5. การจำแนกชนิดแบคทีเรียของข้าวโพดด

5. การจำแนกชนิดแบคทีเรียของข้าวโพดด้วยไพรเมอร์จำเพาะ
นำแบคทีเรียแกรมลบที่ผ่านการพิสูจน์การเป็นเชื้อสาเหตุโรคจากข้อ 1 และ ข้อ 3 จำแนกชนิดด้วยเทคนิค Bio- PCR โดยใช้เชื้อ Pantoea ananatis pv. ananatis จาก stock culture ภาควิชาโรคพืชและ สำนักวิจัยพัฒนาการอารักขาพืช กรมวิชาการเกษตรเป็นไอโซเลตเปรียบเทียบ โดยใช้ไพรเมอร์จำเพาะบริเวณ ITS regionของ P. ananatis (PanITS sn2b 5’ GTCTGATAGAAAGAAAAGAAG3’ และ PanITS as2b 5’ TTCATATCACCTTACCG
GCGC3’)(Coutinho et al., 2002) โดยทำปฏิกิริยาในปริมาตรรวม 25 ไมโครลิตร (ดีเอ็นเอ 25 ng ,dNTPs 1 mM ,Taq DNA polymerase enzyme 1 unit ,MgCl2 2.5 mM ,ไพรเมอร์ดังกล่าว 1 µM ,10X PCR buffer 2.5 µl และนํ้ากลั่นนึ่งฆ่าเชื้อ) กำหนดปฏิกิริยา PCR ของไพรเมอร์ดังนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

5
1 และข้อ 3 จำแนกชนิดด้วยเทคนิค PCR Bio- โดยใช้เชื้อ Pantoea ananatis pv ananatis จากวัฒนธรรมหุ้นภาควิชาโรคพืชและสำนักวิจัยพัฒนาการอารักขาพืช โดยใช้ไพรเมอร์จำเพาะบริเวณภูมิภาคของพี ananatis (PanITS sn2b 5 'GTCTGATAGAAAGAAAAGAAG3' และ PanITS as2b 5 'TTCATATCACCTTACCG
GCGC3') (โปรตุเกส et al., 2002) โดยทำปฏิกิริยาในปริมาตรรวม 25 ไมโครลิตร (ดีเอ็นเอ 25 นาโนกรัม , dNTPs 1 มิลลิ, Taq เอนไซม์ดีเอ็นเอโพลิเมอร์ 1 หน่วย MgCl2 2.5 มิลลิ, ไพรเมอร์ดังกล่าว 1 ไมครอน, 10X บัฟเฟอร์ PCR 2.5 ไมโครลิตรและนํ้ากลั่นนึ่งฆ่าเชื้อ) กำหนดปฏิกิริยา PCR ของไพรเมอร์ดังนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

5 . การจำแนกชนิดแบคทีเรียของข้าวโพดด้วยไพรเมอร์จำเพาะ
นำแบคทีเรียแกรมลบที่ผ่านการพิสูจน์การเป็นเชื้อสาเหตุโรคจากข้อ 1 และข้อ 3 จำแนกชนิดด้วยเทคนิคไบโอ - PCR โดยใช้เชื้อ pantoea ananatis PV .ananatis จากหุ้นวัฒนธรรมภาควิชาโรคพืชและสำนักวิจัยพัฒนาการอารักขาพืชกรมวิชาการเกษตรเป็นไอโซเลตเปรียบเทียบโดยใช้ไพรเมอร์จำเพาะบริเวณของภูมิภาคของหน้า ananatis ( panits sn2b 5 ' ' 5 ' gtctgatagaaagaaaagaag3 และ panits as2b ttcatatcaccttaccg
gcgc3 ' ) ( coutinho et al . ,2002 ) โดยทำปฏิกิริยาในปริมาตรรวม 25 ไมโครลิตร ( ดีเอ็นเอ 25 ng dntps 1 มิลลิเมตร ทัค เอนไซม์ DNA polymerase 1 หน่วย , MgCl2 2.5 มม. ไพรเมอร์ดังกล่าว 1 µ M , 10x PCR บัฟเฟอร์ 2.5 µผมและนํ้ากลั่นนึ่งฆ่าเชื้อ ) กำหนดปฏิกิริยา PCR ของไพรเมอร์ดังนี้