The nitrocellulose membranes were b

The nitrocellulose membranes were blocked in 5% Blotto (5% nonfat dry milk, 0.1% Triton X-100 in PBS), and incubated in each conditioned medium from a hybridoma culture at a 1:20 dilution in 5% Blotto for 4 h. After extensive washing in 0.5% Blotto, the membrane was incubated with horseradish peroxidase labeled goat anti-mouse gamma immunoglobulin heavy and lightchain specific antibody (GAM-HRP, Bio-Rad, Hercules, CA, USA) at a 1:1500 dilution for 3 h. The membrane was washed again in 0.5% Blotto, and incubated for 5 min in a substrate mixture containing 0.03% diaminobenzidine (DAB), 0.006% hydrogen peroxide, and 0.05% cobalt chloride in PBS. Prestain molecular weight markers (Bio-Rad) were used as standards.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เยื่อ nitrocellulose ถูกบล็อกใน 5% เมา (5% ไม่มีน้ำมันนมแห้ง, 0.1% Triton X-100 ในพีบีเอส) และบ่มในแต่ละสื่อปรับอากาศจากการเพาะเลี้ยงไฮบริ ณ 01:20 เจือจางใน 5% เมา 4 ชั่วโมง หลังจากล้างอย่างกว้างขวางใน 0.5% เมา, เมมเบรนที่ถูกบ่มกับมะรุม peroxidase ที่มีป้ายกำกับแพะต่อต้านเมาส์แกมมาอิมมูโนหนักและแอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจง lightchain (GAM-HRP, Bio-Rad, Hercules, CA, USA) ที่ 1: 1,500 เจือจาง 3 ชั่วโมง เมมเบรนถูกล้างอีกครั้งใน 0.5% เมาและบ่มเป็นเวลา 5 นาทีในส่วนผสมสารตั้งต้นที่มี diaminobenzidine 0.03% (DAB) 0.006% ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์และ 0.05% โคบอลต์คลอไรด์ในพีบีเอส Prestain น้ำหนักโมเลกุลเครื่องหมาย (Bio-Rad) ถูกนำมาใช้เป็นมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เยื่อ nitrocellulose ถูกปิดกั้นใน 5% Blotto โต้ (นมแห้ง5% ไม่มีไขมัน, ๐.๑% ไทรทัน X-๑๐๐ใน PBS), และ incubated ในแต่ละสื่อที่ปรับจากวัฒนธรรม hybridoma ในการเจือจาง1:20 ใน 5% Blotto โต้สำหรับ 4 h. หลังจากการซักผ้าที่กว้างขวางใน๐.๕% blotto, เมมเบรนถูก incubated กับฮอสแรดิชฮอสที่มีชื่อว่าแพะป้องกันเมาส์แกมมาอิมมูโนหนักและ lightchain ที่เฉพาะเจาะจงแอนติบอดี (GAM-hrp, ชีวภาพ-Rad, ดาว, CA, สหรัฐอเมริกา) ที่ลดการ1:1500 สำหรับ3ชั่วโมง เมมเบรนถูกล้างอีกครั้งใน๐.๕% Blotto โต้, และ incubated 5 นาทีในส่วนผสมพื้นผิวที่ประกอบด้วย๐.๐๓% diaminobenzidine (DAB), ๐.๐๐๖% ไฮโดรเจนเพอร์ออกไซด์, และ๐.๐๕% โคบอลต์คลอไรด์ใน PBS. เครื่องหมายน้ำหนักโมเลกุล prestain (ไบโอ-Rad) ถูกนำมาใช้เป็นมาตรฐาน. ...

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ฟิล์มไนโตรเซลลูโลสถูกปิดใน 5-เปอร์เซ็นต์ของไขมันต่ำนมผง 0.1 เปอร์เซ็นต์ triton x-100 ใน PBS และเจือจางใน 1-85820-20 ในวัฒนธรรมเนื้องอกลูกผสมที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในการล้างฟิล์มป้องกันรังสีแกมมาแอนติบอดีต่อโปรตีนจากแพะ ฟิล์มถูกล้างอีกครั้งในพิมพ์ 0.5 เปอร์เซ็นต์และมี 0.03 เปอร์เซ็นต์ของ DAB 、 DAB 、 DAB 、 DA050 、โคบอลต์เปอร์ออกไซด์และส่วนผสมของไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์และโคบอลต์ใน PBS น้ำหนักโมเลกุลเครื่องหมายไบโอเรย์เป็นมาตรฐาน