Metabolite analysis of SEThe autoly

Metabolite analysis of SE
The autolysin activity of B. thuringiensis strain was evaluated by the method of Raddadi et al. (2004) with a few
modifications. Briefly, the cells grown in LB broth were harvested at OD600 1.2. The cells were washed in MES (2-Nmorpholino-ethansulfonic acid 50 mM, pH 6), resuspended in the same buffer, in potassium phosphate buffer (50 mM,
pH 6.5) or Tris–HCl (50 mM, pH 8.5) buffers and incubated at 30C without agitation. The autolytic rate was expressed
as the percentage decrease of the OD600 after 72 h. To evaluate hydrolase action of autolysins, commercially
available substrate p-nitrophenyl-N-acetyl-b-D-glucosaminide (Sigma) and respective enzyme standard (b-N-acetylglucosaminidase of Canavalia ensiformis; Sigma) was used and assayed as described previously (Tsujii et al. 1996). In brief, 100 ll supernatant of SE strain was added in 50 mM phosphate buffer at pH 6.7 and incubated at 37C for
30 min. The enzymatic reaction was initiated by adding 0.5 mM p-nitrophenyl-N-acetyl-b-D-glucosaminide and
incubated for 1 h at 37C. The reaction was stopped by adding three volumes of 1 M Na2CO3. Enzymatic activity
was quantified by measuring the absorption at 405 nm and compared with standard curve of p-nitrophenol. One unit of
hydrolase activity is defined as amount of enzyme converting 1.0 lmole of p-nitrophenyl-N-acetyl-b-D-glucosaminide to p-nitrophenol per min under the assay conditions.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิเคราะห์ metabolite ของ SEกิจกรรม autolysin ของ B. thuringiensis สายพันธุ์ถูกประเมิน โดยวิธีของ Raddadi et al. (2004) มีไม่กี่การปรับเปลี่ยน สั้น ๆ เซลล์ที่เติบโตในน้ำซุปปอนด์ถูกเก็บเกี่ยวที่ OD600 1.2 เซลล์ถูกล้างใน MES (2-Nmorpholino-ethansulfonic กรด 50 มม. pH 6), resuspended ในบัฟเฟอร์เดียวกัน ในโพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (50 มม.pH ที่ 6.5) หรือทริสเรทติ้ง – HCl (50 มม. pH 8.5) บัฟเฟอร์ และรับการกกที่ 30 C โดยไม่ก่อกวน ราคา autolytic ได้แสดงออกเป็นการลดเปอร์เซ็นต์ของ OD600 หลัง 72 ชม การประเมินการกระทำ hydrolase ของ autolysins ในเชิงพาณิชย์มีพื้นผิวที่ p-nitrophenyl-N-acetyl-b-D-glucosaminide (Sigma) และเอนไซม์แต่ละมาตรฐาน (b-N-acetylglucosaminidase ของ Canavalia ensiformis ใช้ sigma) และ assayed ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Tsujii et al. 1996) สังเขป เพิ่มใน 50 มม.ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่ pH 6.7 และรับการกกที่ 37 C สำหรับ 100 ll supernatant ของสายพันธุ์ SE30 นาที จุดเริ่มต้นของปฏิกิริยาเอนไซม์ โดยการเพิ่ม 0.5 มม. p-nitrophenyl-N-acetyl-b-D-glucosaminide และรับการกก 1 ชั่วโมงที่ 37 c ปฏิกิริยาถูกหยุด โดยการเพิ่มปริมาณสาม 1 M Na2CO3 เอนไซม์เป็นวัด โดยการวัดการดูดซึมที่ 405 nm และเมื่อเทียบกับกราฟมาตรฐานของ p-nitrophenol หนึ่งหน่วยมีกำหนดกิจกรรม hydrolase เป็นปริมาณของเอนไซม์แปลง 1.0 lmole ของ p-nitrophenyl-N-acetyl-b-D-glucosaminide p-nitrophenol ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิเคราะห์ metabolite ของ SE
กิจกรรม autolysin ความเครียด thuringiensis บีได้รับการประเมินโดยวิธีการ Raddadi et al, (2004) ที่มีไม่กี่
ปรับเปลี่ยน สั้น ๆ , เซลล์ที่ปลูกในน้ำซุป LB เก็บเกี่ยวที่ OD600 1.2 เซลล์ที่ถูกล้างใน MES (2 Nmorpholino-ethansulfonic กรดขนาด 50 มมค่า pH 6), resuspended ในบัฟเฟอร์เดียวกันในบัฟเฟอร์โพแทสเซียมฟอสเฟต (ขนาด 50 มม,
ค่า pH 6.5) หรือ Tris-HCl (ขนาด 50 มมค่า pH 8.5) บัฟเฟอร์และ บ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสโดยไม่ต้องปั่นป่วน อัตราการสลายตัวของถูกแสดงออกมา
เป็นลดลงร้อยละของ OD600 หลังจาก 72 ชั่วโมง ในการประเมินผลการดำเนินการของ hydrolase autolysins ในเชิงพาณิชย์
ตั้งต้นใช้ได้ P-Nitrophenyl-N-acetyl-BD-glucosaminide (ซิกม่า) และมาตรฐานการทำงานของเอนไซม์ที่เกี่ยวข้อง (BN-acetylglucosaminidase ของ ensiformis Canavalia; ซิกม่า) ถูกนำมาใช้และ assayed ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Tsujii et al, 1996) ในช่วงสั้น ๆ 100 LL ใสความเครียด SE ถูกเพิ่มเข้ามาในขนาด 50 มมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่ pH 6.7 และบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็น
เวลา 30 นาที ปฏิกิริยาของเอนไซม์ได้ริเริ่มขึ้นโดยการเพิ่ม 0.5 มิลลิ P-Nitrophenyl-N-acetyl-BD-glucosaminide และ
บ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส ปฏิกิริยาก็หยุดโดยการเพิ่มสามเล่ม 1 เมตร Na2CO3 เอนไซม์
ที่ถูกวัดโดยการวัดการดูดซึมที่ 405 นาโนเมตรและเมื่อเทียบกับเส้นโค้งมาตรฐานของ P-nitrophenol หนึ่งหน่วยของ
กิจกรรม hydrolase ถูกกำหนดให้เป็นปริมาณของเอนไซม์แปลง 1.0 lmole ของ P-Nitrophenyl-N-acetyl-BD-glucosaminide เพื่อ P-nitrophenol ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ