Protein Extraction and Preparation

Protein Extraction and Preparation of Protein Hydrolysates from Rice with Low Phenylalanine Content
Aiming the introduction of rice in the phenylketonurics diet, the protein extraction and phenylalanine (Phe) removal processes were studied. For protein extraction, an enzymatic method was used and for Phe removal, a papain and an Activated Carbon (AC) were used. The influence of protein:AC ratio, type and way of using AC was tested. The efficiency of Phe removal was evaluated by second derivative spectrophotometry. The results showed that the condition which gave the highest protein extraction yield (63.4%) was that using a sample concentration of 1:10 (w/v) at a temperature of 50°C, as well as an enzyme:substrate ratio of 10:100 at a reaction time of 5 h. Activated carbon was efficient for removing Phe, leading to values above 70% for most of the samples and the best result (94.1% of Phe removal) was found for a protein:AC ratio of 1:88, using simultaneously three types of AC (20x50, 12x25, 6x12 mesh), which led to a final Phe content of 82.5 mg kg-1 of hydrolysate.
MATERIALS AND METHODS

A commercial rice flour was kindly furnished by Ferla-L. Ferenczi (São Paulo, SP, Brasil). A protease from B. licheniformis (EC 3.4.21.14) was kindly furnished by Prozyn (São Paulo, SP, Brazil). A papain (EC 3.4.22.2) was kindly furnished by AB Enzymes of Brazil (Barueri, SP, Brazil). L-pheylalanine, L-tyrosine and L-tryptophan were purchased from Sigma (St. Louis, MO, USA). Activated carbon (granulated, n. 119, 20x50, 12x25, 6x12 mesh) was purchased from Carbomafra S.A (Curitiba, PR, Brazil).

This research project was conducted from January to December, 2008, in the Laboratório de Bromatologia/Pesquisa da Faculdade de Farmácia-Universidade Federal de Minas Gerais.

Determination of the Chemical Composition of Rice Flour
The contents of moisture, protein, lipid, minerals and dietary fiber were determined according to the Association of Official Agricultural Chemists methods (AOAC, 1995). The carbohydrates were calculated by difference. The conversion factor of nitrogen to protein was 5.95 (Nielsen, 1998).

Enzymatic Extraction of Proteins
Initially, the sample was mixed with water in three different concentrations (1:3, 1:5 and 1:10, w/v) and a quantity of sodium benzoate was added to obtain a final concentration of 0.1 g 100 mL-1. After the adjustment of pH to 10.5 with a 3 mol L-1 sodium hydroxide solution, the mixture was set on an oil bath at 50°C, under stirring. The protease from Bacillus licheniformis was added at two E:S ratios (5:100 and 10:100) and the protein extraction was performed for 5 h. Then, the mixture was centrifuged at 1,700 x g for 15 min, at 25°C and between each centrifugation, the residue was washed with water (Capobiango et al., 2007). Finally, the residue was separated from the supernatant, freeze-dried (Freezone freeze-dryer, 77500 model, Labconco, Kansas City, USA) and its protein content was determined (AOAC, 1995).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

โปรตีนสกัดและการเตรียมการของ Hydrolysates โปรตีนจากข้าวมี Phenylalanine ต่ำเนื้อหาเล็งนำข้าวสารอาหาร phenylketonurics สกัดโปรตีนและกระบวนการกำจัด phenylalanine (เพ) ได้ศึกษาการ สำหรับโปรตีนสกัด วิธีเอนไซม์ในระบบการใช้ และสำหรับเพ มีเอนไซม์ปาเปนและคาร์บอน (AC) ใช้ อิทธิพลของอัตราส่วนโปรตีน: AC ชนิด และลักษณะของการใช้ AC ได้รับการทดสอบ ประสิทธิภาพการกำจัดเพถูกประเมิน โดย spectrophotometry สองแบบ ผลพบว่า เงื่อนไขที่ให้จะสูงโปรตีนสกัดผลผลิต (ร้อยละ 63.4%) มีที่ใช้อย่างเข้มข้น 1:10 (w/v) ที่อุณหภูมิ 50 องศาเซลเซียส ตลอดจนการอัตราส่วนเอนไซม์: พื้นผิวของ 10:100 ที่ปฏิกิริยาของ h. 5 คาร์บอนมากสำหรับเอาเพ นำค่าข้างต้น 70% สำหรับส่วนมากของตัวอย่าง และผลสุด (94.1% ลบเพ) พบในโปรตีน: อัตราส่วน AC 1:88, AC (20 x 50, 12 x 25, 6 x 12 ตาข่าย), ซึ่งนำไปสู่เนื้อหาเพเป็นขั้นสุดท้ายของ 1 กิโลกรัม 82.5 มิลลิกรัมของด้วย กันสามชนิดโดยใช้วัสดุและวิธีการแป้งข้าวเพื่อการค้าได้กรุณาโดย Ferla L. Ferenczi (เซาเปาลู SP, Brasil) รติเอสจากเกิด licheniformis (EC 3.4.21.14) กรุณาตกแต่ง โดย Prozyn (เซาเปาลู SP บราซิล) พาเพอิน (EC 3.4.22.2) ได้กรุณาโดย AB เอนไซม์ของบราซิล (Barueri, SP บราซิล) L pheylalanine, L tyrosine และทริปโตเฟน L ซื้อจากซิก (St. Louis, MO สหรัฐอเมริกา) คาร์บอน (119 ตอนเหนือ ทราย 20 x 50, 12 x 25, 6 x 12 ตาข่าย) ถูกซื้อจากเอสเอ Carbomafra (Curitiba, PR บราซิล)โครงการวิจัยนี้ได้ดำเนินการจากเดือนมกราคมถึงธันวาคม 2551 ในเดอกลางดา Faculdade de Farmácia Universidade de Laboratório Bromatologia/Pesquisa Minas Geraisกำหนดองค์ประกอบทางเคมีของแป้งข้าวเจ้าเนื้อหาของความชื้น โปรตีน ไขมัน เกลือแร่ และใยอาหารถูกกำหนดตามวิธีการสมาคมของทางเกษตรนักเคมี (AOAC, 1995) คาร์โบไฮเดรตถูกคำนวณ โดยความแตกต่าง ตัวแปลงหน่วยนับของไนโตรเจนกับโปรตีนถูก 5.95 (นีล 1998)โปรตีนสกัดเอนไซม์ในระบบเริ่มแรก ตัวอย่างถูกผสมน้ำสามแตกต่างความเข้มข้น (1:3, 1:5 และ 1:10, w/v) และมีเพิ่มปริมาณของโซเดียม benzoate เพื่อให้ได้ความเข้มข้นสุดท้ายของ 0.1 g 100 mL-1 หลังจากการปรับปรุง pH 10.5 กับโมล 3 โซลูชันโซเดียมไฮดรอกไซด์ L 1 ส่วนผสมถูกตั้งค่าบนการน้ำน้ำมันที่ 50 องศาเซลเซียส ภายใต้กวน รติเอสจาก licheniformis คัดเข้ามาที่สองอัตรา E:S (5:100 และ 10:100) และทำการสกัดโปรตีนสำหรับ 5 h แล้ว ส่วนผสมถูก centrifuged ที่ 1700 x g สำหรับ 15 นาที ที่ 25° C และระหว่างแต่ละ centrifugation สารตกค้างถูกล้าง ด้วยน้ำ (Capobiango et al., 2007) สุดท้าย สารตกค้างถูกแยกออกจาก supernatant อบแห้ง (หยุดเป่า Freezone, 77500 รุ่น Labconco แคนซัสซิตี้ สหรัฐอเมริกา) และกำหนดเนื้อหาโปรตีน (AOAC, 1995)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสกัดโปรตีนและการเตรียมโปรตีนจากข้าวของ phenylalanine ต่ำเนื้อหา
เบื้องต้นของข้าวใน phenylketonurics อาหารเล็ง , การสกัดโปรตีนและ phenylalanine ( เพ ) กระบวนการกำจัดที่แตกต่างกัน สำหรับการสกัดโปรตีน , เอนไซม์ และใช้ในการกำจัดเพ , ปาเปนและคาร์บอน ( AC ) สถิติที่ใช้ อิทธิพลของอัตราส่วนโปรตีน : AC ,ประเภทและวิธีการที่ใช้ AC ถูกทดสอบ ประสิทธิภาพในการกำจัดเพถูกประเมินโดยวิธีอนุวินาที . ผลการศึกษาพบว่าสภาวะที่ให้ผลผลิตสูงสุดในการสกัดโปรตีน ( 63.4 % ) คือ การใช้ตัวอย่างที่ความเข้มข้น 1 : 10 ( w / v ) ที่อุณหภูมิ 50 องศาซี รวมทั้งเอนไซม์ : อัตราส่วนสาร 10:100 ในปฏิกิริยาเวลา 5 ชั่วโมงคาร์บอนมีประสิทธิภาพสำหรับการลบเพ นำไปสู่ค่านิยมสูงกว่า 70% ของกลุ่มตัวอย่างส่วนใหญ่ และได้ผลดีที่สุด ( ร้อยละของการกำจัดเพ ) พบโปรตีนต่อ AC ของ 1:88 ใช้พร้อมกันสามชนิดของ AC ( 20x50 12x25 6x12 , , ตาข่าย ) ซึ่งนำไปสู่เนื้อหาเพ สุดท้ายของ kg-1 82.5 มก. ไฮโดรไลเซท

.
วัสดุและวิธีการโฆษณาข้าวแป้ง ferla-l. กรุณาตกแต่งโดยferenczi ( เซาเปาลู SP , บราซิล ) เป็นโปรตีเอสจาก B . licheniformis ( EC 3.4.21.14 ) คือกรุณาตกแต่งด้วย prozyn ( เซาเปาลู , SP , ประเทศบราซิล ) เป็นเอนไซม์ปาเปน ( EC 3.4.22.2 ) คือกรุณาตกแต่งโดย AB เอนไซม์ของบราซิล Barueri , SP , ประเทศบราซิล ) l-pheylalanine - แอล ไทโรซีน , และซื้อมาจาก Sigma ( St . Louis , MO , USA ) คาร์บอนกัมมันต์ ( ทราย ) 20x50 12x25 119 , , ,6x12 ตาข่าย ) ซื้อมาจาก carbomafra s ( Curitiba , พีอาร์ , บราซิล ) .

โครงการวิจัยนี้ดำเนินการตั้งแต่เดือนมกราคม - ธันวาคม 2551 ใน laborat óริโอ เดอ bromatologia / ันดา faculdade เดอฟาร์ม . kgm ซีไอเอมหาวิทยาลัยรัฐมีนัสเชไรส์

หาองค์ประกอบทางเคมีของแป้งข้าวเจ้า
ปริมาณความชื้น โปรตีน ไขมันแร่ธาตุ และใยอาหาร พบว่าตามที่สมาคมวิธีการอย่างเป็นทางการนักเคมีเกษตร ( โปรตีน , 1995 ) คาร์โบไฮเดรตที่ถูกคำนวณจากผลต่าง ปัจจัยการเปลี่ยนแปลงของไนโตรเจนในโปรตีน 5.95 ( Nielsen , 1998 ) .

เอนไซม์การสกัดโปรตีน
ตอนแรก ตัวอย่างที่ผสมกับน้ำใน 3 ระดับความเข้มข้น ( 1 : 3 , 1 : 5 และ 1 : 10w / v ) และปริมาณของโซเดียมเบนโซเอต ได้เพิ่ม เพื่อให้ได้ความเข้มข้นสุดท้าย 0.1 กรัม 100 แน่นอน . หลังจากปรับ pH 10.5 กับ 3 โมล L-1 สารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ ผสมไว้ในน้ำมัน 50 ° C ในการกวน ส่วนโปรติเอสจาก Bacillus licheniformis เพิ่ม 2 E : s ( และต่อเติม 10:100 ) และการสกัดโปรตีนแสดงเป็นเวลา 5 ชั่วโมงแล้วส่วนผสมคือระดับที่ 1 , 700 x G สำหรับ 15 นาที ที่อุณหภูมิ 25 ° C และระหว่างแต่ละปั่นที่เหลือก็ล้างด้วยน้ำ ( capobiango et al . , 2007 ) สุดท้ายที่เหลือคือแยกออกจากน่าน ( ฟรีโซนแช่แข็งแห้ง , เครื่องเป่า , 77 , 500 รุ่น แล็บคอนโก้ , แคนซัสซิตี , สหรัฐอเมริกา ) และปริมาณโปรตีนของตั้งใจ ( โปรตีน , 1995 )