2.4. Antifungal activity
A broth method was used to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum fungicidal concentration (MFC) of EOs and iprodione according to Camiletti et al. (2014). Growing medium was prepared (20% potato lixiviated; 2% glucose; pH 4.5) and transferred (20 mL) into Petri plates of 9-cm diameter. EOs previously diluted in ethanol and iprodione solutions were added to the culture medium in the desired concentrations (varying each 100 L/L). The final concentration of ethanol never exceeded 1% v/v. A fungal colony was grown for 7 days at 21 ◦C in PDA medium before screening. Five-millimeter diameter agar discs of these Petri dishes containing fungal colonies were taken and used to inoculate the tested treatments. A control treatment (C) was also prepared without the addition of an antifungal agent. Treatments were incubated for 7 days at 21 ◦C in a culture chamber. After incubation, the diameter of the mycelium was measured and the results were expressed as a percentage of growth inhibition (PGI) using the equation described by Camiletti et al. (2014). MFCs were defined as the lowest concentration of EO required to achieve a PGI of 100%. MICs (PGI = 50%) were calculated from the curve obtained after linear regression (Abbaszadeh et al., 2014; Camiletti et al., 2014).
2.5. Mixture effects
The method described previously was also used to study the interaction of different concentrations of EOs with iprodione. All possible combinations between EOs and iprodione were prepared as follows: 20, 40, 60 or 80% of the previously determined MFCs of EOs were mixed with 20, 40, 60 and 80% of the previously determined MFC of iprodione. The mixtures were prepared in Eppendorf tubes, volumes were measured with micropipettes and mixed in a vortex mixer. A total of 80 combinations were tested. Data expressed as PGI were obtained and assessed after incubation (Gadban, 2011; Kordali et al., 2008). Synergism analysis was performed using two methods: the additive method and the Abbot method. In the additive method, the expected PGI of the mixture was obtained by adding the individual PGI of the EO concentration and the individual PGI of iprodione. The calculated values were compared with the observed PGI. Synergism was determined when the observed PGI was higher than the expected PGI of the mixture. When the observed PGI value was equal to or lower than the expected PGI, an additive or antagonistic effect was considered, respectively (Gadban, 2011).
2.4. ฤทธิ์ต้านเชื้อน้ำซุปวิธีถูกใช้เพื่อกำหนดความเข้มข้นยับยั้งต่ำสุด (MIC) และต่ำสุดยาความเข้มข้น (MFC) ของกล้อง EOs และ iprodione ตาม Camiletti et al. (2014) เจริญเติบโตปานกลางจัดทำ (มันฝรั่ง 20% lixiviated กลูโคส 2%; pH 4.5) และโอนย้าย (20 mL) ลงในจานเพาะเส้นผ่าศูนย์กลาง 9 ซม. กล้อง EOs ก่อนหน้านี้เจือจางในเอทานอล และโซลูชั่น iprodione เพิ่มสื่อวัฒนธรรมในความเข้มข้นที่ต้องการสาย 100 L/L) ความเข้มข้นสุดท้ายของเอทานอลไม่เคยเกิน 1% v/v เชื้อราอาณานิคมถูกปลูก 7 วันที่ 21 ◦C ใน PDA ก่อนตรวจ แผ่นวุ้น 5 มิลลิเมตรเส้นผ่าศูนย์กลางของอาหารเพาะเชื้อราอาณานิคมที่ประกอบด้วยถ่าย และใช้ปลูกฝีการรักษาผ่านการทดสอบ การรักษาควบคุม (C) ยังจัดทำไม่ มีการเพิ่มตัวแทนเชื้อรา รักษาได้รับการกก 7 วันที่ 21 ◦C ในห้องวัฒนธรรม หลังจากบ่ม โดยวัดเส้นผ่าศูนย์กลางของตัวเส้นใยของมัน และผลลัพธ์ถูกแสดงเป็นเปอร์เซ็นต์ของการยับยั้งการเจริญเติบโต (PGI) โดยใช้สมการที่อธิบายไว้โดย Camiletti et al. (2014) เดอร์ถูกกำหนดเป็นความเข้มข้นต่ำสุดของ EO ที่จำเป็นต่อการบรรลุ PGI 100% ไมโครโฟน (PGI = 50%) คำนวณจากเส้นโค้งที่ได้รับหลังจากการถดถอยเชิงเส้น (Abbaszadeh et al. 2014 Camiletti et al. 2014)2.5 การผสมผลยังใช้วิธีการอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ในการศึกษาปฏิสัมพันธ์ของความเข้มข้นแตกต่างกันของ EOs กับ iprodione ข้อมูลระหว่าง EOs iprodione วจัดเป็นดังนี้: 20, 40, 60 หรือ 80% ของเดอร์กำหนดก่อนหน้านี้กล้อง EOs ถูกผสมกับ 20, 40, 60 และ 80% ของ MFC กำหนดก่อนหน้านี้ของ iprodione ส่วนผสมถูกเตรียมใน Eppendorf หลอด ปริมาณที่ถูกวัด ด้วยไมโครปิเปต และผสมในเครื่องผสม vortex จำนวน 80 ชุดรับการทดสอบ ได้รับข้อมูลที่แสดงเป็น PGI และประเมินหลังจากบ่ม (Gadban, 2011 Kordali et al. 2008) พ.ศ.วิเคราะห์ดำเนินการโดยใช้วิธีการสองวิธี: วิธีการเติมและวิธีการที่เจ้าอาวาส ในวิธีสารเติมแต่ง PGI ที่คาดของส่วนผสมได้รับ โดยการเพิ่ม PGI แต่ละความเข้มข้น EO และ PGI ละของ iprodione มูลค่าคำนวณได้มาเปรียบเทียบกับ PGI สังเกต พ.ศ.ที่ถูกกำหนดเมื่อ PGI สังเกตสูงกว่า PGI ที่คาดของส่วนผสม เมื่อค่า PGI สังเกตถูกเท่ากับ หรือต่ำกว่า PGI คาด สารเติมแต่ง หรือเป็นปรปักษ์ผล เป็นไป ตามลำดับ (Gadban, 2011)
การแปล กรุณารอสักครู่..
2.4 กิจกรรมต้านเชื้อรา
วิธีการน้ำซุปถูกใช้ในการตรวจสอบความเข้มข้นต่ำสุด (MIC) และต่ำสุดเข้มข้นเชื้อรา (MFC) ของ EOS และ iprodione ตาม Camiletti et al, (2014) สื่อที่เติบโตถูกจัดทำขึ้น (20% มันฝรั่ง lixiviated 2% กลูโคส; ค่า pH 4.5) และโอน (20 มล) ลงในจาน Petri ของขนาด 9 ซม. EOS เจือจางก่อนหน้านี้ในเอทานอลและ iprodione การแก้ปัญหาที่ถูกเพิ่มเข้ากลางวัฒนธรรมในระดับความเข้มข้นที่ต้องการ (ที่แตกต่างกันในแต่ละ 100 L / L) ความเข้มข้นสุดท้ายของเอทานอลไม่เกิน 1% v / V อาณานิคมของเชื้อราปลูกเป็นเวลา 7 วันที่ 21 ◦Cในสื่อ PDA ก่อนการตรวจคัดกรอง ห้ามิลลิเมตรเส้นผ่าศูนย์กลางแผ่นวุ้นเหล่านี้จานเลี้ยงเชื้อที่มีโคโลนีของเชื้อราและถูกนำมาใช้ในการฉีดวัคซีนการรักษาที่ผ่านการทดสอบ การรักษาควบคุม (C) นอกจากนี้ยังได้จัดทำขึ้นโดยไม่ต้องเพิ่มของตัวแทนเชื้อรา การรักษาถูกบ่มเป็นเวลา 7 วันที่ 21 ◦Cในห้องวัฒนธรรม หลังจากบ่มเส้นผ่านศูนย์กลางของเส้นใยที่ถูกวัดและผลลัพธ์ที่ได้แสดงเป็นร้อยละของการยับยั้งการเจริญเติบโต (PGI) โดยใช้สมการอธิบายโดย Camiletti et al, (2014) MFCs ถูกกำหนดให้เป็นความเข้มข้นต่ำสุดของ EO ที่จำเป็นเพื่อให้บรรลุ PGI ของแท้ 100% MICs (PGI = 50%) จะถูกคำนวณจากโค้งได้รับหลังจากการถดถอยเชิงเส้น (Abbaszadeh et al, 2014;. Camiletti et al, 2014.).
2.5 ผลกระทบส่วนผสม
วิธีการอธิบายก่อนหน้านี้ก็ถูกใช้เพื่อศึกษาปฏิสัมพันธ์ของความเข้มข้นแตกต่างกันของ EOS กับ iprodione ทั้งหมดรวมกันเป็นไปได้ระหว่าง EOS และ iprodione ได้จัดทำดังต่อไปนี้: 20, 40, 60 หรือ 80% ของ MFCs กำหนดไว้ก่อนหน้านี้ของ EOS ถูกผสมกับ 20, 40, 60 และ 80% ของที่กำหนดไว้ก่อนหน้านี้เอ็มเอฟของ iprodione ผสมได้จัดทำในหลอด Eppendorf ปริมาณถูกวัดด้วยไมโครและผสมในเครื่องผสมน้ำวน ทั้งหมด 80 ชุดที่ได้รับการทดสอบ ข้อมูลที่แสดงเป็น PGI ที่ได้รับการประเมินและหลังจากการบ่ม (Gadban 2011. Kordali et al, 2008) วิเคราะห์ได้ดำเนินการเสริมฤทธิ์ใช้สองวิธี: วิธีการเติมแต่งและวิธีการที่เจ้าอาวาส ในวิธีการเติมแต่งที่ PGI ที่คาดหวังของส่วนผสมที่ได้รับโดยการเพิ่ม PGI บุคคลของความเข้มข้นของ EO และ PGI ของแต่ละ iprodione ค่าที่คำนวณได้ถูกเมื่อเทียบกับ PGI สังเกต เสริมฤทธิ์ถูกกำหนดขึ้นเมื่อสังเกต PGI สูงกว่าคาด PGI ของส่วนผสม เมื่อค่า PGI สังเกตเท่ากับหรือต่ำกว่าที่คาดหวัง PGI, สารเติมแต่งหรือผลปฏิปักษ์ได้รับการพิจารณาตามลำดับ (Gadban 2011)
การแปล กรุณารอสักครู่..
2.4 . ฤทธิ์ต้านราซุปเป็นวิธีตรวจสอบความเข้มข้นต่ำสุดที่ยับยั้ง ( MIC ) และต่ำสุด fungicidal ความเข้มข้น ( MFC ) ของกล้อง และ ไอโพรไดโ ตาม camiletti et al . ( 2014 ) กลางเติบโตเตรียม ( 20% มันฝรั่ง lixiviated 2 % กลูโคส พีเอช 4.5 ) และโอน ( 20 มล. ) ลงในจาน Petri ขนาด 9-cm . ก่อนหน้านี้ใช้เจือจางในเอทานอลและไอโพรไดโ โซลูชั่น เพิ่มไปยังสื่อวัฒนธรรมในระดับที่ต้องการ ( ตามแต่ละ 100 L / L ) ความเข้มข้นสุดท้ายของเอทานอลไม่เคยเกิน 1 % v / v . โคโลนีเชื้อราโต 7 วันที่ 21 ◦ C ใน PDA กลางก่อนที่จะคัดกรอง 5 มิลลิเมตรเส้นผ่านศูนย์กลางวุ้นแผ่นเหล่านี้จานเลี้ยงเชื้อที่มีเชื้อราอาณานิคมถูกและใช้ในการฉีดวัคซีนโดยการรักษา การรักษาควบคุม ( C ) และจัดทำโดยเพิ่มของตัวแทนฆ่า การทดลองบ่มเป็นเวลา 7 วัน ที่ 21 ◦ C ในวัฒนธรรมที่ห้อง หลังจากบ่ม , วัดเส้นผ่าศูนย์กลางของเส้นใยและผลลัพธ์ที่ได้แสดงเป็นร้อยละของการยับยั้งการเจริญเติบโต ( PGI ) โดยใช้สมการที่อธิบายโดย camiletti et al . ( 2014 ) MFCs กำหนดเป็นความเข้มข้นต่ำสุดของออต้องบรรลุ PGI 100% ไมค์ ( PGI = 50% ) คำนวณจากเส้นโค้งที่ได้จากการถดถอยเชิงเส้น ( abbaszadeh et al . , 2014 ; camiletti et al . , 2010 )2.5 ผสมผลวิธีที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ก็ใช้เพื่อศึกษาปฏิสัมพันธ์ของระดับความเข้มข้นของกล้อง กับไอโพรไดโ . เป็นไปได้ทั้งหมด ผสมระหว่าง และไอโพรไดโเเตรียมดังนี้ 20 , 40 , 60 และ 80 % ของก่อนหน้านี้กำหนด MFCs ชั่นผสม 20 , 40 , 60 และ 80 % ของความมุ่งมั่นดำเนินงานของไอโพรไดโ . ของผสมที่เตรียมในหลอดเพนดอร์ฟ , ปริมาณที่วัดกับ micropipettes vortex ผสมในเครื่องผสม ทั้งหมด 80 ชุดทดสอบ . ข้อมูลที่แสดงเป็น PGI ได้รับและประเมินหลังจากบ่ม ( gadban 2011 ; kordali et al . , 2008 ) การวิเคราะห์การกระทำโดยใช้สองวิธี : วิธีเสริม และเจ้าอาวาส โดยวิธี ในการบวกวิธีคาด PGI ของส่วนผสมได้โดยการเพิ่ม PGI บุคคลของ EO ความเข้มข้นและ PGI บุคคลของไอโพรไดโ . คำนวณค่าเปรียบเทียบกับสังเกต PGI . ซึ่งถูกกำหนด เมื่อสังเกต PGI สูงกว่าคาดที่น่าสนใจของส่วนผสม เมื่อสังเกต PGI มูลค่าเท่ากับหรือต่ำกว่าคาด PGI , สารเติมแต่งหรือปฏิปักษ์ต่อพิจารณาตามลำดับ ( gadban , 2011 )
การแปล กรุณารอสักครู่..