QuanTAS-PCRThe quantitative PCR met

QuanTAS-PCR

The quantitative PCR method developed in this study consists of two PCR assays; a mutation-specific assay and an exon 9 copy number normalising reference assay (as already described above). For the detection of the JAK2 exon 14 V617F mutation, the mutant allele-specific competitive blocker assay amplifies only the mutant allele. The JAK2 V617F mutation PCR assay was designed complementary to the sense strand for the region framing the V617F mutation on JAK2 exon 14. It consists of three oligonucleotides. The first is a mutant allele-specific forward primer JAK2_Ex14_Mut_F: 5′-CTTACTCTCGTCTCCACAGAA-3′ (where the bold “A” marks the position of the V617F nucleotide substitution). The second is the reverse primer JAK2_Ex14_R: 5′-TTCCTTAGTCTTTCTTTGAAGCAG-3′ resulting in an amplicon that is 101 bp in length. The third is a blocker oligonucleotide with a dideoxycytidine (ddC) at its 3′ end: JAK2_Ex14_WT_Blocker_F: 5′-CTTACTCTCGTCTCCACAGA-ddC-3′ (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

quantas-pcr

วิธี PCR เชิงปริมาณการพัฒนาในการศึกษาครั้งนี้ประกอบด้วยสองตรวจ pcr; ทดสอบการกลายพันธุ์เฉพาะและทดสอบเอกซ์ซอน 9 สำเนาอ้างอิง normalizing จำนวน (ตามที่อธิบายไว้แล้วข้างต้น) การตรวจหาการกลายพันธุ์ v617f JAK2 เอกซ์ซอน 14, อัลลีลที่กลายพันธุ์เฉพาะทดสอบป้องกันการแข่งขันขยายเพียงอัลลีลที่กลายพันธุ์JAK2 v617f การกลายพันธุ์ pcr ทดสอบที่ถูกออกแบบมาประกอบกับสาระความรู้สึกสำหรับภูมิภาคกรอบการกลายพันธุ์ v617f บน JAK2 เอกซ์ซอน 14 มันประกอบด้วยสาม oligonucleotides แรกเป็นอัลลีลที่กลายพันธุ์เฉพาะ jak2_ex14_mut_f ไพรเมอร์ไปข้างหน้า: 5'-cttactctcgtctccacagaa-3 '(ในกรณีที่เป็นตัวหนา "" ตำแหน่งของเครื่องหมายทดแทน nucleotide v617f)สองคือไพรเมอร์กลับ jak2_ex14_r: 5'-ttccttagtctttctttgaagcag-3 'ผล amplicon ที่ 101 bp ในระยะเวลา ที่สามคือ oligonucleotide ป้องกันด้วย dideoxycytidine (DDC) ที่ 3 ของ 'ปลาย: jak2_ex14_wt_blocker_f: 5'-cttactctcgtctccacaga-DDC-3 (ซิก aldrich, เซนต์หลุยส์, mo, usa.)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

QuanTAS PCR

PCR วิธีเชิงปริมาณที่ได้รับการพัฒนาในการศึกษานี้ประกอบด้วยสอง PCR assays ทดสอบการกลายพันธุ์เฉพาะตัวและเป็น exon 9 สำเนาหมายเลข normalising อ้างอิงวิเคราะห์ (เป็นอธิบายไว้ข้างต้น) กำลังโคจรอยู่สำหรับการตรวจพบการกลายที่ JAK2 exon 14 V617F พันธุ์ ทดสอบแข่งขันตัวบล็อกกลายพันธุ์เฉพาะ allele ซึ่งเพียง allele กลายพันธุ์ JAK2 V617F กลายพันธุ์ PCR assay ถูกออกแบบมาเสริมให้สาระความรู้สึกสำหรับภูมิภาคที่เฟรมมีการกลายพันธุ์ V617F บน JAK2 exon 14 มันประกอบด้วย oligonucleotides สาม ครั้งแรกเป็นการกลายพันธุ์เฉพาะ allele ไปข้างหน้าพื้น JAK2_Ex14_Mut_F: 5′-CTTACTCTCGTCTCCACAGAA-3′ (ที่เป็นตัวหนา "A" เครื่องตำแหน่งของแทนนิวคลีโอไทด์ V617F) ที่สองคือ รองพื้นกลับ JAK2_Ex14_R: 5′-TTCCTTAGTCTTTCTTTGAAGCAG-3′ ผล amplicon ที่ 101 bp ความยาว ที่สามคือ oligonucleotide บล็อกกับ dideoxycytidine (ddC) ที่จุดสิ้นสุด 3′: JAK2_Ex14_WT_Blocker_F: 5′-CTTACTCTCGTCTCCACAGA-ddC-3′ (Aldrich ซิก เซนต์หลุยส์ MO สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธีการ pcr เชิงปริมาณ quantas - pcr

ที่ได้รับการพัฒนาขึ้นมาในการศึกษานี้ประกอบด้วยสอง assays pcr สอบคือมัน - เฉพาะที่และพยายามอ้างอิง normalising หมายเลข exon 9 คัดลอก(เป็นแล้วที่อธิบายข้างต้น) สำหรับการตรวจจับของคือมัน F จากอ.พระ 2 exon 14 V 617 ที่พยายาม allele - เฉพาะในการแข่งขันที่จะขยายตัวบล็อก mutant เท่านั้น allele mutant ได้F pcr สอบคือมันจากอ.พระ 2 V 617 ได้รับการออกแบบมาเพื่อเสริมจุดแข็งซึ่งกันและกันเพื่อความรู้สึกที่เกลียวสำหรับพื้นที่ที่ล้อมกรอบ V 617 F คือมันบนจากอ.พระ 2 exon 14 ประกอบด้วยสาม oligonucleotides เป็นครั้งแรกที่มี mutant allele - เฉพาะส่งต่อเชื้อปะทุจากอ.พระ 2 _ex 14 _mut_f 5 ' - cttactctcgtctccacagaa - 3 "(ที่หนา"ที่"ทำเครื่องหมายตำแหน่งของ V 617 F การทดแทน nucleotide )ที่สองคือเชื้อปะทุย้อนกลับจากอ.พระ 2 _ex 14 กับ 5 ' - ttccttagtctttctttgaagcag - 3 "ที่เป็นผลใน amplicon ที่ 101 BP ในความยาว ที่สามคือ oligonucleotide Blocker พร้อมด้วย dideoxycytidine ( DDC )ที่ 3 'ปลายของจากอ.พระ 2 _ex 14 _wt_blocker_f 5 ' - cttactctcgtctccacaga - DDC - 3 "(ซิกมา สมรภูมิ St . Louis , MO , USA )