AbstractThe emergence of resistant

Abstract

The emergence of resistant HIV strains, together with the severe side-effects of existing drugs and lack of development of effective anti-HIV vaccines highlight the need for novel antivirals, as well as innovative methods to facilitate their discovery. Here, we have developed an assay in T-cells to monitor the proteolytic activity of the HIV-1 protease (PR). The assay is based on the inducible expression of HIV-1 PR fused within the Gal4 DNA-binding and transactivation domains. The fusion protein binds to the Gal4 responsive element and activates the downstream reporter, enhanced green fluorescent protein (eGFP) gene only in the presence of an effective PR Inhibitor (PI). Thus, in this assay, eGFP acts as a biosensor of PR activity, making it ideal for flow cytometry based screening. Furthermore, the assay was developed using retroviral technology in T-cells, thus providing an ideal environment for the screening of potential novel PIs in a cell-type that represents the natural milieu of HIV infection. Clones with the highest sensitivity, and robust, reliable and reproducible reporter activity, were selected. The assay is easily adaptable to other PR variants, a multiplex platform, as well as to high-throughput plate reader based assays and will greatly facilitate the search for novel peptide and chemical compound based PIs in T-cells.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

บทคัดย่อการเกิดขึ้นของเอชไอวีสายพันธุ์ที่ทนพร้อมกับผลข้างเคียงที่รุนแรงของยาเสพติดที่มีอยู่และการขาดการพัฒนาวัคซีนป้องกันเอชไอวีที่มีประสิทธิภาพเน้นความจำเป็นในการต้านไวรัสใหม่เช่นเดียวกับวิธีการใหม่ในการอำนวยความสะดวกในการค้นพบของพวกเขา ที่นี่เราได้มีการพัฒนาในการทดสอบ T-เซลล์ในการตรวจสอบกิจกรรมโปรตีนของโปรติเอสเอชไอวี 1 (PR) การทดสอบจะขึ้นอยู่กับการแสดงออก inducible ของเชื้อ HIV-1 ประชาสัมพันธ์หลอมละลายภายในดีเอ็นเอผูกพัน GAL4 และโดเมน transactivation โปรตีนฟิวชั่นผูกกับ GAL4 องค์ประกอบตอบสนองและเปิดใช้งานนักข่าวปลายน้ำเพิ่มโปรตีนเรืองแสงสีเขียว (EGFP) ยีนเพียง แต่ในการปรากฏตัวของการประชาสัมพันธ์ที่มีประสิทธิภาพยับยั้ง (PI) ดังนั้นในการทดสอบนี้ EGFP ทำหน้าที่เป็นไบโอเซนเซอร์ของกิจกรรมประชาสัมพันธ์ทำให้มันเหมาะสำหรับการไหลของการตรวจคัดกรองตามภูมิคุ้มกัน นอกจากนี้การทดสอบได้รับการพัฒนาโดยใช้เทคโนโลยีไวรัสในเซลล์ T-จึงให้สภาพแวดล้อมที่เหมาะสำหรับการคัดกรองของนวนิยายที่มีศักยภาพ PIs ในเซลล์ชนิดที่แสดงถึงสภาพแวดล้อมที่เป็นธรรมชาติของการติดเชื้อเอชไอวี โคลนที่มีความไวสูงที่สุดและมีประสิทธิภาพกิจกรรมนักข่าวที่เชื่อถือได้และทำซ้ำได้รับการคัดเลือก ผลการวิเคราะห์ได้อย่างง่ายดายปรับให้เข้ากับสายพันธุ์ประชาสัมพันธ์อื่น ๆ แพลตฟอร์มหลาย, เช่นเดียวกับการอ่านแผ่นสูงผ่านการตรวจและจะช่วยอำนวยความสะดวกในการค้นหานวนิยายเปปไทด์และสารเคมีที่ใช้ในปิ T-เซลล์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

นามธรรม

การป้องกันเอชไอวีสายพันธุ์ ด้วยกันกับผลข้างเคียงที่รุนแรงของยาเสพติดที่มีอยู่ และขาดการพัฒนาที่มีประสิทธิภาพต่อต้านวัคซีน HIV ที่จำเป็นสำหรับยาต้านใหม่ เป็นวิธีใหม่ที่จะอำนวยความสะดวกในการค้นพบของพวกเขา ที่นี่ เราได้พัฒนาไปใช้ในเซลล์เพื่อตรวจสอบกิจกรรมจำเพาะของเอนไซม์โปรตีเอส 1 ( PR )( ขึ้นอยู่กับการแสดงออก inducible ของ HIV-1 PR ฟิวส์ภายใน gal4 ดีเอ็นเอมัด และ transactivation โดเมน ส่วนของโปรตีนที่ผูกกับ gal4 ตอบสนององค์ประกอบและกระตุ้นผู้สื่อข่าวได้รับการเพิ่มโปรตีนเรืองแสงสีเขียว ( egfp ) ยีนต่อหน้าสารประชาสัมพันธ์มีประสิทธิภาพเท่านั้น ( PI ) ดังนั้นในการทดสอบนี้ egfp ทำหน้าที่เป็นไบโอเซนเซอร์ของกิจกรรมประชาสัมพันธ์ทำให้เหมาะสำหรับการไหลพื้นฐาน ( คัดกรอง นอกจากนี้ การทดสอบถูกพัฒนาโดยใช้เทคโนโลยี retroviral ในเซลล์จึงให้สภาพแวดล้อมที่เหมาะสำหรับการคัดกรองศักยภาพของนวนิยาย Pis ในเซลล์ชนิดที่แสดงถึงธรรมชาติที่สวยงามของการติดเชื้อเอชไอวี โคลนที่มีความไวสูง และทนทาน เชื่อถือได้ และกิจกรรม , นักข่าวซึ่งได้รับเลือก( สามารถใช้กับตัวแปรอื่นๆ ประชาสัมพันธ์ เป็นแพลตฟอร์มระบบมัลติเพล็กซ์ ตลอดจนช่วยอ่านป้ายตามวิธีและจะช่วยอำนวยความสะดวกในการค้นหาเปปไทด์และสารเคมีที่ใช้ในนวนิยายด้านผิวหนัง .