Materials and methodsThe formalin-f

Materials and methods
The formalin-fixed tissue was embedded in paraffin and 5-µm sec-tions
(n = 5) were placed onto a specifically designed 1- to 3-µm-thick
stretched polyethylene membrane which was mounted onto a
glass slide and fixed with nail polish (Fig. 4). After heating the
slide for 1 h at 40 °C and deparaffinising in xylol for only 1 min in
order to avoid detachment of the section, routine hematoxylin and
eosin (HE) staining was performed. The membrane-tissue unit was
then placed upside-down on a 0.17-mm-thick glass slide. The
chorionic villi and control areas from the decidua were dissected
with a 337-nm-pulsed laser microbeam coupled with a micro-scope.
The dissected pieces of the support membrane with the at-tached
chorionic villi were pierced with a 30-gauge needle and
transferred into a PCR tube using a computer-controlled microma-nipulator
(Fig. 5)
The tissue was digested for 3 h at 56 °C using a standard lysis
buffer and proteinase K (2 mg/ml). After digestion the enzyme was
heat-inactivated for 10 min at 95 °C and the extract was directly
used for PCR.
In a second assay five sections were mounted on glass slides
and stained with HE. The villi-containing region (2 ×2 mm) was
manually cut out, placed in Tris buffer and boiled in the mi-crowave
for 1 min. After removing the paraffin and centrifugation,
the supernatent was digested with proteinase K.
DNA from a blood sample obtained during autopsy of the vic-tim
and from a blood sample taken from a suspect was isolated us-ing
standardised chelex extraction.
PCR was performed using the PCR amplification kits
AmpFlSTR Profiler and Profiler Plus (Perkin Elmer) on a Ge-neAmp
PCR System 2400 (Perkin Elmer). PCR conditions were as
recommended by the manufacturer except that the cycle number
was increased to 35 instead of 28, to enhance sensitivity. Of the
DNA extracted from the chorionic villi and the decidual tissue,
10 µl was used, corresponding to about 50–100 cells, in a reaction
volume of 25 µl.
Electrophoresis and analysis of the amplification products were
carried out on an ABI Prism 310 Genetic analyzer using GeneScan
Analysis 2.1. software.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการเนื้อเยื่อถาวร formalin ถูกฝังในพาราฟินและ 5 µm วินาที-tions(n = 5) ถูกวางลงบนออกแบบมาโดยเฉพาะ 1 - การ 3-µm-หนายืดเยื่อพลาสติกที่ถูกติดตั้งลงในตัวสไลด์แก้ว และถาวร ด้วยน้ำยาทาเล็บ (Fig. 4) หลังจากความร้อนภาพนิ่งสำหรับ h 1 ที่ 40 ° C และ deparaffinising ใน xylol สำหรับเพียง 1 นาทีในสั่งเพื่อหลีกเลี่ยงการถอดลูกกุญแจส่วน hematoxylin ประจำ และทำการย้อมสี eosin (เขา) มีหน่วยเนื้อเยื่อเมมเบรนจากนั้น วางคว่ำลงบนสไลด์แก้วหนา 0.17 มม. ที่dissected chorionic villi และพื้นที่ควบคุมจาก deciduaมีการ microbeam เลเซอร์ 337-nm-สูงควบคู่กับไมโครขอบเขตการชิ้น dissected ของเมมเบรนสนับสนุนกับการที่-tachedchorionic villi ถูก pierced กับเข็มวัด 30 และเป็นหลอด PCR โดยใช้การควบคุมคอมพิวเตอร์ microma-nipulator(Fig. 5)เนื้อเยื่อถูกต้องสำหรับ 3 h ที่ 56 ° C ใช้ lysis มาตรฐานบัฟเฟอร์และ proteinase K (2 mg/ml) หลังจากย่อยอาหารเอนไซม์นี้ได้ความร้อนยกเลิกสำหรับ 10 นาทีที่ 95 ° C และการดึงข้อมูลได้โดยตรงใช้สำหรับ PCRในการทดสอบสอง ส่วนห้าถูกติดตั้งบนกระจกสไลด์และทิ้งคราบกับเขา เป็นภูมิภาคที่ประกอบด้วย villi (2 × 2 mm)ด้วยตนเองตัดออก วางในบัฟเฟอร์ทริสเรทติ้ง และต้มใน mi-crowaveใน 1 นาที หลังจากเอาพาราฟินและ centrifugationsupernatent ถูกต้อง ด้วย proteinase คุณดีเอ็นเอจากตัวอย่างเลือดที่ได้รับระหว่างการชันสูตรพลิกศพของวิคตอเรียทิมและจากเลือด ตัวอย่างที่นำมาจากผู้ต้องสงสัยถูกแยกเรา-ไอเอ็นจีchelex แบบแยกทำ PCR โดยใช้ชุดขยาย PCRAmpFlSTR ตัวสร้างโพรไฟล์และตัวสร้างโพรไฟล์ บวก (เพอร์เอลเมอ) บน Ge-neAmpระบบ PCR 2400 (เพอร์เอลเมอ) เงื่อนไข PCR ได้เป็นแนะนำ โดยผู้ผลิตยกเว้นที่จำนวนรอบขึ้นไป 35 แทน 28 เพื่อเพิ่มความไว ของดีเอ็นเอที่สกัดจากใบ chorionic villi และเนื้อเยื่อ decidual10 µl ใช้ ตรงไปประมาณ 50-100 เซลล์ การตอบสนองปริมาณ 25 µlElectrophoresis และวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์ขยายดำเนินการในการวิเคราะห์ลักชัวรี่ปริซึม 310 พันธุกรรมโดยใช้ GeneScan2.1 วิเคราะห์ ซอฟต์แวร์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
ฟอร์มาลินคงเนื้อเยื่อที่ถูกฝังอยู่ในพาราฟินและ 5 ไมครอนวินาที-tions
(n = 5) ถูกวางไว้บนที่ออกแบบมาโดยเฉพาะ 1 ถึง 3 ไมครอนหนา
เยื่อหุ้มพลาสติกยืดซึ่งได้รับการติดตั้งลงบน
สไลด์แก้วและคงที่ กับยาทาเล็บ (รูปที่. 4) หลังจากที่ความร้อน
สไลด์เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ 40 องศาเซลเซียสและใน deparaffinising xylol เพียง 1 นาทีใน
การสั่งซื้อเพื่อหลีกเลี่ยงการออกของส่วนประจำ hematoxylin และ
Eosin (HE) การย้อมสีที่ได้ดำเนินการ หน่วยเยื่อเนื้อเยื่อถูก
แล้ววางคว่ำลงบนสไลด์แก้ว 0.17 มิลลิเมตรหนา
chorionic villi และพื้นที่การควบคุมจากผนังมดลูกที่ถูกชำแหละ
ด้วยเลเซอร์ microbeam 337 นาโนเมตร-ชีพจรควบคู่กับไมโครขอบเขต.
ชำแหละชิ้นส่วนของเมมเบรนที่มีการสนับสนุนที่เสียบลงในเครื่อง
chorionic villi ถูกแทงด้วยเข็ม 30 วัดและ
โอนเข้าหลอด PCR โดยใช้คอมพิวเตอร์ควบคุม microma-nipulator
(รูปที่. 5)
เนื้อเยื่อถูกย่อยเป็นเวลา 3 ชั่วโมงที่ 56 องศาเซลเซียสโดยใช้มาตรฐานสลาย
บัฟเฟอร์และโปร K (2 mg / ml) หลังจากการย่อยของเอนไซม์ที่ถูก
ความร้อนใช้งานเป็นเวลา 10 นาทีที่ 95 องศาเซลเซียสและสารสกัดโดยตรงถูก
ใช้สำหรับการ PCR.
ในการทดสอบที่สองห้าส่วนที่ถูกติดตั้งอยู่บนสไลด์แก้ว
และย้อมด้วย ฯพณฯ ภูมิภาคที่มี villi (2 × 2 มิลลิเมตร) ถูก
ตัดออกด้วยตนเองที่วางไว้ในบัฟเฟอร์ Tris และต้มในไมล์ crowave
เวลา 1 นาที หลังจากลบพาราฟินและหมุนเหวี่ยง
supernatent ถูกย่อยด้วยเอนไซม์เค
ดีเอ็นเอจากตัวอย่างเลือดที่ได้รับในระหว่างการชันสูตรศพของ vic-ทิม
และจากตัวอย่างเลือดที่นำมาจากผู้ต้องสงสัยที่แยกเราไอเอ็นจี
สกัด chelex มาตรฐาน.
PCR ได้รับการดำเนินการโดยใช้ ขยาย PCR ชุด
AmpFlSTR Profiler และ Profiler พลัส (Perkin Elmer) ใน Ge-neAmp
PCR ระบบ 2400 (Perkin Elmer) เงื่อนไข PCR เป็นถูก
แนะนำโดยผู้ผลิตยกเว้นว่าจำนวนวงจร
เพิ่มขึ้นเป็น 35 แทน 28 เพื่อเพิ่มความไว ของ
ดีเอ็นเอที่สกัดจาก chorionic villi และเนื้อเยื่อนี้พบ,
10 ไมโครลิตรถูกนำมาใช้ที่สอดคล้องกับประมาณ 50-100 เซลล์ในปฏิกิริยา
ปริมาณ 25 ไมโครลิตร.
Electrophoresis และการวิเคราะห์ของผลิตภัณฑ์ขยายได้
ดำเนินการในปริซึม ABI 310 พันธุกรรม วิเคราะห์โดยใช้ Genescan
วิเคราะห์ 2.1 ซอฟต์แวร์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการ
ซ่อมเนื้อเยื่อฝังในพาราฟิน ฟอร์มาลิน และ 5 - µ M วินาทียินดีด้วย
( n = 5 ) ถูกวางลงบนที่ออกแบบมาเฉพาะ 1 - 3 - µ m-thick
ยืดพลาสติกซึ่งถูกติดตั้งลงบนแผ่นสไลด์แก้ว
และคงที่ ด้วยยาทาเล็บ ( รูปที่ 4 ) หลังจากร้อน
สไลด์ 1 H ที่ 40 ° C และ deparaffinising ใน xylol เพียง 1 นาที
เพื่อหลีกเลี่ยงการปลดของส่วนย้อมตามปกติและ
โอซิน ( เขา ) การกำหนด เมมเบรนเยื่อหน่วย
แล้ววางคว่ำลงบน 0.17-mm-thick แก้วเลื่อน
ไร้อารยธรรม และควบคุมพื้นที่จากเยื่อบุโพรงมดลูกถูกตัด
กับ 337 nm พัลส์เลเซอร์ microbeam ควบคู่กับขอบเขตของไมโคร
ชำแหละชิ้นส่วนของเยื่อที่ tached
สนับสนุนกับไร้อารยธรรมถูกแทงด้วยเข็ม 30 วัดและ
ถ่ายโอนลงในหลอด PCR โดยใช้คอมพิวเตอร์ควบคุม microma nipulator
( รูปที่ 5 )
3 H ย่อยเนื้อเยื่อที่ 56 องศา C โดยใช้มาตรฐานการสลาย
บัฟเฟอร์ และโปรตีน K ( 2 mg / ml ) หลังจากการย่อยเอนไซม์ถูกยับยั้งสำหรับ 10
ความร้อน นาทีที่ 95 องศา C และสารสกัดโดยตรง

ใช้ PCRในการทดสอบที่สองห้าส่วนติดบนกระจกสไลด์และ
เปื้อนเขา โดยวิไลที่มีเขต ( 2 × 2 มิลลิเมตร ) คือ
ตนเองตัดวางในทริสบัฟเฟอร์และต้มในมิ crowave
1 นาทีหลังจากถอดพาราฟินและ 3
, supernatent ถูกย่อยด้วยน้ำย่อยโปรตีน K .
ดีเอ็นเอจากตัวอย่างเลือดที่ได้รับในระหว่างการชันสูตรศพของวิคทิม
และจากตัวอย่างเลือดที่นำมาจากผู้ต้องสงสัยแยกเราไอเอ็นจีมาตรฐานการสกัด chelex
.
PCR คือการใช้ PCR ( ชุด
ampflstr พลัส ( เพอร์กินเอลเมอร์และนักวิเคราะห์นักวิเคราะห์ ) ใน GE neamp
) 2400 ( เพอร์กินเอลเมอร์ระบบ ) เงื่อนไข PCR เป็น
แนะนำโดยผู้ผลิตยกเว้นรอบหมายเลข
เพิ่มขึ้นเป็น 35 แทน 28 , เพื่อเพิ่มความไว ของ
ดีเอ็นเอที่สกัดจากเนื้อเยื่อผนังมดลูกและวิไล chorionic
10 , µผมใช้ที่ประมาณ 50 – 100 เซลล์ ในปฏิกิริยาปริมาตร 25 ลิตร

µ electrophoresis และการวิเคราะห์ของผลิตภัณฑ์โดยการเพิ่มจำนวน
ดําเนินการเกี่ยวกับ ABI 310 เครื่องวิเคราะห์โดยใช้การวิเคราะห์พันธุกรรมปริซึม genescan
2.1 . ซอฟต์แวร์