The emergence of resistant HIV stra

The emergence of resistant HIV strains, together with the severe side-effects of existing drugs and lack of development of effective anti-HIV vaccines highlight the need for novel antivirals, as well as innovative methods to facilitate their discovery. Here, we have developed an assay in T-cells to monitor the proteolytic activity of the HIV-1 protease (PR). The assay is based on the inducible expression of HIV-1 PR fused within the Gal4 DNA-binding and transactivation domains. The fusion protein binds to the Gal4 responsive element and activates the downstream reporter, enhanced green fluorescent protein (eGFP) gene only in the presence of an effective PR Inhibitor (PI). Thus, in this assay, eGFP acts as a biosensor of PR activity, making it ideal for flow cytometry based screening. Furthermore, the assay was developed using retroviral technology in T-cells, thus providing an ideal environment for the screening of potential novel PIs in a cell-type that represents the natural milieu of HIV infection. Clones with the highest sensitivity, and robust, reliable and reproducible reporter activity, were selected.The assay is easily adaptable to other PR variants, a multiplex platform, as well as to high-throughput plate reader based assays and will greatly facilitate the search for novel peptide and chemical compound based PIs in T-cells.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การเกิดขึ้นของเชื้อเอชไอวีสายพันธุ์ที่ทน พร้อมกับผลข้างเคียงรุนแรงที่มีอยู่ยาเสพติด และขาดการพัฒนาเน้นวัคซีนมีประสิทธิภาพป้องกันเชื้อเอชไอวีต้องนวนิยาย antivirals เป็นนวัตกรรมเพื่อความสะดวกในการค้นพบของพวกเขา ที่นี่ เราได้พัฒนาการวิเคราะห์ใน T เซลล์เพื่อตรวจสอบกิจกรรมย่อยโปรตีนโปรติเอสเอชไอวี-1 (PR) การทดสอบเป็นไปตามนิพจน์ inducible ประชาสัมพันธ์เอชไอวี-1 ที่หลอมรวมภายในโดเมนการรวมดีเอ็นเอ Gal4 และ transactivation โปรตีนฟิวชั่นผูกการตอบสนองต่อองค์ประกอบ Gal4 และเรียกใช้ปลาย reporter ยีนโปรตีนฟลูออเรสเซนต์สีเขียวเพิ่มขึ้น (eGFP) เฉพาะในที่มีประสิทธิภาพ PR ยับยั้ง (PI) ดังนั้น ในการทดสอบนี้ eGFP ทำหน้าที่เป็น biosensor ประชาสัมพันธ์กิจกรรม เหมาะสำหรับการคัดกรองตรวจวิเคราะห์เซลล์ตามกระแส นอกจากนี้ การทดสอบถูกพัฒนาโดยใช้เทคโนโลยี retroviral ใน T เซลล์ การให้สภาพแวดล้อมเหมาะสำหรับการคัดกรองของ PIs นวนิยายเกิดเป็นเซลล์ชนิดที่แสดงฤทธิ์ธรรมชาติของการติดเชื้อเอชไอวี คัดเลือกโคลนที่ มีความไวสูง และทนทาน เชื่อถือได้ และทำซ้ำได้ข่าวกิจกรรม ทดสอบการปรับให้ตัวแปรอื่น ๆ PR มัลติเพล็กซ์แพลตฟอร์ม เช่นเป็น assays คะแนนอ่านแผ่นความเร็วสูง และจะช่วยอำนวยความสะดวกค้นหานวนิยายเปปไทด์ และสารเคมีตาม PIs ในทีเซลล์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การเกิดขึ้นของเอชไอวีสายพันธุ์ทนร่วมกับผลข้างเคียงที่รุนแรงของยาเสพติดที่มีอยู่และขาดการพัฒนาวัคซีนป้องกันเอชไอวีที่มีประสิทธิภาพเน้นความจำเป็นในการต้านไวรัสนวนิยายเช่นเดียวกับวิธีการใหม่ที่จะอำนวยความสะดวกในการค้นพบของพวกเขา ที่นี่เราได้มีการพัฒนาในการทดสอบ T-เซลล์ในการตรวจสอบกิจกรรมโปรตีนของเชื้อ HIV-1 protease (PR) การทดสอบจะขึ้นอยู่กับการแสดงออก inducible ของเชื้อ HIV-1 PR หลอมละลายภายใน GAL4 ดีเอ็นเอผูกพันและ transactivation โดเมน โปรตีนฟิวชั่นผูกกับองค์ประกอบที่ตอบสนอง GAL4 และเปิดใช้งานนักข่าวปลายน้ำเพิ่มโปรตีนเรืองแสงสีเขียว (EGFP) ยีนเพียง แต่ในการปรากฏตัวของที่มีประสิทธิภาพยับยั้งการประชาสัมพันธ์ (PI) เดอะ ดังนั้นในการทดสอบนี้ EGFP ทำหน้าที่เป็นไบโอเซนเซอร์ของกิจกรรมการประชาสัมพันธ์ทำให้มันเหมาะสำหรับการไหลของ cytometry การตรวจคัดกรองตาม นอกจากนี้ การทดสอบได้รับการพัฒนาโดยใช้เทคโนโลยีไวรัสใน T-เซลล์จึงให้สภาพแวดล้อมที่เหมาะสำหรับการคัดกรองของปินวนิยายที่อาจเกิดขึ้นในเซลล์ชนิดที่แสดงถึงสภาพแวดล้อมทางธรรมชาติของการติดเชื้อเอชไอวี โคลนที่มีความไวสูงที่สุดและมีประสิทธิภาพและเชื่อถือได้และทำซ้ำกิจกรรมนักข่าวถูกทดสอบ selected.The เป็นได้อย่างง่ายดายปรับให้เข้ากับสายพันธุ์อื่น ๆ PR, แพลตฟอร์ม multiplex, เช่นเดียวกับที่สูงผ่านการตรวจตามอ่านแผ่นและจะช่วยอำนวยความสะดวกในการค้นหา เปปไทด์ที่แปลกใหม่และสารเคมีที่อยู่ในปิ T-เซลล์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การเกิดขึ้นของผู้ติดเชื้อเอชไอวีสายพันธุ์ทนกับผลข้างเคียงที่รุนแรงของยาเสพติดที่มีอยู่ และขาดการพัฒนาที่มีประสิทธิภาพต่อต้านวัคซีน HIV ที่จำเป็นสำหรับยาต้านใหม่ เป็นวิธีใหม่ที่จะอำนวยความสะดวกในการค้นพบของพวกเขา ที่นี่ เราได้พัฒนาไปใช้ในเซลล์เพื่อตรวจสอบกิจกรรมจำเพาะของเอนไซม์โปรตีเอส 1 ( PR ) ( ขึ้นอยู่กับการแสดงออก inducible ของ HIV-1 PR ฟิวส์ภายใน gal4 ดีเอ็นเอมัด และ transactivation โดเมน ส่วนของโปรตีนที่ผูกกับ gal4 ตอบสนององค์ประกอบและกระตุ้นผู้สื่อข่าวได้รับการเพิ่มโปรตีนเรืองแสงสีเขียว ( egfp ) ยีนต่อหน้าสารประชาสัมพันธ์มีประสิทธิภาพเท่านั้น ( PI ) ดังนั้นในการทดสอบนี้ egfp ทำหน้าที่เป็นไบโอเซนเซอร์ของกิจกรรมประชาสัมพันธ์ทำให้เหมาะสำหรับการไหลพื้นฐาน ( คัดกรอง นอกจากนี้ การทดสอบถูกพัฒนาโดยใช้เทคโนโลยี retroviral ในเซลล์จึงให้สภาพแวดล้อมที่เหมาะสำหรับการคัดกรองศักยภาพของนวนิยาย Pis ในเซลล์ชนิดที่แสดงถึงธรรมชาติที่สวยงามของการติดเชื้อเอชไอวี โคลนที่มีความไวสูง และทนทาน เชื่อถือได้ และกิจกรรม , นักข่าวซึ่งได้รับเลือก วิเคราะห์ สามารถปรับตัวได้กับตัวแปรอื่นๆ ประชาสัมพันธ์ เป็นแพลตฟอร์มระบบมัลติเพล็กซ์ ตลอดจนช่วยอ่านป้ายตามวิธีและจะช่วยอำนวยความสะดวกในการค้นหาเปปไทด์และสารเคมีที่ใช้ในนวนิยายด้านผิวหนัง .