคนิคนี้ปรับเปลี่ยนแสดง altemative ง่าย และเชื่อถือได้ bishromatic อดีตปัจจุบันที่เทคนิคสำหรับการประเมินส่วนที่แตกต่างของจำนวนเซลล์ที่ย้อมสี และอาจจะมีประโยชน์สำหรับการประเมิน blastocysts มาจากพ่อแม่การเพาะเลี้ยง ระบบวัฒนธรรมนวนิยายและเทคโนโลยีการเจริญพันธุ์ที่ทันสมัยเช่นโคลน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การย้อมสีเนื้อเยื่อและการนับของตัวอ่อนมวลเซลล์ชั้นใน ICM) และ trophectderm (TE) เซลล์ที่แตกต่างด้วยสีโครมาเฉพาะเป็นตัวบ่งชี้ความถูกต้องแม่นยำมากขึ้นในการเพาะเลี้ยงตัวอ่อนที่มีคุณภาพและปกติกว่าการประเมินจำนวนเซลล์ทั้งหมด วัตถุประสงค์ของการศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อทดสอบ encctiveness วิธีการที่เรียบง่ายของการกำหนดทางเคมีย้อมสี blastosyst ความแตกต่าง TE เมาส์และเพาะเลี้ยงตัวอ่อนวัวของขั้นตอนการพัฒนาที่แตกต่างกันได้รับการย้อมสีเมื่อตัวอ่อนได้รับการรักษาด้วยสารละลาย permeabiluing มีผงซักฟอก Ionie Triton X-100 และไอโอไดด์สารเรืองแสง Propidium blastocysts ถูกบ่มแล้วในการแก้ปัญหาที่สองที่มี cthanol% (สำหรับการตรึง) 100 และ bisbenzimide สารเรืองแสงรอง คงที่และตัวอ่อนทั้งสีได้รับการติดตั้งและการประเมินจำนวนเซลล์โดยใช้รังสีอัลตราไวโอเลตเรืองแสงเมตร roscopy ใช้วิธีนี้ในหลอดทดลองเพาะเลี้ยงตัวอ่อนเมาส์ (วัน 4.5) ได้รับการแสดงที่มี ICM อัตราส่วน TE OL 12.63 มีจำนวนเซลล์เฉลี่ยรวมของ 753 T 3. ในขณะที่วันที่ 7 และ 8 ในหลอดทดลองการผลิตตัวอ่อนวัวถูกแสดงให้เห็นว่า มีอัตราส่วน ICM TE 13.42 และ 13.36 มีจำนวนเซลล์เฉลี่ยรวมของ 151.3 T 5.48 และ 8.75 ตามลำดับ 217.8 pattems การย้อมสีอ่อนแสดงให้เห็นว่าเทคนิคการปรับเปลี่ยนนี้เป็นแก้วนำแสงที่ง่ายและน่าเชื่อถือในปัจจุบันเทคนิคการย้อมสีอ่อน bishromatic สำหรับการประเมินความแตกต่างของตัวเลขของเซลล์และอาจเป็นประโยชน์สำหรับการประเมินของตัวอ่อนที่ได้จากการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อเจริญ ระบบวัฒนธรรมใหม่และเทคโนโลยีการสืบพันธุ์ขั้นสูงเช่นการโคลน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผลการศึกษานับของตัวอ่อนภายในมวลเซลล์ ICM ) และ trophectderm ( TE ) เซลล์ต่างกันด้วยสีเฉพาะการเป็นยิ่งบ่งชี้คุณภาพของตัวอ่อนเลี้ยงและปกติกว่าการประเมินจำนวนเซลล์ทั้งหมด จุดมุ่งหมายของการศึกษานี้เพื่อทดสอบ encctiveness ของง่ายวิธีเคมีนิยามอนุพันธ์ blastosyst stainingte เมาส์เลี้ยงวัวโตและพัฒนาการต่าง ๆของขั้นตอนที่ถูกย้อมสี เมื่อโตเป็น permeabiluing รักษาด้วยโซลูชั่นที่มี ionie ผงซักฟอก Triton X-100 และฟลู โรโครม propidium ไอโอไดด์ . ขึ้นมาแล้วบ่มในสารละลายที่มี cthanol ที่สอง 100% ( สำหรับการตรึง ) และมัธยมฟลู โรโครม bisbenzimide .คงที่และเปื้อนติดทั้งโตและประเมินจำนวนเซลล์การเรืองแสงอัลตราไวโอเลต M roscopy . การใช้วิธีนี้ ในการเพาะเลี้ยงเมาส์บลาสโตซีส ( วัน 4.5 ) ถูกแสดงให้มี ICM : Te อัตราส่วน ol 12.63 เฉลี่ยรวมนับเซลล์ของค่า t 3 เมื่อวันที่ 7 และ 8 ในหลอดทดลองผลิตวัวโตถูกแสดงให้มีสัดส่วนและ ICM เต้คิด 1336 เฉลี่ยรวมนับเซลล์ของ 151.3 T และ 5.48 217.8 8.75 ตามลำดับ การศึกษาบ่งชี้ว่าตัวอ่อนจำนวนนี้เทคนิคดัดแปลงเป็นง่ายและเชื่อถือได้ใน ปัจจุบัน bishromatic ดีมีคุณค่าตัวอ่อนวิธีการทดสอบสำหรับการประเมินค่าของตัวเลขในเซลล์ และอาจเป็นประโยชน์สำหรับการประเมินโตมาจากการบ่มระบบวัฒนธรรมใหม่และเทคโนโลยีการสืบพันธุ์ขั้นสูง เช่น การโคลน .