typical laboratory FPLC consist of

typical laboratory FPLC consist of one or two high-precision pumps, a control unit, a column, a detection system and a fraction collector. Although it is possible to operate the system manually, the components are normally linked to a personal computer or, in older units, a microcontroller.

1. Pumps: GE/Pharmacia systems utilize two two-cylinder piston pumps, one for each buffer, combining the output of both in a mixing chamber. Waters systems use a single peristaltic pump which draws both buffers from separate reservoirs through a proportioning valve and mixing chamber. In either case the system allows the fraction of each buffer entering the column to be continuously varied. The flow rate can go from a few milliliters per minute in bench-top systems to liters per minute for industrial scale purifications. The wide flow range makes it suitable both for analytical and preparative chromatography.

2. Injection loop: A segment of tubing of known volume which is filled with the sample solution before it is injected into the column. Loop volume can range from a few microliters to 50ml or more.

3. Injection valve: A motorized valve which links the mixer and sample loop to the column. Typically the valve has three positions for loading the sample loop, for injecting the sample from the loop into the column, and for connecting the pumps directly to the waste line to wash them or change buffer solutions. The injection valve has a sample loading port through which the sample can be loaded into the injection loop, usually from a hypodermic syringe using a Luer-lock connection.

4. Column: The column is a glass or plastic cylinder packed with beads of resin and filled with buffer solution. It is normally mounted vertically with the buffer flowing downward from top to bottom. A glass frit at the bottom of the column retains the resin beads in the column while allowing the buffer and dissolved proteins to exit.

5. Flow Cells: The effluent from the column passes through one or more flow cells to measure the concentration of protein in the effluent (by UV light absorption at 280nm). The conductivity cell measures the buffer conductivity, usually in millisiemens/cm, which indicates the concentration of salt in the buffer. A flow cell which measures pH of the buffer is also commonly included. Usually each flow cell is connected to a separate electronics module which provides power and amplifies the signal.

6. Monitor/Recorder: The flow cells are connected to a display and/or recorder. On older systems this was a simple chart recorder, on modern systems a computer with hardware interface and display is used. This permits the experimenter to identify when peaks in protein concentration occur, indicating that specific components of the mixture are being eluted.

7. Fraction collector: The fraction collector is typically a rotating rack that can be filled with test tubes or similar containers. It allows samples to be collected in fixed volumes, or can be controlled to direct specific fractions detected as peaks of protein concentration, into separate containers.

Many systems include various optional components. A filter may be added between the mixer and column to minimize clogging. In large FPLC columns the sample may be loaded into the column directly using a small peristaltic pump rather than an injection loop. When the buffer contains dissolved gas, bubbles may form as pressure drops where the buffer exits the column; these bubbles create artifacts if they pass through the flow cells. This may be prevented by degassing the buffers, or by adding a flow restrictor downstream of the flow cells to maintain a pressure of 1-5 bar in the effluent line.[3]

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ห้องปฏิบัติการทั่วไป FPLC ประกอบด้วยหนึ่ง หรือสองปั๊มความแม่นยำสูง หน่วยควบคุม คอลัมน์ ระบบตรวจสอบ และเก็บเศษ แม้ว่าการทำงานระบบด้วยตนเอง ส่วนประกอบปกติเชื่อมโยง ไปยังคอมพิวเตอร์ส่วนบุคคล หรือ เก่า หน่วย ไมโครคอนโทรลเลอร์

1 ปั๊ม: GE/Pharmacia ระบบใช้ประโยชน์จากสองลูกสูบสองสูบปั๊ม หนึ่งสำหรับแต่ละบัฟเฟอร์ รวมทั้งในห้องผสมของ ระบบน้ำใช้ปั๊ม peristaltic เดียวซึ่งวาดทั้งบัฟเฟอร์จากแยกอ่างเก็บน้ำผ่านวาล์วการจัดสัดส่วนและผสมหอการค้า ระบบช่วยให้เศษส่วนแต่ละบัฟเฟอร์ที่ป้อนคอลัมน์จะแตกต่างกันอย่างต่อเนื่องในกรณีใด อัตราการไหลสามารถไปจาก milliliters กี่ต่อนาทีในระบบด้านบนม้านั่งลิตรต่อนาทีในขนาดอุตสาหกรรม purifications ช่วงกระแสที่กว้างทำให้มันเหมาะทั้งสำหรับวิเคราะห์ และ preparative chromatography

2 วนฉีด: ส่วนของท่อเสียงชื่อดังซึ่งเต็มไป ด้วยตัวอย่างวิธีแก้ไขก่อนที่จะถูกฉีดเข้าไปในคอลัมน์ เสียงลูปสามารถช่วงจากกี่ microliters 50ml หรือมากกว่า

3 วาล์วฉีด: วาล์วเครื่องซึ่งวนผสมและตัวอย่างการเชื่อมโยงไปยังคอลัมน์ โดยปกติแล้ววาล์วมีสามตำแหน่ง สำหรับการโหลดอย่างลูป injecting จากลูปตัวอย่างลงในคอลัมน์ และ สำหรับปั๊มเชื่อมต่อโดยตรงไปยังบรรทัดเสียล้าง หรือเปลี่ยนแปลงแก้ไขปัญหาบัฟเฟอร์ วาล์วฉีดมีตัวอย่างโหลดพอร์ตซึ่งตัวอย่างสามารถโหลดลงในลูปฉีด ปกติจากเข็มฉีดยาที่ใช้เชื่อมต่อ Luer ล็อคยังอยู่

4 คอลัมน์: คอลัมน์เป็นแก้วหรือพลาสติกถังเต็มไป ด้วยลูกปัดเรซิ่น และเต็มไป ด้วยโซลูชันบัฟเฟอร์ มันเป็นปกติติดแนวตั้งกับบัฟเฟอร์ไหลลงจากบนลงล่าง Frit แก้วที่ด้านล่างของคอลัมน์เก็บลูกปัดเรซิ่นในคอลัมน์ขณะให้บัฟเฟอร์ และโปรตีนเพื่อจบการทำงานส่วนยุบ

5 กระแสเซลล์: น้ำจากคอลัมน์ผ่านอย่าง น้อยหนึ่งเซลล์ไหลการวัดความเข้มข้นของโปรตีนในน้ำ (โดย UV แสงดูดซึมที่ 280nm) เซลล์นำมาตรการนำบัฟเฟอร์ มักจะอยู่ใน millisiemens/cm ซึ่งบ่งชี้ความเข้มข้นของเกลือในบัฟเฟอร์ เซลล์กระแสที่วัดค่า pH ของบัฟเฟอร์อยู่โดยทั่วไป โดยปกติแล้วเซลล์แต่ละขั้นตอนเชื่อมต่อกับโมดูลอิเล็กทรอนิกส์แยกต่างหากซึ่งมีอำนาจ และกำลังโคจรอยู่ซึ่งสัญญาณ

6 ตรวจสอบ/บันทึก: เซลล์กระแสมีการเชื่อมต่อเพื่อแสดงผลหรือบันทึก ระบบเก่า นี้ถูกบันทึกเป็นแผนภูมิอย่างง่าย ในระบบที่ทันสมัย เป็นใช้คอมพิวเตอร์ที่ มีฮาร์ดแวร์อินเทอร์เฟซและแสดง นี้อนุญาตให้ experimenter ระบุเมื่อเกิดขึ้นยอดเขาในความเข้มข้นของโปรตีน บ่งชี้ว่า ส่วนประกอบเฉพาะของส่วนผสมจะถูก eluted.

7 เก็บรวบรวมเศษ: เก็บเศษจะชั้นหมุนที่สามารถเติมหลอดทดสอบหรือภาชนะบรรจุคล้ายกัน ให้ตัวอย่างจะเก็บในไดรฟ์ข้อมูลถาวร หรือสามารถควบคุมให้ส่วนเฉพาะตรงที่ตรวจพบว่าเป็นระดับความเข้มข้นโปรตีน ลงในภาชนะแยกต่างหาก

หลายระบบรวมส่วนประกอบเพิ่มเติมต่าง ๆ อาจจะเพิ่มตัวกรองระหว่างการผสมและคอลัมน์ดีไม่ตัน ในคอลัมน์ FPLC ใหญ่ อาจโหลดตัวอย่างลงในคอลัมน์โดยตรงโดยใช้การปั๊ม peristaltic เล็กมากกว่าวงการฉีด เมื่อบัฟเฟอร์ประกอบด้วยก๊าซละลาย ฟองอาจจัดเป็นความดันหยดที่บัฟเฟอร์ออกจากคอลัมน์ ฟองเหล่านี้สร้างสิ่งประดิษฐ์ถ้าพวกเขาผ่านเซลล์กระแส นี้อาจป้องกันได้ โดยการ degassing บัฟเฟอร์ หรือโดยการเพิ่มการไหล restrictor น้ำเซลล์ไหลรักษาความดัน 1-5 บาร์ในบรรทัดน้ำทิ้ง[3]

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

fplc ห้องปฏิบัติการโดยทั่วไปประกอบด้วยหนึ่งหรือสองปั๊มความแม่นยำสูงหน่วยควบคุมคอลัมน์, ระบบการตรวจสอบและเก็บส่วน แม้ว่ามันจะเป็นไปได้ในการใช้งานระบบด้วยตนเององค์ประกอบที่มีการเชื่อมโยงปกติไปยังคอมพิวเตอร์ส่วนบุคคลหรือในหน่วยเก่าไมโครคอนโทรลเลอร์1 เครื่องสูบน้ำระบบ GE / Pharmacia ใช้สองปั๊มลูกสูบสองกระบอกหนึ่งสำหรับแต่ละบัฟเฟอร์รวมการส่งออกของทั้งสองในห้องผสม ระบบน้ำใช้ปั๊ม peristaltic เดียวที่ดึงบัฟเฟอร์ทั้งจากอ่างเก็บน้ำแยกผ่านวาล์วสัดส่วนและห้องผสม ในทั้งสองกรณีระบบช่วยให้ส่วนของแต่ละบัฟเฟอร์เข้าคอลัมน์ที่จะมีการเปลี่ยนแปลงอย่างต่อเนื่อง อัตราการไหลสามารถไปจากไม่กี่มิลลิลิตรต่อนาทีในระบบม้านั่งบนลงลิตรต่อนาทีสำหรับประเทืองระดับอุตสาหกรรม ช่วงไหลกว้างทำให้มันเหมาะทั้งสำหรับการวิเคราะห์และการจัดเตรียมร2 ห่วงฉีด: ส่วนของท่อของปริมาณที่รู้จักกันซึ่งเต็มไปด้วยสารละลายตัวอย่างก่อนที่มันจะถูกฉีดเข้าไปในคอลัมน์ ปริมาณห่วงสามารถช่วงจาก microliters ไม่กี่ 50ml หรือมากกว่า3 วาล์วหัวฉีด: วาล์วมอเตอร์ไฟฟ้าที่เชื่อมโยงผสมและตัวอย่างห่วงกับคอลัมน์ โดยปกติวาล์วมีสามตำแหน่งสำหรับการโหลดห่วงตัวอย่างสำหรับการฉีดตัวอย่างจากวงลงในคอลัมน์และสำหรับการเชื่อมต่อเครื่องสูบน้ำโดยตรงกับสายของเสียเพื่อล้างพวกเขาหรือเปลี่ยนสารละลายบัฟเฟอร์ วาล์วหัวฉีดมีพอร์ตการโหลดตัวอย่างซึ่งตัวอย่างสามารถโหลดเป็นห่วงการฉีดมักจะมาจากเข็มฉีดยาใช้การเชื่อมต่อ Luer ล็อค4 คอลัมน์: คอลัมน์ที่เป็นแก้วหรือกระบอกพลาสติกเต็มไปด้วยลูกปัดเม็ดพลาสติกและเต็มไปด้วยสารละลายบัฟเฟอร์ มันเป็นเรื่องปกติที่มีการติดตั้งในแนวตั้งกันชนที่ไหลลงจากบนลงล่าง แหยงกระจกที่ด้านล่างของคอลัมน์คงลูกปัดเรซินในคอลัมน์ขณะที่ช่วยให้บัฟเฟอร์และละลายโปรตีนเพื่อออกจาก5 ไหลเซลล์: น้ำทิ้งจากคอลัมน์ผ่านหนึ่งหรือมากกว่าหนึ่งเซลล์ไหลในการวัดความเข้มข้นของโปรตีนในน้ำทิ้ง (โดยการดูดซึมแสงยูวีที่ 280nm) เซลล์การนำมาตรการการนำบัฟเฟอร์มักจะอยู่ใน millisiemens / cm ซึ่งบ่งบอกถึงความเข้มข้นของเกลือในบัฟเฟอร์ เซลล์ไหลซึ่งมาตรการค่า pH ของบัฟเฟอร์จะรวมกัน โดยปกติแต่ละเซลล์ไหลเชื่อมต่อกับโมดูลอิเล็กทรอนิกส์ที่แยกต่างหากซึ่งมีอำนาจและขยายสัญญาณที่6 ตรวจสอบ / บันทึก: เซลล์ไหลเชื่อมต่อกับจอแสดงผลและ / หรือบันทึก ในระบบเก่านี้เป็นบันทึกแผนภูมิอย่างง่ายในระบบที่ทันสมัยคอมพิวเตอร์ที่มีการติดต่อกับฮาร์ดแวร์และการแสดงผลที่ใช้ นี้อนุญาตให้ทดลองเพื่อระบุเมื่อยอดความเข้มข้นของโปรตีนที่เกิดขึ้นแสดงให้เห็นว่าองค์ประกอบที่เฉพาะเจาะจงของส่วนผสมที่ถูกชะ7 เก็บส่วน: เก็บส่วนโดยปกติจะเป็นชั้นวางหมุนที่สามารถจะเต็มไปด้วยหลอดทดลองหรือภาชนะที่คล้ายกัน จะช่วยให้กลุ่มตัวอย่างจะถูกเก็บรวบรวมไว้ในปริมาณคงที่หรือสามารถควบคุมได้โดยตรงเศษส่วนที่เฉพาะเจาะจงตรวจพบว่าเป็นยอดของความเข้มข้นโปรตีนลงในภาชนะที่แยกจากระบบจำนวนมากรวมถึงส่วนประกอบที่ไม่จำเป็นต่างๆ กรองอาจจะเพิ่มระหว่างมิกเซอร์และคอลัมน์เพื่อลดการอุดตัน ในคอลัมน์ fplc ขนาดใหญ่ตัวอย่างอาจจะโหลดลงในคอลัมน์โดยตรงโดยใช้เครื่องสูบน้ำขนาดเล็ก peristaltic มากกว่าห่วงฉีด เมื่อบัฟเฟอร์มีก๊าซที่ละลายฟองอาจเป็นหยดแรงดันที่กันชนออกจากคอลัมน์; ฟองอากาศเหล่านี้สร้างสิ่งประดิษฐ์ถ้าพวกเขาผ่านเซลล์ไหล นี้อาจจะป้องกันได้โดยการ degassing บัฟเฟอร์หรือโดยการเพิ่มการไหลเวียนของจิ๊ล่องไหลของเซลล์ในการรักษาความดัน 1-5 บาร์ในสายท่อน้ำทิ้ง [3].

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

fplc ห้องปฏิบัติการโดยทั่วไปประกอบด้วยหนึ่งหรือสองที่มีความแม่นยำสูง ปั๊ม , ชุดควบคุม , คอลัมน์ , ระบบตรวจจับและเศษส่วน Collector แม้ว่าจะเป็นไปได้ที่จะใช้งานระบบด้วยตนเอง องค์ประกอบที่เป็นปกติเชื่อมโยงกับคอมพิวเตอร์ส่วนตัวหรือในหน่วย แก่ไมโครคอนโทรลเลอร์ .

1 . ปั๊ม : GE / มุ่งมั่นระบบใช้สองสองกระบอกลูกสูบปั๊มหนึ่งสำหรับแต่ละบัฟเฟอร์รวมผลผลิตของทั้งสองผสมกันในหอ ระบบน้ำใช้เดียว peristaltic ปั๊มซึ่งวาดทั้งบัฟเฟอร์จากแยกแหล่งผ่านวิธีออกแบบวาล์วและห้องผสม . ในทั้งสองกรณีระบบช่วยให้สัดส่วนของแต่ละบัฟเฟอร์เข้าคอลัมน์จะแตกต่างกัน อย่างต่อเนื่องอัตราการไหลสามารถเข้าไปไม่กี่มิลลิลิตรต่อนาทีในระบบด้านบนม้านั่งลิตรต่อนาที purifications ขนาดอุตสาหกรรม ช่วงไหลกว้างทำให้มันเหมาะทั้งสำหรับวิเคราะห์และเตรียมา

2 ห่วงฉีด : ส่วนของท่อหรือปริมาณ ซึ่งเต็มไป ด้วยโซลูชันตัวอย่างก่อนที่จะฉีดเข้าไปในคอลัมน์เสียงลูปสามารถช่วงจากไม่กี่ตัวเลขถึง 50 หรือมากกว่า

3 วาล์ว : วาล์วฉีดเครื่องยนต์ การเชื่อมโยงที่ผสมและห่วงตัวอย่างคอลัมน์ โดยปกติวาล์วได้สามตำแหน่งโหลดตัวอย่างห่วงสำหรับการนำตัวอย่างจากลูปลงในคอลัมน์ และเชื่อมต่อกับปั๊มโดยตรงเสียสายล้างหรือเปลี่ยนสารละลายบัฟเฟอร์วาล์วฉีดมีตัวอย่างโหลดพอร์ตที่สามารถโหลดลงในห่วงจากเข็มฉีดยาฉีดมักจะใช้ LUER ล็อคการเชื่อมต่อ

4 . คอลัมน์ : คอลัมน์ที่เป็นแก้วหรือกระบอกพลาสติกบรรจุเม็ดเรซิ่นและเติมสารละลายบัฟเฟอร์ มันเป็นปกติที่ติดตั้งในแนวตั้งกับบัฟเฟอร์ ไหลลงจากบนลงล่างแก้วฟริตที่ด้านล่างของคอลัมน์รักษาลูกปัดเรซินในคอลัมน์ในขณะที่ให้บัฟเฟอร์และละลายโปรตีนที่จะออก

5 เซลล์การไหล : น้ำทิ้งจากคอลัมน์ผ่านหนึ่งหรือมากกว่าการไหลของเซลล์เพื่อวัดความเข้มข้นของโปรตีนในน้ำทิ้งโดยการดูดกลืนแสงยูวี ที่ 280nm ) วัดค่าการนําไฟฟ้าเฟอร์เซลล์ปกติใน millisiemens / เซนติเมตรซึ่งบ่งชี้ว่า ความเข้มข้นของเกลือในบัฟเฟอร์ การไหลของเซลล์ ซึ่งวัด pH ของบัฟเฟอร์โดยทั่วไปยังรวม โดยปกติแต่ละเซลล์ไหลเชื่อมต่อกับโมดูลแยก อิเล็กทรอนิกส์ ซึ่งมีอำนาจและขยายสัญญาณ

6 ตรวจสอบ / บันทึก : เซลล์ไหลเชื่อมต่อกับจอแสดงผลและ / หรือบันทึก ในระบบเก่านี้เป็นบันทึกแผนภูมิอย่างง่ายบนระบบคอมพิวเตอร์ที่มีอินเตอร์เฟซฮาร์ดแวร์และการแสดงที่ทันสมัยใช้ นี้อนุญาตให้ทดลองระบุเมื่อยอดเขาในความเข้มข้นโปรตีนเกิดขึ้นที่ระบุว่าองค์ประกอบที่เฉพาะเจาะจงของส่วนผสมที่ถูกตัวอย่าง

7 นักสะสม : เศษส่วนเศษส่วนสะสมปกติหมุนแร็คที่สามารถใส่ในหลอดทดลอง หรือ ภาชนะที่คล้ายกันมันช่วยให้ตัวอย่างจะถูกเก็บในการแก้ไขข้อมูล หรือสามารถควบคุมได้โดยตรง โดยเฉพาะ เศษส่วน ตรวจพบว่าเป็นยอดของความเข้มข้นของโปรตีน ในภาชนะแยก ระบบมากมาย

รวมถึงองค์ประกอบเสริมต่าง ๆ ตัวกรองอาจจะเพิ่มระหว่างการผสมและคอลัมน์เพื่อลดการอุดตันในคอลัมน์ fplc ขนาดใหญ่ตัวอย่างอาจจะโหลดลงในคอลัมน์โดยตรงโดยใช้ขนาดเล็ก peristaltic ปั๊มมากกว่าการฉีด ลูป เมื่อบัฟเฟอร์ที่มีก๊าซละลายฟองอากาศอาจฟอร์มเมื่อความดันลดลงที่บัฟเฟอร์ออกจากคอลัมน์ ; ฟองเหล่านี้สร้างสิ่งประดิษฐ์ถ้าพวกเขาผ่านเซลล์ไหล นี้อาจป้องกันได้โดย degassing บัฟเฟอร์ ,หรือโดยการเพิ่มการไหลตามน้ำของจิ๊กเซลล์ไหลเพื่อรักษาแรงดัน 5 บาร์ในบรรทัดน้ำ [ 3 ]