- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
ซึ่ง ประกอบรวมด้วย a scaffold selec
ซึ่ง ประกอบรวมด้วย a scaffold selected from, but not limited to, the group consisting of CTLA-4, lipocallin, SpA, an
affibody, an avimer, GroEl and fibronectin (see W02008096158 for disclosure of these binding
domains). Conjugating refers to a composition ซึ่ง ประกอบรวมด้วย โพลีเปปไทด์, dAb or antagonist of the
disclosure that is bonded (covalently or noncovalently) to a binding domain such as a binding
domain that binds serum albumin.
10 In another รูปลักษณะ, the binding domain may be a โพลีเปปไทด์ domain such as an
Albumin Binding Domain (ABD) or a small molecule which binds albumin (reviewed, for example in Chapter 14, pages 269-283 and Chapter 15, pages 285-296, "Therapeutic Proteins: Strategies to Modulate Their Plasma Half-Lives" Edited by Roland Kontermann, Wiley-Blackwell, 2012, ISBN: 978-
3-527-32849-9).
15 In one รูปลักษณะ, there is provided a fusion protein ซึ่ง ประกอบรวมด้วย an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน
in accordance with the การประดิษฐ์ and an anti-serum albumin or anti-neonatal Fc รีเซปเตอร์ antibody or antibody fragment.
The long half-life of IgG antibodies is reported to be dependent on its binding to FcRn.
Therefore, substitutions that increase the binding affinity of IgG to FcRn at pH 6.0 while maintaining 20 the pH dependence of the interaction by engineering the บิบิคงที่ have been extensively
studied (Ghetie et al., Nature Biotech. 15: 637-640, 1997; Hinton et al., JBC 279: 6213-6216, 2004;
Dall'Acqua et al.,
10 J Immunol 117: 1129-1138, 2006). Another means of modifying โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน
of the การประดิษฐ์นี้ involves increasing the in-vivo half life of such proteins by modification of 25 the อิมมูโนโกลบูลิน constant domain or FcRn (Fc รีเซปเตอร์ neonate) binding domain.
In adult mammals, FcRn, also known as the neonatal Fc รีเซปเตอร์, plays a key role in maintaining serum antibody levels by acting as a protective รีเซปเตอร์ that binds and salvages antibodies of the IgG ไอโซไทป์ from degradation. IgG molecules are endocytosed by endothelial cells,
and if they bind to FcRn, are recycled out into circulation. In contrast, IgG molecules that do not 30 bind to FcRn enter the cells and are targeted to the lysosomal pathway where they are degraded.
The neonatal FcRn รีเซปเตอร์ is believed to be involved in both antibody clearance and the transcytosis across tissues (see Junghans R.P (1997) Immunol.Res 16. 29-57 and Ghetie et al (2000) Annu.Rev.Immunol. 18, 739-766). Human IgG1 เรซิดิว determined to interact directly with
human FcRn รวมถึง 11e253, Ser254, Lys288, Thr307, G1n311, Asn434 and His435. Switches at any 35 of these positions described in this section may enable increased serum half-life and/or altered
เอฟเฟคเตอร์ properties of โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of the การประดิษฐ์.
โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of the การประดิษฐ์นี้ may have amino acid modifications that increase the affinity of the constant domain or fragment thereof for FcRn. Increasing the half-life of therapeutic and diagnostic IgG's and other bioactive molecules has many benefits ที่รวมถึง reducing
the amount and/or frequency of dosing of these molecules. In one รูปลักษณะ there is therefore 5 provided an antigen binding according to the การประดิษฐ์ provided herein or a fusion protein
ซึ่ง ประกอบรวมด้วย all or a portion (an FcRn binding portion) of an IgG constant domain having one or more
of these amino acid modifications and a non-IgG protein or non-protein molecule conjugated to such
a modified IgG constant domain, โดยที่ the presence of the modified IgG constant domain
increases the in vivo half life of the โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน.
10 PCT Publication No. WO 00/42072 discloses a โพลีเปปไทด์ ซึ่ง ประกอบรวมด้วย a รูปแปรผัน Fc region
with altered FcRn binding affinity, which โพลีเปปไทด์ ประกอบรวมด้วยs an amino acid modification at any one or more of amino acid positions 238, 252, 253, 254, 255, 256, 265, 272, 286, 288, 303, 305,
307, 309, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 386,388, 400, 413, 415, 424,433,
434,435, 436, 439, and 447 of the Fc region, โดยที่ the numbering of the เรซิดิว in the Fc region
15 is that of the EU index (Kabat et al).
PCT Publication No. WO 02/060919 A2 discloses a modified IgG ซึ่ง ประกอบรวมด้วย an IgG constant domain ซึ่ง ประกอบรวมด้วย one or more amino acid modifications relative to a wild-type IgG constant domain, โดยที่ the modified IgG has an increased half-life compared to the half-life of an IgG having the wild-type IgG constant domain, and โดยที่ the one or more amino acid modifications
20 are at one or more of positions 251, 253, 255, 285-290, 308-314, 385-389, and 428-435.
Shields et al. (2001, 3 Biol Chem ; 276:6591-604) used alanine scanning mutagenesis to
alter เรซิดิว in the Fc region of a human IgG1 antibody and then assessed the binding to human
FcRn. Positions that effectively abrogated binding to FcRn when changed to alanine รวมถึง 1253,
S254, H435, and Y436. Other positions showed a less pronounced reduction in binding as follows: 25 E233-G236, R255, K288, L309, S415, and H433. Several amino acid positions exhibited an
improvement in FcRn binding when changed to alanine; notable among these are P238, T256, E272,
V305, T307, Q311, D312, K317, D376, E380, E382, S424, and N434. Many other amino acid
positions exhibited a slight improvement (D265, N286, V303, K360, Q362, and A378) or no change
(S239, K246, K248, D249, M252, E258, T260, S267, H268, S269, D270, K274, N276, Y278, D280, 30 V282, E283, H285, T289, K290, R292, E293, E294, Q295, Y296, N297, 5298, R301, N315, E318,
K320, K322, S324, K326, A327, P329, P331, E333, K334, T335, S337, K338, K340, Q342, R344,
E345, Q345, Q347, R356, M358, T359, K360, N361, Y373, S375, S383, N384, Q386, E388, N389,
N390, K392, L398, S400, D401, K414, R416, Q418, Q419, N421, V422, E430, T437, K439, S440,
S442, S444, and K447) in FcRn binding.
35 The most pronounced effect was found for combination รูปแปรผันs with improved binding to
FcRn. At pH 6.0, the E380A/N434A รูปแปรผัน showed over 8-fold better binding to FcRn, relative to native IgG1, compared with 2-fold for E380A and 3.5-fold for N434A. Adding T307A to this effected
21
a 12-fold improvement in binding relative to native IgG1. In one รูปลักษณะ the antigen binding
protein of the การประดิษฐ์ ประกอบรวมด้วยs the E380A/N434A mutations and has increased binding to FcRn.
Dall'Acqua et al. (2002, J Immunol.;169:5171-80) described random mutagenesis and
screening of human IgG1 hinge-Fc fragment phage display libraries against mouse FcRn. They 5 disclosed random mutagenesis of positions 251, 252, 254-256, 308, 309, 311, 312, 314, 385-387,
389, 428, 433, 434, and 436. The major improvements in IgG1-human FcRn complex stability occur in substituting เรซิดิว located in a band across the Fc-FcRn interface (M252, S254, T256, H433, N434, and Y436) and to lesser extend substitutions of เรซิดิว at the periphery like V308, L309,
Q311, G385, Q386, P387, and N389. The รูปแปรผัน with the highest affinity to human FcRn was 10 obtained by combining the M252Y/S254T/T256E and H433K/N434F/Y436H mutations and exhibited
a 57-fold increase in affinity relative to the wild-type IgG1. The in vivo behaviour of such a mutated
human IgG1 exhibited a nearly 4-fold increase in serum half-life in cynomolgus monkey as
compared to wild-type IgG1.
The การประดิษฐ์นี้ therefore provides a รูปแปรผัน of an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน with
15 optimized binding to FcRn. In a preferred รูปลักษณะ, the said รูปแปรผัน of an antigen binding
protein ประกอบรวมด้วยs at least one amino acid modification in the Fc region of said antigen binding
protein, โดยที่ said modification is selected from the group consisting of 226, 227, 228, 230, 231,
233, 234, 239, 241, 243, 246, 250, 252, 256, 259, 264, 265, 267, 269, 270, 276, 284, 285, 288,
289, 290, 291, 292, 294, 297, 298, 299, 301, 302, 303, 305, 307, 308, 309, 311, 315, 317, 320,
20 322, 325, 327, 330, 332, 334, 335, 338, 340, 342, 343, 345, 347, 350, 352, 354, 355, 356, 359,
360, 361, 362, 369, 370, 371, 375, 378, 380, 382, 384, 385, 386, 387, 389, 390, 392, 393, 394,
395, 396, 397, 398, 399, 400, 401 403, 404, 408, 411, 412, 414, 415, 416, 418, 419, 420, 421, 422, 424, 426, 428, 433, 434, 438, 439, 440, 443, 444, 445, 446 and 447 of the Fc region as compared to said parent โพลีเปปไทด์, โดยที่ the numbering of the amino acids in the Fc region is that of the
25 EU index in Kabat.
ในลักษณะ ต่อไป of the การประดิษฐ์ the modifications are M252Y/S254T/T256E.
Additionally, various publications describe methods for obtaining physiologically active
molecules whose half-lives are modified either by introducing an FcRn-binding โพลีเปปไทด์ into the
molecules (WO 97/43316; U.S. Patent N° 5,869,046; U.S. Patent N° 5,747,035; WO 96/32478; WO 30 91/14438) or by fusing the molecules with antibodies whose FcRn-binding affinities are preserved
but affinities for other Fc รีเซปเตอร์s have been greatly reduced (WO 99/43713) or fusing with FcRn
binding domains of antibodies (WO 00/09560; U.S. Patent N°4,703,039).
Although substitutions in the บิบิคงที่ are able to significantly improve the functions
of therapeutic IgG antibodies, substitutions in the strictly conserved บ
affibody, an avimer, GroEl and fibronectin (see W02008096158 for disclosure of these binding
domains). Conjugating refers to a composition ซึ่ง ประกอบรวมด้วย โพลีเปปไทด์, dAb or antagonist of the
disclosure that is bonded (covalently or noncovalently) to a binding domain such as a binding
domain that binds serum albumin.
10 In another รูปลักษณะ, the binding domain may be a โพลีเปปไทด์ domain such as an
Albumin Binding Domain (ABD) or a small molecule which binds albumin (reviewed, for example in Chapter 14, pages 269-283 and Chapter 15, pages 285-296, "Therapeutic Proteins: Strategies to Modulate Their Plasma Half-Lives" Edited by Roland Kontermann, Wiley-Blackwell, 2012, ISBN: 978-
3-527-32849-9).
15 In one รูปลักษณะ, there is provided a fusion protein ซึ่ง ประกอบรวมด้วย an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน
in accordance with the การประดิษฐ์ and an anti-serum albumin or anti-neonatal Fc รีเซปเตอร์ antibody or antibody fragment.
The long half-life of IgG antibodies is reported to be dependent on its binding to FcRn.
Therefore, substitutions that increase the binding affinity of IgG to FcRn at pH 6.0 while maintaining 20 the pH dependence of the interaction by engineering the บิบิคงที่ have been extensively
studied (Ghetie et al., Nature Biotech. 15: 637-640, 1997; Hinton et al., JBC 279: 6213-6216, 2004;
Dall'Acqua et al.,
10 J Immunol 117: 1129-1138, 2006). Another means of modifying โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน
of the การประดิษฐ์นี้ involves increasing the in-vivo half life of such proteins by modification of 25 the อิมมูโนโกลบูลิน constant domain or FcRn (Fc รีเซปเตอร์ neonate) binding domain.
In adult mammals, FcRn, also known as the neonatal Fc รีเซปเตอร์, plays a key role in maintaining serum antibody levels by acting as a protective รีเซปเตอร์ that binds and salvages antibodies of the IgG ไอโซไทป์ from degradation. IgG molecules are endocytosed by endothelial cells,
and if they bind to FcRn, are recycled out into circulation. In contrast, IgG molecules that do not 30 bind to FcRn enter the cells and are targeted to the lysosomal pathway where they are degraded.
The neonatal FcRn รีเซปเตอร์ is believed to be involved in both antibody clearance and the transcytosis across tissues (see Junghans R.P (1997) Immunol.Res 16. 29-57 and Ghetie et al (2000) Annu.Rev.Immunol. 18, 739-766). Human IgG1 เรซิดิว determined to interact directly with
human FcRn รวมถึง 11e253, Ser254, Lys288, Thr307, G1n311, Asn434 and His435. Switches at any 35 of these positions described in this section may enable increased serum half-life and/or altered
เอฟเฟคเตอร์ properties of โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of the การประดิษฐ์.
โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of the การประดิษฐ์นี้ may have amino acid modifications that increase the affinity of the constant domain or fragment thereof for FcRn. Increasing the half-life of therapeutic and diagnostic IgG's and other bioactive molecules has many benefits ที่รวมถึง reducing
the amount and/or frequency of dosing of these molecules. In one รูปลักษณะ there is therefore 5 provided an antigen binding according to the การประดิษฐ์ provided herein or a fusion protein
ซึ่ง ประกอบรวมด้วย all or a portion (an FcRn binding portion) of an IgG constant domain having one or more
of these amino acid modifications and a non-IgG protein or non-protein molecule conjugated to such
a modified IgG constant domain, โดยที่ the presence of the modified IgG constant domain
increases the in vivo half life of the โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน.
10 PCT Publication No. WO 00/42072 discloses a โพลีเปปไทด์ ซึ่ง ประกอบรวมด้วย a รูปแปรผัน Fc region
with altered FcRn binding affinity, which โพลีเปปไทด์ ประกอบรวมด้วยs an amino acid modification at any one or more of amino acid positions 238, 252, 253, 254, 255, 256, 265, 272, 286, 288, 303, 305,
307, 309, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 386,388, 400, 413, 415, 424,433,
434,435, 436, 439, and 447 of the Fc region, โดยที่ the numbering of the เรซิดิว in the Fc region
15 is that of the EU index (Kabat et al).
PCT Publication No. WO 02/060919 A2 discloses a modified IgG ซึ่ง ประกอบรวมด้วย an IgG constant domain ซึ่ง ประกอบรวมด้วย one or more amino acid modifications relative to a wild-type IgG constant domain, โดยที่ the modified IgG has an increased half-life compared to the half-life of an IgG having the wild-type IgG constant domain, and โดยที่ the one or more amino acid modifications
20 are at one or more of positions 251, 253, 255, 285-290, 308-314, 385-389, and 428-435.
Shields et al. (2001, 3 Biol Chem ; 276:6591-604) used alanine scanning mutagenesis to
alter เรซิดิว in the Fc region of a human IgG1 antibody and then assessed the binding to human
FcRn. Positions that effectively abrogated binding to FcRn when changed to alanine รวมถึง 1253,
S254, H435, and Y436. Other positions showed a less pronounced reduction in binding as follows: 25 E233-G236, R255, K288, L309, S415, and H433. Several amino acid positions exhibited an
improvement in FcRn binding when changed to alanine; notable among these are P238, T256, E272,
V305, T307, Q311, D312, K317, D376, E380, E382, S424, and N434. Many other amino acid
positions exhibited a slight improvement (D265, N286, V303, K360, Q362, and A378) or no change
(S239, K246, K248, D249, M252, E258, T260, S267, H268, S269, D270, K274, N276, Y278, D280, 30 V282, E283, H285, T289, K290, R292, E293, E294, Q295, Y296, N297, 5298, R301, N315, E318,
K320, K322, S324, K326, A327, P329, P331, E333, K334, T335, S337, K338, K340, Q342, R344,
E345, Q345, Q347, R356, M358, T359, K360, N361, Y373, S375, S383, N384, Q386, E388, N389,
N390, K392, L398, S400, D401, K414, R416, Q418, Q419, N421, V422, E430, T437, K439, S440,
S442, S444, and K447) in FcRn binding.
35 The most pronounced effect was found for combination รูปแปรผันs with improved binding to
FcRn. At pH 6.0, the E380A/N434A รูปแปรผัน showed over 8-fold better binding to FcRn, relative to native IgG1, compared with 2-fold for E380A and 3.5-fold for N434A. Adding T307A to this effected
21
a 12-fold improvement in binding relative to native IgG1. In one รูปลักษณะ the antigen binding
protein of the การประดิษฐ์ ประกอบรวมด้วยs the E380A/N434A mutations and has increased binding to FcRn.
Dall'Acqua et al. (2002, J Immunol.;169:5171-80) described random mutagenesis and
screening of human IgG1 hinge-Fc fragment phage display libraries against mouse FcRn. They 5 disclosed random mutagenesis of positions 251, 252, 254-256, 308, 309, 311, 312, 314, 385-387,
389, 428, 433, 434, and 436. The major improvements in IgG1-human FcRn complex stability occur in substituting เรซิดิว located in a band across the Fc-FcRn interface (M252, S254, T256, H433, N434, and Y436) and to lesser extend substitutions of เรซิดิว at the periphery like V308, L309,
Q311, G385, Q386, P387, and N389. The รูปแปรผัน with the highest affinity to human FcRn was 10 obtained by combining the M252Y/S254T/T256E and H433K/N434F/Y436H mutations and exhibited
a 57-fold increase in affinity relative to the wild-type IgG1. The in vivo behaviour of such a mutated
human IgG1 exhibited a nearly 4-fold increase in serum half-life in cynomolgus monkey as
compared to wild-type IgG1.
The การประดิษฐ์นี้ therefore provides a รูปแปรผัน of an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน with
15 optimized binding to FcRn. In a preferred รูปลักษณะ, the said รูปแปรผัน of an antigen binding
protein ประกอบรวมด้วยs at least one amino acid modification in the Fc region of said antigen binding
protein, โดยที่ said modification is selected from the group consisting of 226, 227, 228, 230, 231,
233, 234, 239, 241, 243, 246, 250, 252, 256, 259, 264, 265, 267, 269, 270, 276, 284, 285, 288,
289, 290, 291, 292, 294, 297, 298, 299, 301, 302, 303, 305, 307, 308, 309, 311, 315, 317, 320,
20 322, 325, 327, 330, 332, 334, 335, 338, 340, 342, 343, 345, 347, 350, 352, 354, 355, 356, 359,
360, 361, 362, 369, 370, 371, 375, 378, 380, 382, 384, 385, 386, 387, 389, 390, 392, 393, 394,
395, 396, 397, 398, 399, 400, 401 403, 404, 408, 411, 412, 414, 415, 416, 418, 419, 420, 421, 422, 424, 426, 428, 433, 434, 438, 439, 440, 443, 444, 445, 446 and 447 of the Fc region as compared to said parent โพลีเปปไทด์, โดยที่ the numbering of the amino acids in the Fc region is that of the
25 EU index in Kabat.
ในลักษณะ ต่อไป of the การประดิษฐ์ the modifications are M252Y/S254T/T256E.
Additionally, various publications describe methods for obtaining physiologically active
molecules whose half-lives are modified either by introducing an FcRn-binding โพลีเปปไทด์ into the
molecules (WO 97/43316; U.S. Patent N° 5,869,046; U.S. Patent N° 5,747,035; WO 96/32478; WO 30 91/14438) or by fusing the molecules with antibodies whose FcRn-binding affinities are preserved
but affinities for other Fc รีเซปเตอร์s have been greatly reduced (WO 99/43713) or fusing with FcRn
binding domains of antibodies (WO 00/09560; U.S. Patent N°4,703,039).
Although substitutions in the บิบิคงที่ are able to significantly improve the functions
of therapeutic IgG antibodies, substitutions in the strictly conserved บ
0/5000
ซึ่งประกอบรวมด้วยนั่งร้านที่เลือกจาก แต่ไม่จำกัดเฉพาะ กลุ่มที่ประกอบด้วย CTLA-4, lipocallin สปา การ affibody การ avimer, GroEl และ fibronectin (ดู W02008096158 สำหรับการเปิดเผยเหล่านี้ผูก โดเมน) Conjugating หมายถึงองค์ประกอบซึ่งประกอบรวมด้วยโพลีเปปไทด์ เล็กน้อย หรือเป็นศัตรู เปิดเผยข้อมูลที่ไม่ถูกผูกมัด (covalently หรือ noncovalently) การรวมโดเมนเช่นการผูกข้อมูล โดเมนที่ binds serum albumin10 ในรูปลักษณะอื่น รวมโดเมนอาจจะโดโพลีเปปไทด์เช่นการAlbumin Binding โดเมน (ABD) หรือโมเลกุลเล็กซึ่ง binds albumin (ตรวจสอบ ตัวอย่างในบทที่ 14 หน้า 269-283 และบทที่ 15 หน้า 285-296, Edited "รักษาโปรตีน:กลยุทธ์การ Modulate ของพวกเขาพลาสม่าครึ่งชีวิต" โดยโรแลนด์ Kontermann, Wiley Blackwell, 2012, ISBN: 978 -3-527-32849-9)รูปลักษณะ 15 1 ไม่ให้มีอาหารโปรตีนซึ่งประกอบรวมด้วยเป็นโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนตามการประดิษฐ์ และป้องกัน serum albumin หรือแอนติบอดีรีเซปเตอร์ Fc ป้องกันทารกแรกเกิด การส่วนแอนติบอดีHalf-life ยาวของ IgG แอนตี้รายงานจะขึ้นอยู่กับการผูกกับ FcRn ดังนั้น แทนที่เพิ่มการผูกความสัมพันธ์ของ IgG เพื่อ FcRn ที่ pH 6.0 ขณะรักษา 20 อาศัย pH ของการโต้ตอบ โดยวิศวกรรมบิบิคงที่ ได้อย่างกว้างขวาง ศึกษา (Ghetie et al. เนเจอร์ไบโอเทค 15:637-640, 1997 Al. ร้อยเอ็ด Hinton, JBC 279:6213-6216, 2004 Dall'Acqua et al.,Immunol J 10 117:1129-1138, 2006) วิธีอื่นปรับเปลี่ยนโปรตีนยึดเกาะแอนติเจน ของการประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องเพิ่มใน vivo ชีวิตครึ่งหนึ่งของโปรตีนดังกล่าว โดยแก้ไข 25 อิมมูโนโกลบูลินคงโดเมนหรือโดเมนรวม (Fc รีเซปเตอร์ neonate) FcRnในผู้ใหญ่เลี้ยงลูกด้วยนมที่ FcRn หรือที่เรียกว่า Fc ทารกแรกเกิดรีเซปเตอร์ มีบทบาทสำคัญในการรักษาระดับแอนติบอดีซีรั่มโดยทำหน้าที่เป็นรีเซปเตอร์ป้องกันที่ binds และ salvages แอนตี้ของ IgG ไอโซไทป์จากย่อยสลาย IgG โมเลกุลคือ endocytosed โดยเซลล์บุผนังหลอดเลือดและถ้าพวกเขาผูกกับ FcRn มีรีไซเคิลออกไปหมุนเวียน ในทางตรงกันข้าม IgG โมเลกุลที่ 30 ไม่ผูกกับ FcRn ใส่เซลล์ และมุ่งเป้ามายังทางเดิน lysosomal ที่กำลังเสื่อมโทรมFcRn ทารกแรกเกิดที่เชื่อว่าจะเกี่ยวข้องกับเคลียร์แอนติบอดีและการ transcytosis ผ่านเนื้อเยื่อรีเซปเตอร์ (ดู Junghans R.P (1997) Immunol.Res 16. 29-57 และ Ghetie et al (2000) Annu.Rev.Immunol. 18, 739-766) มนุษย์ IgG1 เรซิดิวกำหนดติดต่อโดยตรงกับhuman FcRn รวมถึง 11e253, Ser254, Lys288, Thr307, G1n311, Asn434 and His435. Switches at any 35 of these positions described in this section may enable increased serum half-life and/or altered เอฟเฟคเตอร์ properties of โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of the การประดิษฐ์.โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of the การประดิษฐ์นี้ may have amino acid modifications that increase the affinity of the constant domain or fragment thereof for FcRn. Increasing the half-life of therapeutic and diagnostic IgG's and other bioactive molecules has many benefits ที่รวมถึง reducingthe amount and/or frequency of dosing of these molecules. In one รูปลักษณะ there is therefore 5 provided an antigen binding according to the การประดิษฐ์ provided herein or a fusion protein ซึ่ง ประกอบรวมด้วย all or a portion (an FcRn binding portion) of an IgG constant domain having one or more of these amino acid modifications and a non-IgG protein or non-protein molecule conjugated to such a modified IgG constant domain, โดยที่ the presence of the modified IgG constant domain increases the in vivo half life of the โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน.10 PCT Publication No. WO 00/42072 discloses a โพลีเปปไทด์ ซึ่ง ประกอบรวมด้วย a รูปแปรผัน Fc region
with altered FcRn binding affinity, which โพลีเปปไทด์ ประกอบรวมด้วยs an amino acid modification at any one or more of amino acid positions 238, 252, 253, 254, 255, 256, 265, 272, 286, 288, 303, 305,
307, 309, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 386,388, 400, 413, 415, 424,433,
434,435, 436, 439, and 447 of the Fc region, โดยที่ the numbering of the เรซิดิว in the Fc region
15 is that of the EU index (Kabat et al).
PCT Publication No. WO 02/06091902/060919 A2 discloses a modified IgG ซึ่ง ประกอบรวมด้วย an IgG constant domain ซึ่ง ประกอบรวมด้วย one or more amino acid modifications relative to a wild-type IgG constant domain, โดยที่ the modified IgG has an increased half-life compared to the half-life of an IgG having the wild-type IgG constant domain, and โดยที่ the one or more amino acid modifications
20 are at one or more of positions 251, 253, 255, 285-290, 308-314, 385-389, and 428-435.
Shields et al. (2001, 3 Biol Chem ; 276:6591-604) used alanine scanning mutagenesis to
alter เรซิดิว in the Fc region of a human IgG1 antibody and then assessed the binding to human
FcRn. Positions that effectively abrogated binding to FcRn when changed to alanine รวมถึง 1253,
S254, H435, and Y436. Other positions showed a less pronounced reduction in binding as follows: 25 E233-G236, R255, K288, L309, S415, and H433. Several amino acid positions exhibited an
improvement in FcRn binding when changed to alanine; notable among these are P238, T256, E272,
V305, T307, Q311, D312, K317, D376, E380, E382, S424, and N434. Many other amino acid
positions exhibited a slight improvement (D265, N286, V303, K360, Q362, and A378) or no change
(S239, K246, K248, D249, M252, E258, T260, S267, H268, S269, D270, K274, N276, Y278, D280, 30 V282, E283, H285, T289, K290, R292, E293, E294, Q295, Y296, N297, 5298, R301, N315, E318,
K320, K322, S324, K326, A327, P329, P331, E333, K334, T335, S337, K338, K340, Q342, R344,
E345, Q345, Q347, R356, M358, T359, K360, N361, Y373, S375, S383, N384, Q386, E388, N389,
N390, K392, L398, S400, D401, K414, R416, Q418, Q419, N421, V422, E430, T437, K439, S440,
S442, S444, and K447) in FcRn binding.
35 The most pronounced effect was found for combination รูปแปรผันs with improved binding to
FcRn. At pH 6.0, the E380A/N434A รูปแปรผัน showed over 8-fold better binding to FcRn, relative to native IgG1, compared with 2-fold for E380A and 3.5-fold for N434A. Adding T307A to this effected
21
a 12-fold improvement in binding relative to native IgG1. In one รูปลักษณะ the antigen binding
protein of the การประดิษฐ์ ประกอบรวมด้วยs the E380A/N434A mutations and has increased binding to FcRn.
Dall'Acqua et al. (2002, J Immunol.;169:5171-80) described random mutagenesis and
screening of human IgG1 hinge-Fc fragment phage display libraries against mouse FcRn. They 5 disclosed random mutagenesis of positions 251, 252, 254-256, 308, 309, 311, 312, 314, 385-387,
389, 428, 433, 434, and 436. The major improvements in IgG1-human FcRn complex stability occur in substituting เรซิดิว located in a band across the Fc-FcRn interface (M252, S254, T256, H433, N434, and Y436) and to lesser extend substitutions of เรซิดิว at the periphery like V308, L309,
Q311, G385, Q386, P387, and N389. The รูปแปรผัน with the highest affinity to human FcRn was 10 obtained by combining the M252Y/S254T/T256E and H433K/N434F/Y436H mutations and exhibited
a 57-fold increase in affinity relative to the wild-type IgG1. The in vivo behaviour of such a mutated
human IgG1 exhibited a nearly 4-fold increase in serum half-life in cynomolgus monkey as
compared to wild-type IgG1.
The การประดิษฐ์นี้ therefore provides a รูปแปรผัน of an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน with
15 optimized binding to FcRn. In a preferred รูปลักษณะ, the said รูปแปรผัน of an antigen binding
protein ประกอบรวมด้วยs at least one amino acid modification in the Fc region of said antigen binding
protein, โดยที่ said modification is selected from the group consisting of 226, 227, 228, 230, 231,
233, 234, 239, 241, 243, 246, 250, 252, 256, 259, 264, 265, 267, 269, 270, 276, 284, 285, 288,
289, 290, 291, 292, 294, 297, 298, 299, 301, 302, 303, 305, 307, 308, 309, 311, 315, 317, 320,
20 322, 325, 327, 330, 332, 334, 335, 338, 340, 342, 343, 345, 347, 350, 352, 354, 355, 356, 359,
360, 361, 362, 369, 370, 371, 375, 378, 380, 382, 384, 385, 386, 387, 389, 390, 392, 393, 394,
395, 396, 397, 398, 399, 400, 401 403, 404, 408, 411, 412, 414, 415, 416, 418, 419, 420, 421, 422, 424, 426, 428, 433, 434, 438, 439, 440, 443, 444, 445, 446 and 447 of the Fc region as compared to said parent โพลีเปปไทด์, โดยที่ the numbering of the amino acids in the Fc region is that of the
25 EU index in Kabat.
ในลักษณะ ต่อไป of the การประดิษฐ์ the modifications are M252Y/S254T/T256E.
Additionally, various publications describe methods for obtaining physiologically active
molecules whose half-lives are modified either by introducing an FcRn-binding โพลีเปปไทด์ into the
molecules (WO 97/43316; U.S. Patent N° 5,869,046; U.S. Patent N° 5,747,035; WO 96/32478; WO 30 91/14438) or by fusing the molecules with antibodies whose FcRn-binding affinities are preserved
but affinities for other Fc รีเซปเตอร์s have been greatly reduced (WO 99/43713) or fusing with FcRn
binding domains of antibodies (WO 00/09560; U.S. Patent N°4,703,039).
Although substitutions in the บิบิคงที่ are able to significantly improve the functions
of therapeutic IgG antibodies, substitutions in the strictly conserved บ
with altered FcRn binding affinity, which โพลีเปปไทด์ ประกอบรวมด้วยs an amino acid modification at any one or more of amino acid positions 238, 252, 253, 254, 255, 256, 265, 272, 286, 288, 303, 305,
307, 309, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 386,388, 400, 413, 415, 424,433,
434,435, 436, 439, and 447 of the Fc region, โดยที่ the numbering of the เรซิดิว in the Fc region
15 is that of the EU index (Kabat et al).
PCT Publication No. WO 02/06091902/060919 A2 discloses a modified IgG ซึ่ง ประกอบรวมด้วย an IgG constant domain ซึ่ง ประกอบรวมด้วย one or more amino acid modifications relative to a wild-type IgG constant domain, โดยที่ the modified IgG has an increased half-life compared to the half-life of an IgG having the wild-type IgG constant domain, and โดยที่ the one or more amino acid modifications
20 are at one or more of positions 251, 253, 255, 285-290, 308-314, 385-389, and 428-435.
Shields et al. (2001, 3 Biol Chem ; 276:6591-604) used alanine scanning mutagenesis to
alter เรซิดิว in the Fc region of a human IgG1 antibody and then assessed the binding to human
FcRn. Positions that effectively abrogated binding to FcRn when changed to alanine รวมถึง 1253,
S254, H435, and Y436. Other positions showed a less pronounced reduction in binding as follows: 25 E233-G236, R255, K288, L309, S415, and H433. Several amino acid positions exhibited an
improvement in FcRn binding when changed to alanine; notable among these are P238, T256, E272,
V305, T307, Q311, D312, K317, D376, E380, E382, S424, and N434. Many other amino acid
positions exhibited a slight improvement (D265, N286, V303, K360, Q362, and A378) or no change
(S239, K246, K248, D249, M252, E258, T260, S267, H268, S269, D270, K274, N276, Y278, D280, 30 V282, E283, H285, T289, K290, R292, E293, E294, Q295, Y296, N297, 5298, R301, N315, E318,
K320, K322, S324, K326, A327, P329, P331, E333, K334, T335, S337, K338, K340, Q342, R344,
E345, Q345, Q347, R356, M358, T359, K360, N361, Y373, S375, S383, N384, Q386, E388, N389,
N390, K392, L398, S400, D401, K414, R416, Q418, Q419, N421, V422, E430, T437, K439, S440,
S442, S444, and K447) in FcRn binding.
35 The most pronounced effect was found for combination รูปแปรผันs with improved binding to
FcRn. At pH 6.0, the E380A/N434A รูปแปรผัน showed over 8-fold better binding to FcRn, relative to native IgG1, compared with 2-fold for E380A and 3.5-fold for N434A. Adding T307A to this effected
21
a 12-fold improvement in binding relative to native IgG1. In one รูปลักษณะ the antigen binding
protein of the การประดิษฐ์ ประกอบรวมด้วยs the E380A/N434A mutations and has increased binding to FcRn.
Dall'Acqua et al. (2002, J Immunol.;169:5171-80) described random mutagenesis and
screening of human IgG1 hinge-Fc fragment phage display libraries against mouse FcRn. They 5 disclosed random mutagenesis of positions 251, 252, 254-256, 308, 309, 311, 312, 314, 385-387,
389, 428, 433, 434, and 436. The major improvements in IgG1-human FcRn complex stability occur in substituting เรซิดิว located in a band across the Fc-FcRn interface (M252, S254, T256, H433, N434, and Y436) and to lesser extend substitutions of เรซิดิว at the periphery like V308, L309,
Q311, G385, Q386, P387, and N389. The รูปแปรผัน with the highest affinity to human FcRn was 10 obtained by combining the M252Y/S254T/T256E and H433K/N434F/Y436H mutations and exhibited
a 57-fold increase in affinity relative to the wild-type IgG1. The in vivo behaviour of such a mutated
human IgG1 exhibited a nearly 4-fold increase in serum half-life in cynomolgus monkey as
compared to wild-type IgG1.
The การประดิษฐ์นี้ therefore provides a รูปแปรผัน of an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน with
15 optimized binding to FcRn. In a preferred รูปลักษณะ, the said รูปแปรผัน of an antigen binding
protein ประกอบรวมด้วยs at least one amino acid modification in the Fc region of said antigen binding
protein, โดยที่ said modification is selected from the group consisting of 226, 227, 228, 230, 231,
233, 234, 239, 241, 243, 246, 250, 252, 256, 259, 264, 265, 267, 269, 270, 276, 284, 285, 288,
289, 290, 291, 292, 294, 297, 298, 299, 301, 302, 303, 305, 307, 308, 309, 311, 315, 317, 320,
20 322, 325, 327, 330, 332, 334, 335, 338, 340, 342, 343, 345, 347, 350, 352, 354, 355, 356, 359,
360, 361, 362, 369, 370, 371, 375, 378, 380, 382, 384, 385, 386, 387, 389, 390, 392, 393, 394,
395, 396, 397, 398, 399, 400, 401 403, 404, 408, 411, 412, 414, 415, 416, 418, 419, 420, 421, 422, 424, 426, 428, 433, 434, 438, 439, 440, 443, 444, 445, 446 and 447 of the Fc region as compared to said parent โพลีเปปไทด์, โดยที่ the numbering of the amino acids in the Fc region is that of the
25 EU index in Kabat.
ในลักษณะ ต่อไป of the การประดิษฐ์ the modifications are M252Y/S254T/T256E.
Additionally, various publications describe methods for obtaining physiologically active
molecules whose half-lives are modified either by introducing an FcRn-binding โพลีเปปไทด์ into the
molecules (WO 97/43316; U.S. Patent N° 5,869,046; U.S. Patent N° 5,747,035; WO 96/32478; WO 30 91/14438) or by fusing the molecules with antibodies whose FcRn-binding affinities are preserved
but affinities for other Fc รีเซปเตอร์s have been greatly reduced (WO 99/43713) or fusing with FcRn
binding domains of antibodies (WO 00/09560; U.S. Patent N°4,703,039).
Although substitutions in the บิบิคงที่ are able to significantly improve the functions
of therapeutic IgG antibodies, substitutions in the strictly conserved บ
การแปล กรุณารอสักครู่..
ซึ่ง ประกอบรวมด้วย a scaffold selected from, but not limited to, the group consisting of CTLA-4, lipocallin, SpA, an
affibody, an avimer, GroEl and fibronectin (see W02008096158 for disclosure of these binding
domains). Conjugating refers to a composition ซึ่ง ประกอบรวมด้วย โพลีเปปไทด์, dAb or antagonist of the
disclosure that is bonded (covalently or noncovalently) to a binding domain such as a binding
domain that binds serum albumin.
10 In another รูปลักษณะ, the binding domain may be a โพลีเปปไทด์ domain such as an
Albumin Binding Domain (ABD) or a small molecule which binds albumin (reviewed, for example in Chapter 14, pages 269-283 and Chapter 15, pages 285-296, "Therapeutic Proteins: Strategies to Modulate Their Plasma Half-Lives" Edited by Roland Kontermann, Wiley-Blackwell, 2012, ISBN: 978-
3-527-32849-9).
15 In one รูปลักษณะ, there is provided a fusion protein ซึ่ง ประกอบรวมด้วย an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน
in accordance with the การประดิษฐ์ and an anti-serum albumin or anti-neonatal Fc รีเซปเตอร์ antibody or antibody fragment.
The long half-life of IgG antibodies is reported to be dependent on its binding to FcRn.
Therefore, substitutions that increase the binding affinity of IgG to FcRn at pH 6.0 while maintaining 20 the pH dependence of the interaction by engineering the บิบิคงที่ have been extensively
studied (Ghetie et al., Nature Biotech. 15: 637-640, 1997; Hinton et al., JBC 279: 6213-6216, 2004;
Dall'Acqua et al.,
10 J Immunol 117: 1129-1138, 2006). Another means of modifying โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน
of the การประดิษฐ์นี้ involves increasing the in-vivo half life of such proteins by modification of 25 the อิมมูโนโกลบูลิน constant domain or FcRn (Fc รีเซปเตอร์ neonate) binding domain.
In adult mammals, FcRn, also known as the neonatal Fc รีเซปเตอร์, plays a key role in maintaining serum antibody levels by acting as a protective รีเซปเตอร์ that binds and salvages antibodies of the IgG ไอโซไทป์ from degradation. IgG molecules are endocytosed by endothelial cells,
and if they bind to FcRn, are recycled out into circulation. In contrast, IgG molecules that do not 30 bind to FcRn enter the cells and are targeted to the lysosomal pathway where they are degraded.
The neonatal FcRn รีเซปเตอร์ is believed to be involved in both antibody clearance and the transcytosis across tissues (see Junghans R.P (1997) Immunol.Res 16. 29-57 and Ghetie et al (2000) Annu.Rev.Immunol. 18, 739-766). Human IgG1 เรซิดิว determined to interact directly with
human FcRn รวมถึง 11e253, Ser254, Lys288, Thr307, G1n311, Asn434 and His435. Switches at any 35 of these positions described in this section may enable increased serum half-life and/or altered
เอฟเฟคเตอร์ properties of โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of the การประดิษฐ์.
โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of the การประดิษฐ์นี้ may have amino acid modifications that increase the affinity of the constant domain or fragment thereof for FcRn. Increasing the half-life of therapeutic and diagnostic IgG's and other bioactive molecules has many benefits ที่รวมถึง reducing
the amount and/or frequency of dosing of these molecules. In one รูปลักษณะ there is therefore 5 provided an antigen binding according to the การประดิษฐ์ provided herein or a fusion protein
ซึ่ง ประกอบรวมด้วย all or a portion (an FcRn binding portion) of an IgG constant domain having one or more
of these amino acid modifications and a non-IgG protein or non-protein molecule conjugated to such
a modified IgG constant domain, โดยที่ the presence of the modified IgG constant domain
increases the in vivo half life of the โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน.
10 PCT Publication No. WO 00/42072 discloses a โพลีเปปไทด์ ซึ่ง ประกอบรวมด้วย a รูปแปรผัน Fc region
with altered FcRn binding affinity, which โพลีเปปไทด์ ประกอบรวมด้วยs an amino acid modification at any one or more of amino acid positions 238, 252, 253, 254, 255, 256, 265, 272, 286, 288, 303, 305,
307, 309, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 386,388, 400, 413, 415, 424,433,
434,435, 436, 439, and 447 of the Fc region, โดยที่ the numbering of the เรซิดิว in the Fc region
15 is that of the EU index (Kabat et al).
PCT Publication No. WO 02/06091902/060919 A2 discloses a modified IgG ซึ่ง ประกอบรวมด้วย an IgG constant domain ซึ่ง ประกอบรวมด้วย one or more amino acid modifications relative to a wild-type IgG constant domain, โดยที่ the modified IgG has an increased half-life compared to the half-life of an IgG having the wild-type IgG constant domain, and โดยที่ the one or more amino acid modifications
20 are at one or more of positions 251, 253, 255, 285-290, 308-314, 385-389, and 428-435.
Shields et al. (2001, 3 Biol Chem ; 276:6591-604) used alanine scanning mutagenesis to
alter เรซิดิว in the Fc region of a human IgG1 antibody and then assessed the binding to human
FcRn. Positions that effectively abrogated binding to FcRn when changed to alanine รวมถึง 1253,
S254, H435, and Y436. Other positions showed a less pronounced reduction in binding as follows: 25 E233-G236, R255, K288, L309, S415, and H433. Several amino acid positions exhibited an
improvement in FcRn binding when changed to alanine; notable among these are P238, T256, E272,
V305, T307, Q311, D312, K317, D376, E380, E382, S424, and N434. Many other amino acid
positions exhibited a slight improvement (D265, N286, V303, K360, Q362, and A378) or no change
(S239, K246, K248, D249, M252, E258, T260, S267, H268, S269, D270, K274, N276, Y278, D280, 30 V282, E283, H285, T289, K290, R292, E293, E294, Q295, Y296, N297, 5298, R301, N315, E318,
K320, K322, S324, K326, A327, P329, P331, E333, K334, T335, S337, K338, K340, Q342, R344,
E345, Q345, Q347, R356, M358, T359, K360, N361, Y373, S375, S383, N384, Q386, E388, N389,
N390, K392, L398, S400, D401, K414, R416, Q418, Q419, N421, V422, E430, T437, K439, S440,
S442, S444, and K447) in FcRn binding.
35 The most pronounced effect was found for combination รูปแปรผันs with improved binding to
FcRn. At pH 6.0, the E380A/N434A รูปแปรผัน showed over 8-fold better binding to FcRn, relative to native IgG1, compared with 2-fold for E380A and 3.5-fold for N434A. Adding T307A to this effected
21
a 12-fold improvement in binding relative to native IgG1. In one รูปลักษณะ the antigen binding
protein of the การประดิษฐ์ ประกอบรวมด้วยs the E380A/N434A mutations and has increased binding to FcRn.
Dall'Acqua et al. (2002, J Immunol.;169:5171-80) described random mutagenesis and
screening of human IgG1 hinge-Fc fragment phage display libraries against mouse FcRn. They 5 disclosed random mutagenesis of positions 251, 252, 254-256, 308, 309, 311, 312, 314, 385-387,
389, 428, 433, 434, and 436. The major improvements in IgG1-human FcRn complex stability occur in substituting เรซิดิว located in a band across the Fc-FcRn interface (M252, S254, T256, H433, N434, and Y436) and to lesser extend substitutions of เรซิดิว at the periphery like V308, L309,
Q311, G385, Q386, P387, and N389. The รูปแปรผัน with the highest affinity to human FcRn was 10 obtained by combining the M252Y/S254T/T256E and H433K/N434F/Y436H mutations and exhibited
a 57-fold increase in affinity relative to the wild-type IgG1. The in vivo behaviour of such a mutated
human IgG1 exhibited a nearly 4-fold increase in serum half-life in cynomolgus monkey as
compared to wild-type IgG1.
The การประดิษฐ์นี้ therefore provides a รูปแปรผัน of an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน with
15 optimized binding to FcRn. In a preferred รูปลักษณะ, the said รูปแปรผัน of an antigen binding
protein ประกอบรวมด้วยs at least one amino acid modification in the Fc region of said antigen binding
protein, โดยที่ said modification is selected from the group consisting of 226, 227, 228, 230, 231,
233, 234, 239, 241, 243, 246, 250, 252, 256, 259, 264, 265, 267, 269, 270, 276, 284, 285, 288,
289, 290, 291, 292, 294, 297, 298, 299, 301, 302, 303, 305, 307, 308, 309, 311, 315, 317, 320,
20 322, 325, 327, 330, 332, 334, 335, 338, 340, 342, 343, 345, 347, 350, 352, 354, 355, 356, 359,
360, 361, 362, 369, 370, 371, 375, 378, 380, 382, 384, 385, 386, 387, 389, 390, 392, 393, 394,
395, 396, 397, 398, 399, 400, 401 403, 404, 408, 411, 412, 414, 415, 416, 418, 419, 420, 421, 422, 424, 426, 428, 433, 434, 438, 439, 440, 443, 444, 445, 446 and 447 of the Fc region as compared to said parent โพลีเปปไทด์, โดยที่ the numbering of the amino acids in the Fc region is that of the
25 EU index in Kabat.
ในลักษณะ ต่อไป of the การประดิษฐ์ the modifications are M252Y/S254T/T256E.
Additionally, various publications describe methods for obtaining physiologically active
molecules whose half-lives are modified either by introducing an FcRn-binding โพลีเปปไทด์ into the
molecules (WO 97/43316; U.S. Patent N° 5,869,046; U.S. Patent N° 5,747,035; WO 96/32478; WO 30 91/14438) or by fusing the molecules with antibodies whose FcRn-binding affinities are preserved
but affinities for other Fc รีเซปเตอร์s have been greatly reduced (WO 99/43713) or fusing with FcRn
binding domains of antibodies (WO 00/09560; U.S. Patent N°4,703,039).
Although substitutions in the บิบิคงที่ are able to significantly improve the functions
of therapeutic IgG antibodies, substitutions in the strictly conserved บ
affibody, an avimer, GroEl and fibronectin (see W02008096158 for disclosure of these binding
domains). Conjugating refers to a composition ซึ่ง ประกอบรวมด้วย โพลีเปปไทด์, dAb or antagonist of the
disclosure that is bonded (covalently or noncovalently) to a binding domain such as a binding
domain that binds serum albumin.
10 In another รูปลักษณะ, the binding domain may be a โพลีเปปไทด์ domain such as an
Albumin Binding Domain (ABD) or a small molecule which binds albumin (reviewed, for example in Chapter 14, pages 269-283 and Chapter 15, pages 285-296, "Therapeutic Proteins: Strategies to Modulate Their Plasma Half-Lives" Edited by Roland Kontermann, Wiley-Blackwell, 2012, ISBN: 978-
3-527-32849-9).
15 In one รูปลักษณะ, there is provided a fusion protein ซึ่ง ประกอบรวมด้วย an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน
in accordance with the การประดิษฐ์ and an anti-serum albumin or anti-neonatal Fc รีเซปเตอร์ antibody or antibody fragment.
The long half-life of IgG antibodies is reported to be dependent on its binding to FcRn.
Therefore, substitutions that increase the binding affinity of IgG to FcRn at pH 6.0 while maintaining 20 the pH dependence of the interaction by engineering the บิบิคงที่ have been extensively
studied (Ghetie et al., Nature Biotech. 15: 637-640, 1997; Hinton et al., JBC 279: 6213-6216, 2004;
Dall'Acqua et al.,
10 J Immunol 117: 1129-1138, 2006). Another means of modifying โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน
of the การประดิษฐ์นี้ involves increasing the in-vivo half life of such proteins by modification of 25 the อิมมูโนโกลบูลิน constant domain or FcRn (Fc รีเซปเตอร์ neonate) binding domain.
In adult mammals, FcRn, also known as the neonatal Fc รีเซปเตอร์, plays a key role in maintaining serum antibody levels by acting as a protective รีเซปเตอร์ that binds and salvages antibodies of the IgG ไอโซไทป์ from degradation. IgG molecules are endocytosed by endothelial cells,
and if they bind to FcRn, are recycled out into circulation. In contrast, IgG molecules that do not 30 bind to FcRn enter the cells and are targeted to the lysosomal pathway where they are degraded.
The neonatal FcRn รีเซปเตอร์ is believed to be involved in both antibody clearance and the transcytosis across tissues (see Junghans R.P (1997) Immunol.Res 16. 29-57 and Ghetie et al (2000) Annu.Rev.Immunol. 18, 739-766). Human IgG1 เรซิดิว determined to interact directly with
human FcRn รวมถึง 11e253, Ser254, Lys288, Thr307, G1n311, Asn434 and His435. Switches at any 35 of these positions described in this section may enable increased serum half-life and/or altered
เอฟเฟคเตอร์ properties of โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of the การประดิษฐ์.
โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of the การประดิษฐ์นี้ may have amino acid modifications that increase the affinity of the constant domain or fragment thereof for FcRn. Increasing the half-life of therapeutic and diagnostic IgG's and other bioactive molecules has many benefits ที่รวมถึง reducing
the amount and/or frequency of dosing of these molecules. In one รูปลักษณะ there is therefore 5 provided an antigen binding according to the การประดิษฐ์ provided herein or a fusion protein
ซึ่ง ประกอบรวมด้วย all or a portion (an FcRn binding portion) of an IgG constant domain having one or more
of these amino acid modifications and a non-IgG protein or non-protein molecule conjugated to such
a modified IgG constant domain, โดยที่ the presence of the modified IgG constant domain
increases the in vivo half life of the โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน.
10 PCT Publication No. WO 00/42072 discloses a โพลีเปปไทด์ ซึ่ง ประกอบรวมด้วย a รูปแปรผัน Fc region
with altered FcRn binding affinity, which โพลีเปปไทด์ ประกอบรวมด้วยs an amino acid modification at any one or more of amino acid positions 238, 252, 253, 254, 255, 256, 265, 272, 286, 288, 303, 305,
307, 309, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 386,388, 400, 413, 415, 424,433,
434,435, 436, 439, and 447 of the Fc region, โดยที่ the numbering of the เรซิดิว in the Fc region
15 is that of the EU index (Kabat et al).
PCT Publication No. WO 02/06091902/060919 A2 discloses a modified IgG ซึ่ง ประกอบรวมด้วย an IgG constant domain ซึ่ง ประกอบรวมด้วย one or more amino acid modifications relative to a wild-type IgG constant domain, โดยที่ the modified IgG has an increased half-life compared to the half-life of an IgG having the wild-type IgG constant domain, and โดยที่ the one or more amino acid modifications
20 are at one or more of positions 251, 253, 255, 285-290, 308-314, 385-389, and 428-435.
Shields et al. (2001, 3 Biol Chem ; 276:6591-604) used alanine scanning mutagenesis to
alter เรซิดิว in the Fc region of a human IgG1 antibody and then assessed the binding to human
FcRn. Positions that effectively abrogated binding to FcRn when changed to alanine รวมถึง 1253,
S254, H435, and Y436. Other positions showed a less pronounced reduction in binding as follows: 25 E233-G236, R255, K288, L309, S415, and H433. Several amino acid positions exhibited an
improvement in FcRn binding when changed to alanine; notable among these are P238, T256, E272,
V305, T307, Q311, D312, K317, D376, E380, E382, S424, and N434. Many other amino acid
positions exhibited a slight improvement (D265, N286, V303, K360, Q362, and A378) or no change
(S239, K246, K248, D249, M252, E258, T260, S267, H268, S269, D270, K274, N276, Y278, D280, 30 V282, E283, H285, T289, K290, R292, E293, E294, Q295, Y296, N297, 5298, R301, N315, E318,
K320, K322, S324, K326, A327, P329, P331, E333, K334, T335, S337, K338, K340, Q342, R344,
E345, Q345, Q347, R356, M358, T359, K360, N361, Y373, S375, S383, N384, Q386, E388, N389,
N390, K392, L398, S400, D401, K414, R416, Q418, Q419, N421, V422, E430, T437, K439, S440,
S442, S444, and K447) in FcRn binding.
35 The most pronounced effect was found for combination รูปแปรผันs with improved binding to
FcRn. At pH 6.0, the E380A/N434A รูปแปรผัน showed over 8-fold better binding to FcRn, relative to native IgG1, compared with 2-fold for E380A and 3.5-fold for N434A. Adding T307A to this effected
21
a 12-fold improvement in binding relative to native IgG1. In one รูปลักษณะ the antigen binding
protein of the การประดิษฐ์ ประกอบรวมด้วยs the E380A/N434A mutations and has increased binding to FcRn.
Dall'Acqua et al. (2002, J Immunol.;169:5171-80) described random mutagenesis and
screening of human IgG1 hinge-Fc fragment phage display libraries against mouse FcRn. They 5 disclosed random mutagenesis of positions 251, 252, 254-256, 308, 309, 311, 312, 314, 385-387,
389, 428, 433, 434, and 436. The major improvements in IgG1-human FcRn complex stability occur in substituting เรซิดิว located in a band across the Fc-FcRn interface (M252, S254, T256, H433, N434, and Y436) and to lesser extend substitutions of เรซิดิว at the periphery like V308, L309,
Q311, G385, Q386, P387, and N389. The รูปแปรผัน with the highest affinity to human FcRn was 10 obtained by combining the M252Y/S254T/T256E and H433K/N434F/Y436H mutations and exhibited
a 57-fold increase in affinity relative to the wild-type IgG1. The in vivo behaviour of such a mutated
human IgG1 exhibited a nearly 4-fold increase in serum half-life in cynomolgus monkey as
compared to wild-type IgG1.
The การประดิษฐ์นี้ therefore provides a รูปแปรผัน of an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน with
15 optimized binding to FcRn. In a preferred รูปลักษณะ, the said รูปแปรผัน of an antigen binding
protein ประกอบรวมด้วยs at least one amino acid modification in the Fc region of said antigen binding
protein, โดยที่ said modification is selected from the group consisting of 226, 227, 228, 230, 231,
233, 234, 239, 241, 243, 246, 250, 252, 256, 259, 264, 265, 267, 269, 270, 276, 284, 285, 288,
289, 290, 291, 292, 294, 297, 298, 299, 301, 302, 303, 305, 307, 308, 309, 311, 315, 317, 320,
20 322, 325, 327, 330, 332, 334, 335, 338, 340, 342, 343, 345, 347, 350, 352, 354, 355, 356, 359,
360, 361, 362, 369, 370, 371, 375, 378, 380, 382, 384, 385, 386, 387, 389, 390, 392, 393, 394,
395, 396, 397, 398, 399, 400, 401 403, 404, 408, 411, 412, 414, 415, 416, 418, 419, 420, 421, 422, 424, 426, 428, 433, 434, 438, 439, 440, 443, 444, 445, 446 and 447 of the Fc region as compared to said parent โพลีเปปไทด์, โดยที่ the numbering of the amino acids in the Fc region is that of the
25 EU index in Kabat.
ในลักษณะ ต่อไป of the การประดิษฐ์ the modifications are M252Y/S254T/T256E.
Additionally, various publications describe methods for obtaining physiologically active
molecules whose half-lives are modified either by introducing an FcRn-binding โพลีเปปไทด์ into the
molecules (WO 97/43316; U.S. Patent N° 5,869,046; U.S. Patent N° 5,747,035; WO 96/32478; WO 30 91/14438) or by fusing the molecules with antibodies whose FcRn-binding affinities are preserved
but affinities for other Fc รีเซปเตอร์s have been greatly reduced (WO 99/43713) or fusing with FcRn
binding domains of antibodies (WO 00/09560; U.S. Patent N°4,703,039).
Although substitutions in the บิบิคงที่ are able to significantly improve the functions
of therapeutic IgG antibodies, substitutions in the strictly conserved บ
การแปล กรุณารอสักครู่..
ซึ่งประกอบรวมด้วยนั่งร้านที่ แต่ไม่ จำกัด ถึงกลุ่มที่ประกอบด้วย ctla-4 lipocallin , สปา , ,
affibody , avimer โกรล , และ ไฟโบรเนกติน ( ดู w02008096158 สำหรับการเปิดเผยของโดเมนผูกพัน
เหล่านี้ ) conjugating หมายถึงองค์ประกอบซึ่งประกอบรวมด้วยโพลีเปปไทด์ , DAB หรือปฏิปักษ์ของ
การเปิดเผยข้อมูลที่ถูกผูกมัด ( covalently หรือ noncovalently ) โดเมนผูกพัน เช่น ผูกโดเมนที่ผูกอัลบูมิน
.
10 ในรูปลักษณะอื่นโดเมนผูกพันอาจเป็นโพลีเปปไทด์โดเมนเช่น
ขะยิกเมน ( สหรัฐอเมริกา ) หรือโมเลกุลเล็กซึ่งผูกอัลบูมิน ( ดู ตัวอย่างในบทที่ 14 หน้า 269-283 และบทที่ 15 หน้า 285-296 , ," โปรตีนบำบัด : กลยุทธ์การผันของพลาสมาครึ่งชีวิต " แก้ไขโดย kontermann ย์ , โลก , 2012 , ISBN : 978 -
3-527-32849-9 ) .
15 ในหนึ่งรูปลักษณะมีให้ของโปรตีนซึ่งประกอบรวมด้วยเป็นโปรตีนยึดเกาะแอนติเจน
ตามการประดิษฐ์และการต่อต้านหรือป้องกันการเกิดรีเซปเตอร์อัลบูมิน ชลบุรี เอฟซี หรือ แอนติบอดี แอนติบอดีจำเพาะ .
ครึ่งชีวิตที่ยาวนานของ IgG รายงานจะขึ้นอยู่กับความผูก fcrn .
ดังนั้นแทนที่เพิ่มความใกล้ชิดผูกพันของ IgG เพื่อ fcrn ที่ pH 60 ในขณะที่รักษา 20 pH ขึ้นอยู่กับปฏิสัมพันธ์โดยวิศวกรรมบิบิคงที่ได้รับอย่างกว้างขวาง
เรียน ( ghetie et al . , ธรรมชาติเทคโนโลยีชีวภาพ 15 : 637-640 , 1997 ; เด็ก et al . , JBC 279 : 6213-6216 , 2004 ;
dall'acqua et al . ,
9 J immunol 117 : 1129-1138 , 2006 ) อีกวิธีในการปรับเปลี่ยนโปรตีนยึดเกาะแอนติเจน
เกี่ยวข้องกับการเพิ่มของการประดิษฐ์นี้ปี 2544 ครึ่งชีวิต เช่น โปรตีน โดยการปรับเปลี่ยนของ 25 อิมมูโนโกลบูลินคงที่โดเมนหรือ fcrn ( เอฟซีรีเซปเตอร์ทารก ) ผูกโดเมน .
ในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม , ผู้ใหญ่ fcrn เรียกว่ารีเซปเตอร์ เอฟซี ทารกแรกเกิดเล่นบทบาทสำคัญในการรักษาระดับแอนติบอดีเซรุ่ม โดยทำหน้าที่เป็นป้องกันรีเซปเตอร์ที่ผูก salvages แอนติบอดี IgG และของไอโซไทป์จากการย่อยสลาย กลุ่มโมเลกุล endocytosed โดยเยื่อบุเซลล์
และถ้าพวกเขาผูกกับ fcrn , รีไซเคิลในการไหลเวียน ในทางตรงกันข้ามกลุ่มโมเลกุลที่ไม่ 30 ผูก fcrn เข้าสู่เซลล์ และมีเป้าหมายที่จะเดิน lysosomal ที่พวกเขามีคุณภาพต่ำ รีเซปเตอร์ทารกแรกเกิด
fcrn เชื่อว่ามีส่วนร่วมในการกวาดล้างทั้งแอนติบอดีและ transcytosis ทั่วเนื้อเยื่อ ( เห็นจุงฮัน R . P ( 1997 ) immunol 16 RES . และ 29-57 ghetie et al ( 2000 ) annu.rev.immunol . 18 , 739-766 )
affibody , avimer โกรล , และ ไฟโบรเนกติน ( ดู w02008096158 สำหรับการเปิดเผยของโดเมนผูกพัน
เหล่านี้ ) conjugating หมายถึงองค์ประกอบซึ่งประกอบรวมด้วยโพลีเปปไทด์ , DAB หรือปฏิปักษ์ของ
การเปิดเผยข้อมูลที่ถูกผูกมัด ( covalently หรือ noncovalently ) โดเมนผูกพัน เช่น ผูกโดเมนที่ผูกอัลบูมิน
.
10 ในรูปลักษณะอื่นโดเมนผูกพันอาจเป็นโพลีเปปไทด์โดเมนเช่น
ขะยิกเมน ( สหรัฐอเมริกา ) หรือโมเลกุลเล็กซึ่งผูกอัลบูมิน ( ดู ตัวอย่างในบทที่ 14 หน้า 269-283 และบทที่ 15 หน้า 285-296 , ," โปรตีนบำบัด : กลยุทธ์การผันของพลาสมาครึ่งชีวิต " แก้ไขโดย kontermann ย์ , โลก , 2012 , ISBN : 978 -
3-527-32849-9 ) .
15 ในหนึ่งรูปลักษณะมีให้ของโปรตีนซึ่งประกอบรวมด้วยเป็นโปรตีนยึดเกาะแอนติเจน
ตามการประดิษฐ์และการต่อต้านหรือป้องกันการเกิดรีเซปเตอร์อัลบูมิน ชลบุรี เอฟซี หรือ แอนติบอดี แอนติบอดีจำเพาะ .
ครึ่งชีวิตที่ยาวนานของ IgG รายงานจะขึ้นอยู่กับความผูก fcrn .
ดังนั้นแทนที่เพิ่มความใกล้ชิดผูกพันของ IgG เพื่อ fcrn ที่ pH 60 ในขณะที่รักษา 20 pH ขึ้นอยู่กับปฏิสัมพันธ์โดยวิศวกรรมบิบิคงที่ได้รับอย่างกว้างขวาง
เรียน ( ghetie et al . , ธรรมชาติเทคโนโลยีชีวภาพ 15 : 637-640 , 1997 ; เด็ก et al . , JBC 279 : 6213-6216 , 2004 ;
dall'acqua et al . ,
9 J immunol 117 : 1129-1138 , 2006 ) อีกวิธีในการปรับเปลี่ยนโปรตีนยึดเกาะแอนติเจน
เกี่ยวข้องกับการเพิ่มของการประดิษฐ์นี้ปี 2544 ครึ่งชีวิต เช่น โปรตีน โดยการปรับเปลี่ยนของ 25 อิมมูโนโกลบูลินคงที่โดเมนหรือ fcrn ( เอฟซีรีเซปเตอร์ทารก ) ผูกโดเมน .
ในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม , ผู้ใหญ่ fcrn เรียกว่ารีเซปเตอร์ เอฟซี ทารกแรกเกิดเล่นบทบาทสำคัญในการรักษาระดับแอนติบอดีเซรุ่ม โดยทำหน้าที่เป็นป้องกันรีเซปเตอร์ที่ผูก salvages แอนติบอดี IgG และของไอโซไทป์จากการย่อยสลาย กลุ่มโมเลกุล endocytosed โดยเยื่อบุเซลล์
และถ้าพวกเขาผูกกับ fcrn , รีไซเคิลในการไหลเวียน ในทางตรงกันข้ามกลุ่มโมเลกุลที่ไม่ 30 ผูก fcrn เข้าสู่เซลล์ และมีเป้าหมายที่จะเดิน lysosomal ที่พวกเขามีคุณภาพต่ำ รีเซปเตอร์ทารกแรกเกิด
fcrn เชื่อว่ามีส่วนร่วมในการกวาดล้างทั้งแอนติบอดีและ transcytosis ทั่วเนื้อเยื่อ ( เห็นจุงฮัน R . P ( 1997 ) immunol 16 RES . และ 29-57 ghetie et al ( 2000 ) annu.rev.immunol . 18 , 739-766 )
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- เสียงเพลงให้คำตอบดีกว่าคำพูดบ้างคนสะอีก
- Free shipping 2013 NEW KTM motorcycle Ra
- แมนูแฟคเจอริ่ง ภาษาอังกฤษ
- affect
- daily operation
- อะไรวะ
- แค่คุณยอมรับมัน
- I see that those who touched my heart fa
- even when earnest effort is invested in
- Bestseller A Product that is extremely p
- ต้องการคนมั้ยคับ
- multi dimensionality
- collection of parasites
- dependent
- Because you are so dear
- Our Values are a reflection of the socia
- หมุตุ๋น
- I see
- may have made
- สูงกว่าปริญญาตรี
- Effect of human saliva and sip volume of
- เขากระตือรือร้นในการเรียน
- หมุตุ๋น
- GOT7เร็วๆนี้จะถึงวันเกิดของฉันฉันอยากได้
